TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈萨克族食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨TGF-β信号通路关键分子转化生长因子β-1型受体(transforming growth factor-βreceptor 1,TβR1)和磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)蛋白在哈萨克族(哈族)食管鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达及其临床意义。方法采用GEO和TCGA数据库分析食管鳞癌标本与癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的表达;运用免疫组织化学技术检测127例哈族食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中TβR1和p-Smad2/3的蛋白表达状况,分析及探讨TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与哈族食管鳞癌患者临床病理参数及预后的关系。结果TβR1和p-Smad2/3蛋白在哈族食管鳞癌中表达上调(P=4.79×10^(-7);P=2.21×10^(-9)),且两者的表达呈正相关(r=0.322,P=0.002);TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度密切相关(P=0.003;P=0.005),且有淋巴结转移的样本中TβR1、p-Smad2/3蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移的样本(P=0.028;P<0.001),而TβR1、p-Smad2/3蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别和肿瘤分化程度无明显相关(均P>0.05);Kaplan-Meier生存分析显示TβR1和p-Smad2/3蛋白高表达食管鳞癌患者生存时间明显短于低表达患者(P=0.0013;P=0.0017)。结论TβR1和p-Smad2/3蛋白表达与哈族食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关。

Beta-谷甾醇通过抑制TNF-α-NF-κB和TβR1-Smad2/3信号通路抗小鼠肝纤维化损伤

目的探讨Beta-谷甾醇对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL 4)诱导的小鼠肝纤维的作用与机制。方法50只C57BL/6♂小鼠随机分成5组:正常组、CCL 4组、Beta-谷甾醇低中高剂量组(BS-L/M/H),每组10只。腹腔注射CCL 4制肝纤维化模型,共30 d,于前15 d灌胃不同剂量Beta-谷甾醇。处死后,观察大体形态,测量肝指数,HE和Masson染色观察肝组织和胶原纤维,Elisa测血清(ALT)、(AST)变化,免疫组化和Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ的表达,Elisa和Western blot检测信号通路TNF-α-NF-κB和TβR1-Smad2/3的变化。结果与正常组比,BS各组显著性地抑制了CCL 4引起的肝指数、ALT、AST、α-SMA、collagenⅠ的增高,该作用呈量效依赖性(P<0.05或P<0.01),BS各组肝形态、炎症细胞浸润与胶原纤维变化也呈剂量依赖性优于模型组,同时,BS-M降低了信号通路中TβR1、Smad2/3、TNF-α和p-NF-κB因子的表达(P<0.05)。结论Beta-谷甾醇呈剂量依赖抑制CCL 4诱导的小鼠肝纤维化,且其作用机制与抑制TNF-α-NF-κB和TβR1-Smad2/3信号通路相关。

胃癌组织中TGF-β_1和TβR_1基因的表达及意义的研究

目的 :观察转化生长因子β1 (TGF-β1 )及其受体 I(TβR1 )基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系。方法 :应用抗 TGF-β1 和 TβR1 多克隆抗体对 10 7例胃癌组织中的 TGF-β1 和 97例胃癌组织中的 TβR1 基因表达蛋白进行了 S- P免疫组织化学方法检测。结果 :TGF-β1 在胃癌组织中的阳性表达 (75 % )明显高于癌旁组织 (2 4.4% )及正常组织 (2 9.2 % ) ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ;TRβ1 在胃癌组织中阳性表达 (19.6 % )明显低于癌旁组织 (79.6 % )和正常组织 (75 .6 % ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :TGF-β1 和 TβR1 基因的异常表达与胃癌的发展及恶性程度有关。

人TβRⅡ-IgG1Fc融合基因重组腺病毒载体的构建

目的构建含有人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段融合基因的腺病毒载体,并进行初步的功能活性鉴定。方法RT-PCR扩增人TGF-β1Ⅱ型受体胞外区及IgG1Fc段基因,通过OverlapPCR融合为目的基因hTβRⅡ-IgG1Fc;克隆至pAdTrack-CMV穿梭质粒,线性化后转染含骨架质粒的BJ5183菌,同源重组构建腺病毒质粒;将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞,并扩增、纯化、RT-PCR鉴定;ELISA初步检测重组腺病毒的功能活性。结果目的基因经酶切分析、测序鉴定正确;RT-PCR及ELISA表明重组腺病毒能表达hTβRⅡ-IgG1Fc,中和HLF分泌的TGF-β1。结论成功构建了含融合基因hTβRⅡ-IgG1Fc的腺病毒载体,体外实验证实表达的蛋白具有中和TGF-β1的作用,为进一步研究放射性肺纤维化的基因治疗提供实验依据。

瘢痕疙瘩TβRⅡ数量和亚细胞分布的研究

目的:通过对瘢痕疙瘩(K)TGFβ1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)数量、亚细胞分布研究,探讨K发生的病理机制。方法:应用组织切片免疫组织化学、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测20例K、8例正常皮肤组织及其体外培养的成纤维细胞中TβRⅡ的表达状况,比较K与正常皮肤TβRⅡ表达数量和亚细胞分布的差异。结果:免疫组化显示TβRⅡ在正常皮肤组织中主要表达于表皮的基底层、角质层、汗腺、毛囊及小血管内皮细胞、成纤维细胞的细胞膜和细胞浆,在K组织中主要表达于角质层、基底层细胞和成纤维细胞的细胞膜、细胞浆与细胞核。流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测显示体外培养的成纤维细胞TβRⅡ荧光表达强度K明显高于正常皮肤,TβRⅡ在正常皮肤成纤维细胞非连续表达于细胞膜和细胞浆,在K成纤维细胞中连续表达于细胞膜,弥散表达于细胞浆和细胞核。结论:K中TβRⅡ的数量和亚细胞分布与正常皮肤存在差异,可能为K重要的发病机制。

肾小球系膜细胞中TGF-β受体1的反式激活调控了CTGF的增量表达

目的:探讨肾小球系膜细胞中TβR1的反式激活调控了CTGF的增量表达。方法:运用机械应激(Stretch)实验方法构建GMC细胞机械应激模型,同时通过应用TβR1阻断剂检测机械应激对CTGF和P-Smads表达水平的影响。结果:与正常对照组相比,机械应激能有效的增加CTGF的表达和诱导Smad3的磷酸化(P<0.05),SB431542可有效的阻断Smad3的磷酸化(P<0.001)和CTGF的增量表达(P<0.01)。结论:GMC中TβR1的反式激活调控了CTGF的增量表达,因此TGF-β1抑制剂可作为一种慢性肾脏疾病的新型抗纤维化候选治疗药物。

Apelin-13对2型糖尿病大鼠心肌纤维化防治的作用机制

目的通过建立2型糖尿病大鼠模型诱导心肌纤维化的发生,探究血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白的内源性配体亚型之一Apelin-13对糖尿病大鼠心肌纤维化防治作用的可能机制。方法高脂高糖喂养联合尾静脉注射小剂量链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型。48只Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组、模型组、Apelin-13组、阻断剂组(SB431542组)。各组大鼠给予相应干预措施12周,取材后行Masson染色,光镜下观察心肌细胞形态学改变及间质胶原纤维沉积情况,测算胶原容积分数(CVF),ELISA检测心肌组织内Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维含量,免疫组织化学染色分析心肌内信号蛋白转化生长因子β1(TGF-β1)和转化生长因子β1Ⅰ型受体(TβRⅠ)的表达水平,Western blot检测下游信号蛋白smad2、p-smad2、smad3、p-smad3的表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量明显升高,伴随信号通路蛋白TGF-β1、TβRⅠ、smad2、p-smad2、smad3、p-smad3表达增强(P<0.01);而与模型组相比,Apelin-13或SB431542干预的糖尿病大鼠心肌组织CVF值、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量则明显下降(P<0.01),Apelin-13组各通路蛋白的表达均显著下调(P<0.01),而SB431542组TGF-β1、TβRⅠ的表达与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05),其余信号蛋白的表达亦明显减弱(P<0.01)。结论外源性Apelin-13可抑制糖尿病大鼠心肌纤维化的发生,此作用是通过减弱TGF-β1/TβR/smads信号转导通路的过度激活得以实现的。

胃癌组织中转化生长因子及其受体表达的意义

目的 观察转化生长因子β_1(Transforming Growth Factor β_1 TGF—β_1)及受体Ⅰ(Transforming Growth Factor βRe-ceptor Ⅰ TβR_1)基因在人类胃癌组织中的表达及其与胃癌病理生物学行为的关系。方法 应用抗TGF—β_1和TβR_1多克隆抗体对107例胃癌组织中的TGF—β_1和97例胃癌组织中的TβR_1基因表达蛋白进行了SP免疫组织化学方法检测,统计学(X^2)分析。结果 1.TGF—β_1在胃癌组织中的阳性表达(75％)明显高于癌旁组织(24.4％)及正常组织的阳性表达(29.2％)其差异非常显著(P<0.01)。2.TRβ_1在胃癌组织中阳性表达(19.6％)明显低于癌旁组织(79.6％)和正常组织中的阳性表达(75.6％)其差异有显著性(P<0.05)。结论 对胃癌组织中的TGF—β_1和TβR_1基因表达蛋白检测分析,有助于胃癌的诊断及恶性程度的判断。