3-(吡啶-2)-4-(喹啉-4)吡唑的结构-性能相关的量子化学研究

采用AM1和Ab Initio DFT方法,对3-(吡啶-2)-4-(喹啉-4)-吡唑(PQP) 进行了量子化学计算,给出了分子的几何构型、前沿分子轨道组成与能级、前沿轨道电子密度、原子的净电荷、键级等参数.结果表明PQP分子的稳定构型呈蝴蝶状,分子中的所有N原子和C18、C21等原子很可能是它与TβR-I作用时的活性位点.

转化生长因子β信号系统在胆囊癌发病及预后中的研究

目的探讨TGF-β1、TβRI与胆囊癌细胞增殖和细胞周期的关系，分析其在胆囊癌发病中的机理，评价其对胆囊癌预后的价值。方法用免疫组化对原发性胆囊癌及胆囊腺瘤、慢性胆囊炎行TGF-β1、TβRI、PCNA、CyclinE检测，对胆囊癌患者进行随访。结果胆囊癌TGF-β1阳性表达率57．14％，显著高于胆囊腺瘤、胆囊炎（P均小于0．01），TGF—β1阳性表达率在Nevin分期和是否伴淋巴结及远处转移患者中，有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01），TGF-β1阳性表达率与PCNALI和cyclinE阳性率呈正相关（r=0．5232，P=0．0013；r=0．4065，P=0．0154）。胆囊癌中TβRI阳性表达率34．29％，显著低于胆囊腺瘤、胆囊炎（P均小于0．05）。伴淋巴结和远处转移者，TβRI阳性表达率明显低于无转移者（P〈0．05），TβRI阳性表达率与PCNALI呈负相关（r=-0．4024，P=0．0166）。TGF-β1和TβRI与预后密切相关，TGF—β1表达阳性者预后要比阴性者差，TβRI表达阳性者预后要比阴性者好，两者统计学均有显著性差异（P〈0．01，P〈0．05）。结论TGF-β1、TβRI与胆囊癌细胞增殖和细胞周期关系密切，是判断胆囊癌发生发展的重要生物学标志。TβRI低表达而导制TGF-β1负性生长调控作用的逃逸，以及TGF-β1的促肿瘤形成作用，可能是胆囊癌变过程中的重要机制。TGF-β1和TβRI是判断胆囊癌预后的良好指标。

细粒棘球蚴TGF-βⅠ型受体全长和胞内域酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定

目的构建细粒棘球绦虫（Eg）转化生长因子I型受体（EgTβRI）全长及胞内域酵母双杂交真核表达载体，愉测重组诱饵质粒对酵母菌株的毒性作用及自激活活性。方法采用TRIzol法提取细粒棘球蚴总RNA；采用RT—PCR扩增EgTβRI全长基因及EgTβRI胞内域（EgTβRIintracellulardomain，EgTβRII）基因片段，分别构建pGBKT7-EgTβRI和pGBKT7-EgTβRI—I真核表达载体，经PCR、限制性酶切鉴定及序列测定正确后，PEG／LiAc法转化人酵母菌株，检测诱饵蛋白对酵母菌的毒性作用及其自激活活性。结果成功构建了pGBKT7-EgTβRI及pGBKT7EgTβRI—I真核表达载体，经双酶切，分别得到1662bp和1314bp目的基因片段，大小与预测值相符。两重组质粒转化Y2HGold酵母菌形成的菌落与pGBKT7质粒转化酵母菌菌落大小一致，直径为1．5～2．0mm；两重组质粒转化酵母菌在SD／Trp／X／A平板上无蓝色菌落生长，在SD／-Trp平板上形成直径为2mill的菌落。结论成功构建了pGBKT7-EgTβRI及pGBKT7-EgTβRI—I真核表达载体，其表达蛋白对Y2HGold酵母菌无毒性作刷和无自激活活性；该表达载体可以用于酵母双杂交系统，为进一步研究EgTβRI与其配体之间的交互作用奠定了基础。

加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织TGFβ1受体Ⅰ、Ⅱ表达的影响

目的观察加味四逆散对肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）大鼠转化生长因子β1受体Ⅰ、Ⅱ（TβRⅠ，TβRⅡ）表达的影响，探讨加味四逆散抗HF的疗效和可能的作用机制。方法采用四氯化碳（CCl4）皮下注射和自由饮用酒精的方法制备大鼠肝纤维化模型。将造模成功大鼠按照随机排列区组法分组，病理模型组（B组）、复方鳖甲软肝片组（C组）、加味四逆散组（D）各10只。A组与B组给予生理盐水2ml／只，C组、D组分别给予复方鳖甲软肝片0．625g／kg、加味四逆散药液15．625g／kg灌胃，1次／d，连续用药8周。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响，除A组外，其余各组于用药开始后仍每周注射40％CCl4植物油3ml／kg（体重）1次。以复方鳖甲软肝片为阳性对照组，用免疫组织化学方法检测TβRⅠ，TβRⅡ的表达。观察大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、肝纤维化TβRⅠ、TβRⅡ的变化。结果大鼠TβRⅠ、TβRⅡ的表达，与病理组[（16．63±2．69）％、（14．57±1．09）％]比较，加味四逆散组均降低[分别为（8．09±0．71）％、（6．51±0．48）％]，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；加味四逆散组与复方鳖甲软肝片组的效果相当（P〉0．05）。结论加味四逆散可抑制TβRⅠ、TβRⅡ的表达，并影响受体与TGFβ1的结合。

林蛙油的雌激素样作用研究

本文探讨了林蛙油对生长、激素水平及性腺激素受体表达的影响。采用雌性昆明小鼠24只,随机分为高剂量组、低剂量组和空白组。给药组灌胃林蛙油,空白组灌胃生理盐水。给药结束后,取各组小鼠的卵巢、子宫及肾上腺称湿重,并对其组织切片进行了病理形态学观察,取血清测激素水平。利用Western Blot方法检测小鼠子宫、卵巢及肾上腺蛋白组织中FSHR、TβRⅠ及TβRⅡ的表达。林蛙油对雌性小鼠体重、子宫湿重、卵巢湿重及肾上腺湿重均无显著影响,血清内E2及P的含量显著增加(p<0.05),FSH的含量显著增加(p<0.01),T的含量显著增加(p<0.001),PRL和LH的含量变化无显著差异。林蛙油高剂量给药组肾上腺蛋白组织FSHR的表达水平升高(p<0.05),其他组变化不显著。表明长时间大剂量服用林蛙油,在一定程度上会引起机体内的E2、T、FSH和P激素水平的变化及FSHR蛋白表达的增高,具有一定的雌激素样作用。

细粒棘球蚴转化生长因子βⅠ型受体胞内域原核表达载体的构建及蛋白纯化

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)转化生长因子βⅠ型受体胞内域(transforming growth factor-βtypeⅠreceptor intracellular domain,TβRⅠ-Ⅰ)原核表达载体,诱导表达并纯化EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白。方法采集感染Eg的羊源原头蚴,Trizol法提取原头蚴总RNA,RT-PCR扩增EgTβRⅠ-Ⅰ基因片段,克隆至原核表达载体pET28a(+),经限制性内切酶双酶切和序列鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌感受态细胞BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。结果 pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体构建成功,经IPTG诱导可表达EgTβRⅠ-Ⅰ蛋白(分子质量单位为48ku),纯化后获得大量纯度较高的可溶性蛋白。结论成功构建pET28a-EgTβRⅠ-Ⅰ原核表达载体,并获得纯化的可溶性目的蛋白,为研究EgTβRⅠ-Ⅰ在Eg体内的生物学作用及其作用方式奠定了基础。