人成熟型TGF-β_1基因T克隆载体的构建

目的 构建人成熟型TGF β1基因T克隆载体 ,为进一步研究人成熟型TGF β1的原核表达和功能打下基础。方法 应用RT PCR技术从人外周血单个核细胞扩增人成熟型TGF β1编码区cDNA基因 (336bp) ,并将其克隆至pUCM T载体 ,经限制性核酸内切酶EcoRI,HindIII的酶谱分析和DNA测序分析证实。结果 成功构建人TGF β1/T载体 ,可进一步用于基因表达和表达产物的功能研究。结论 人TGF β1/T载体的构建 ,为进一步研究其基因表达和功能打下基础 。

T克隆细胞与造血祖细胞的相互作用

人外周血 T 克隆细胞在 YIL-2持续刺激下具有良好的体外扩增能力和LAK 活性。在半固体琼脂培养体系中,T 克隆细胞抑制骨髓 CFU-GM 形成,抑制效应与 T 细胞数量、T 细胞和骨髓细胞的预孵育时间呈正相关。自体及异体 T 克隆细胞对 CFU-GM 的抑制作用无显著差异。经 FACS 表型分析,这种 IL-2激活的 T 克隆细胞为T_3(+)、T_4(-)、T_8(+)、DR(+)、Tac(+)。

再生障碍性贫血儿童TCRVβ亚家族T细胞克隆性增殖及其与HLA-DRB1*15的关系

【目的】探讨再生障碍性贫血(再障)儿童TCRVβ24个亚家族T细胞克隆性及其与HLA-DRB1*15的关系。【方法】再障儿童17例(SAA14例,MAA3例),采用RT-PCR和基因扫描分析外周血或骨髓TCRVβ24个亚家族基因的表达和克隆性,SSP-PCR检测HLA-DR。【结果】再障儿童外周血T细胞仅表达4～22个Vβ亚家族,而正常儿童外周血T细胞几乎表达所有Vβ亚家族。12例(包括初诊SAA4例,CR4例,复发1例和MAA3例)再障儿童存在不同程度T细胞克隆性增殖,但个体间差异较大,正常外周血和骨髓均为多克隆性T细胞。5例HLA-DRB1*15(+)患儿中4例(80%)有寡克隆T细胞,而12例HLA-DRB1*15(-)患儿中仅3例(25%)见寡克隆T细胞,两组比较差异具有显著意义(P<0.05)。伴寡克隆T细胞的6例SAA儿童经免疫抑制治疗后达CR;不伴寡克隆T细胞的5例SAA儿童接受免疫抑制治疗,其中CR1例,PR2例、无效1例,死亡1例。【结论】大多数再障儿童存在T细胞克隆性增殖,寡克隆T细胞多见于SAA,尤其是HLA-DRB1*15(+)的SAA儿童。TCRVβT细胞克隆的检测对进一步了解再障免疫功能状态、预测免疫抑制治疗效果具有一定的参考价值。

CML病人TCR Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点

目的分析慢性粒细胞白血病 ( CML)病人的克隆性增殖 T细胞及其 CDR3序列的特点。方法利用 RT- PCR扩增 3例 CML 外周血单个核细胞中 2 4个 TCR Vβ基因的 CDR3,了解 TCR VβT细胞的分布。阳性产物进一步经基因扫描分析 ,了解其克隆性。寡克隆的 PCR产物再进行序列分析。结果 3例病人仅存在 3～ 9个 TCR Vβ亚家族 T细胞 ,部分 Vβ亚家族T细胞呈寡克隆性增殖 ,Vβ2 1的寡克隆 T细胞见于全部的 3例病人中。结论 CML 病人外周血 TCR Vβ亚家族 T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖 ,这可能是 CML 中机体对恶性细胞所引起的特异性免疫反应 ,但对不同病人的 Vβ2 1寡克隆 T细胞序列分析并未能发现完全同源的

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

CML相关TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点

目的了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。

利用T细胞受体变异β基因谱系分析T细胞急性淋巴细胞白血病病人T细胞克隆性(英文)

目的 :分析T细胞 -急性淋巴细胞白血病 (T -ALL)病人的T细胞克隆性。方法 :利用RT -PCR方法分析 6例T -ALL和 10例正常人外周血单个核细胞中 2 4个T细胞受体变异 β(TCRVβ)基因的CDR3长度 ,PCR产物再进一步进行基因扫描和序列分析。结果 :3例病人的某些TCRVβ亚家族T细胞呈单克隆或寡克隆性增殖 ,主要为Vβ2、3、6、9、2 1和 2 4。其它 3例及正常人均表现为多克隆性增殖T细胞。 结论 :部分T -ALL来自于TCRVβ亚家族克隆性增殖T细胞。

基因扫描分析B-CLL的TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性

利用RT-PCR扩增12例B-CLL外周血单个核细胞的TCR Vβ基因24个亚家族的互补决定区3(CDR3),以了解T细胞的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果显示:12例B-CLL共表达13个TCRVβ亚家族T细胞,每例病人仅表达3-9个Vβ亚家族,主要为Vβ2,Vβ3,Vβ6,Vβ7,Vβ17或Vβ19,9例病人的一个或两个Vβ3家族T细胞里克隆性生长。提示B-CLL选择性地表达TCR VβT细胞,大部分B-CLL出现克隆性增殖T细胞,这可能是对白血病细胞相关抗原的免疫反应。

B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的 了解B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。 方法 利用RT PCR方法扩增 13例初发未治B ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 13例B ALL病人分别表达 2～ 18个Vβ亚家族。 13例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞 ,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆。Vβ2 1和Vβ2 3亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高。结论 B ALL病人外周血T细胞的TCRVβ谱系呈现优势利用的特点 ,并存在克隆性增殖的T细胞 ,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应 ;Vβ2 1和Vβ2 3亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显 ,可能与B

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的 了解T细胞 急性淋巴细胞白血病 (T ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法 利用RT PCR方法扩增 6个不同的T细胞株和 6例初发未治T ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性 ,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果 与正常人外周血表达全部 2 4个Vβ亚家族不同 ,6例T ALL病人分别表达 5～ 12个Vβ亚家族。 6例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞 ,另外 ,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变 ,呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞 ,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论 T ALL患者外周血T细胞的TCRVβ谱系出现限制性改变 ,均可检测到克隆性增殖T细胞 ,尚需进一步鉴定其性质 (肿瘤性或抗原特异性增殖 ) 。

DLI治疗CML病人的克隆性增殖TCR Vβ细胞分析

目的 :了解供者淋巴细胞输注 (DLI)后 ,产生GVL效应的克隆性TCRVβ亚家族T细胞的情况。 方法 :利用RT PCR分别扩增 2例CML经allo BMT后复发病人DIL治疗前后不同时间外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,了解T细胞克隆性。结果 :DLI治疗前病人外周血仅表达 4～ 11个Vβ亚家族 ,而DLI治疗后缓解期则可检测到 12～ 2 1个Vβ亚家族。基因扫描显示DLI后病人外周血出现某些新的Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。结论 :病人的TCRVβ亚家族T细胞存在倾斜性分布现象 ,该倾斜现象在完全缓解时逐步恢复正常。DLI治疗病人时 。

类风湿关节炎小鼠关节聚集的T细胞克隆型变化的分析

目的 :通过对类风湿性关节炎 (RA)小鼠模型发病不同时期的四肢足关节聚集的T细胞克隆型的分析 ,了解T细胞克隆型与RA病变的关系。方法 :用RT PCR/SSCP法 ,对一种自发性RA小鼠模型 (SKG小鼠 )发病初期与后期四肢足关节聚集的T细胞克隆型进行比较分析。结果 :在发病后期 ,四肢足关节中一致的Vβ2和Vβ8.2T细胞克隆型均明显升高 (分别为 72 .3%和 6 0 .2 % )。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8.2的T细胞克隆 。

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点。方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCRVβ基因的CDR3,阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性。结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族,11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族。11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势。Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高。结论:苯中毒工人外周血TCRVβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖,这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应。

用RT-PCR和Genescan分析CML急变期病人TCRVβT细胞的表达和克隆性

目的：了解CML急变期的TCRVβ亚家族T细胞的表达及其克隆性。方法：采用RT－PCR扩增4例CML急变期病人的外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族的互补决定区3（CDR3），产物进一步经基因扫描分析确定T细胞的克隆性。结果：病人外周血仅表达4～9个Vβ亚家族T细胞，主要为Vβ1，Vβ2，Vβ3，Vβ5，Vβ15和Vβ17；基因扫描分析显示2例CML急粒变的部分产物为寡克隆性，而2例CML急淋变者的产物均为多克隆性。结论：CML急变期外周血仅选择性表达部分Vβ亚家族T细胞；CML急粒变存在克隆性增殖T细胞，这可能是机体对白血病细胞相关抗原的一种直接反应。该方法可用于检测微小残留病变和判断疾病复发。

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤 (T NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况 ,利用RT PCR分别扩增 4例B NHL和 2例T NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度 ,以了解T细胞克隆性。结果显示 ,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达 6 - 12个Vβ亚家族 ,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16 ,而全部病人均未能检测到Vβ4 - 6 ,Vβ10 - 12 ,Vβ15 ,Vβ17- 18,Vβ2 0 ,Vβ2 2 - 2 3。基因扫描发现 2例B NHL和 1例T NHL病人的 1- 3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示 ,B NHL和T NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点 。

慢性苯中毒患者外周血TCR Vδ亚家族T细胞分布和克隆性研究

目的：了解慢性苯中毒患者外周血T细胞的TCRVδ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增10例慢性苯中毒患者外周血单个核细胞中8个TCR Vδ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：8例健康人平均表达（6.63±0.52）个Vδ亚家族,外周血中未检测到Vδ4和Vδ5亚家族,慢性苯中毒患者工人表达（1.10±0.57）个Vδ亚家族（1例重度苯中毒工人8个Vδ亚家族均未表达）,外周血中未检测到Vδ1、Vδ3、Vδ4和Vδ8亚家族,与健康人比较有显著性差异（P〈0.01）。6例慢性苯中毒患者存在1-2个Vδα亚家族T细胞出现克隆性增殖。结论：慢性苯中毒患者外周血出现TCR Vδ亚家族倾斜性分布和克隆性增殖T细胞,这可能是苯中毒后所引起的机体特异性免疫反应。

APL相关TCR Vα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周血TCRVα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点。方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCRVα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析。结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCRVα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219)。结论:APL患者外周血T细胞出现的TCRVα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料。

CML患者CD4^+和CD8^+ T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的:了解慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者外周血CD4+和CD8+T细胞中TCRVβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞(PBMCs)、CD4+和CD8+细胞TCRVβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性。结果:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞分别表达部分(1～21个)Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8+细胞中,分别以Vβ21(CD4+)和Vβ11(CD8+)亚家族的克隆性增殖多见。结论:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞的TCRVβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4+和CD8+T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用。

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)基因谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1.1和Vβ8基因,且为单克隆,而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因,均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCR CDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。