L型钙离子通道α_1亚基D亚型在发育小鼠磨牙牙胚成牙本质细胞中的表达

目的 :研究成牙本质细胞分化不同阶段L型钙离子通道α1亚基D亚型的分布情况。方法 :采用兔抗小鼠L型钙离子通道α1D亚基多克隆抗体进行牙胚免疫组织化学染色。结果 :在前成牙本质细胞胞体、功能性成牙本质细胞的近矿化端以及成熟成牙本质细胞的胞体和突起上均发现有L型钙离子通道α1亚基D亚型分布。结论

L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与精神分裂症的Meta分析

目的：用Meta分析的方法综合评价L型钙离子通道α1C亚基基因（calcium channel,voltage-dependent,L type,alpha1C subunit gene,CACNA1C）多态性位点与精神分裂症（schizophrenia,SCZ）的关系,为SCZ的遗传背景提供询证医学证据。方法：通过计算机对PubMed、中国生物医学文献光盘数据库（CBMdisc）数据库进行检索（2000年1月至2013年11月）。根据纳入标准收集CACNA1C多态性位点与SCZ病例对照研究的国内外全文文献。应用RevMan 5.1软件对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括异质性检验,OR值以及评估发表偏倚。结果：共5篇外文文献符合条件并纳入分析,累计精SCZ组3 555例,健康对照组19 566例。数据合并结果显示,CACNA1C多态性位点rs1006737A型基因与SCZ有关联。按种族分为高加索亚组和亚洲亚组进行分析,组内无显著异质性,G/A＋A/A vs.G/G基因型合并OR=1.16（95%CI=1.03~1.31）和1.29（95%CI=1.10~1.52）,总效应测定结果 Z=2.39、3.09（均P〈0.05）。结论：CACNA1C多态性位点rs1006737 A型基因与SCZ有明显关联,且与高加索人和亚洲人群SCZ易感性相关,携带A型基因可能增加SCZ的患病风险。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因。方法:采用RT-PCR方法,从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定。结果:从人成牙本质样细胞系中获得900bp的特异性片段。序列分析表明,与Gen-Bank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致。结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒的构建和鉴定

目的:构建人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒。方法:采用RT-PCR技术从人成牙本质样细胞系中获得cDNA,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时对阳性克隆进行测序鉴定。结果:获得的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性cDNA序列,与GenBank登录的cDNA序列一致。结论:成功地构建了人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒。

L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对人牙本质形成的影响研究

目的:采用人牙齿切片体外器官培养的方法研究L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对牙本质形成的影响。方法:收集年轻人健康前磨牙,用慢速切锯制备2 mm厚的牙齿横切片,将在L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体中浸泡过的琼脂糖微球与在PBS液中浸泡过的琼脂糖微球对称放置在牙片上,将切片用含琼脂糖的半固体培养基包被后采用Trowel器官培养方法培养1周,观察其对牙本质形成和矿化的影响。结果:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体组四环素线状荧光带较对照组变细,von Kossa染色前期牙本质处球状矿化也较对照组减少,I型胶原免疫组化染色显示实验组与对照组无明显区别。结论:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体能够影响牙本质的矿化,但对牙本质基质的合成和分泌无明显影响。该结果提示成牙本质细胞膜上的L型钙离子通道α1亚基D亚型对牙本质矿化过程中的钙离子转运有重要作用。

骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基基因多态性与甲状腺功能亢进性低钾周期性瘫痪的相关性

目的研究骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基(CACNA1S)基因11外显子1551位点T/C和1564位点C/T多态性与中国西南地区汉族男性甲状腺功能亢进(甲亢)性低钾周期性瘫痪(THPP)的相关性。方法选取中国西南地区男性THPP患者90例(THPP组),甲亢不伴周期性瘫痪者98例(GD组),正常对照95名(CN组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对CACNA1S基因第11外显子区1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点进行基因分型。结果①在CACNA1S基因1551位点,THPP组TT、TC、CC基因型频率分别为56.7%、34.4%、8.9%,GD组分别为71.4%、25.5%、3.1%,CN组分别为74.7%、23.2%、2.1%,THPP组TC+CC基因型和C等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05);②在CACNA1S基因1564位点, THPP组CC、CT、TT基因型频率分别为70.0%、26.7%、3.3%,GD组分别为84.7%、14.3%、1.0%,CN组分别为86.3%、12.6%、1.1%,THPP组CT+TT基因型和T等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论CACNA1S基因11外显子1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点可能与中国西南地区汉族男性THPP的发生有关。

早搏灵对氯化钡诱导的心律失常大鼠T型钙离子通道mRNA表达的影响

目的:通过观察早搏灵对氯化钡诱导的心律失常大鼠的T型钙离子通道α1H亚基表达的影响,评价早搏灵对防治心律失常的作用机制。方法:选用健康大鼠40只,随机分为4组,维拉帕米对照组,生理盐水组,早搏灵胶囊组,模型组,每组10只。记录并比较各组大鼠的心电图变化,采用荧光定量实时PCR技术观察心肌组织T型钙通道基因α1H的变化。结果:早搏灵胶囊组、维拉帕米组,每组心律失常持续时间与模型组相比较均有一定程度的缩短。维拉帕米组T型钙通道α1H亚基为高表达,说明维拉帕米对T型钙通道α1H亚基表达无明显抑制作用;早搏灵胶囊组与模型组相比,T型钙通道α1H亚基为低表达有显著性差异,证明早搏灵胶囊对T型钙通道α1H亚基有抑制作用。结论:早搏灵胶囊能够使氯化钡诱导的心律失常大鼠的T型钙通道α1H亚基表达下调,可缩短心律失常的持续时间,说明早搏灵胶囊治疗心律失常作用机制可能与降低T型钙通道α1H亚基表达相关。

人类T型钙通道α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能研究

将人类T型钙通道α1H 亚单位基因 (CACNA1H)cDNA转染到HEK 2 93(humanembroyonickidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株 ,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用。RT -PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H 亚单位的过量表达。生长曲线结果表明 ,T型钙通道α1H 亚单位基因的过量表达能显著促进HEK - 2 93细胞增殖 ,将细胞群体倍增时间从对照细胞的 2 2 1± 1.1h缩短到稳定转染细胞的 14 0± 0 .4h ,细胞群体倍增时间缩短了约 8h ;流式细胞分析结果表明 ,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高 ,相反地处于G1 期的百分率比对照细胞低 ,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H 基因能促进细胞增殖。Western印迹结果提示 ,T型钙通道α1H 亚单位基因表达产物是通过某种信号途径 ,提高了与细胞周期有关基因 (CDK2、cyclinA和cyclinE)的蛋白质表达水平 ,从而刺激了细胞周期的进程。

人类T型钙通道α1H和α1G基因在精索静脉曲张患者精子中的差异表达

目的:探讨精索静脉曲张(VC)患者精子中T型钙通道α1H和α1G基因的表达与精索静脉曲张的关系。方法:根据WHO标准用计算机辅助精液分析(CASA)方法对所取精液进行检查,根据检查结果分为正常精液组(20例)、VC精液正常组(16例)、VC精液异常组(44例),用Percoll非连续梯度离心法对精液进行分离,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测3组精子T型钙通道α1H和α1G mRNA的表达。结果:与正常精液组相比较,VC精液正常组α1H和α1G mRNA的表达差异无显著性(P>0.05);VC精液异常组α1H和α1GmRNA的表达差异具有极显著性(P<0.01)。结论:T型钙通道α1H和α1G基因表达异常可能是导致VC患者精液质量下降从而不育的原因之一,此为VC不育的病因及治疗提供了新的方向。

反复力竭运动大鼠心脏窦房结细胞T-型钙离子通道的变化

背景:目前,运动医学领域关于运动对窦房结细胞T-型钙离子通道(T-Ca2+通道)的影响鲜见报道。目的:分析2周力竭跑台运动对大鼠心脏窦房结T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达及通道电流密度的影响。方法:健康雄性SD大鼠50只共分5组。对照组10只大鼠不进行任何运动训练,一次力竭组20只大鼠在正常饲养2周后,进行一次速度25 m/min,坡度为0°跑台训练至力竭;反复力竭组20只大鼠运动方式及强度同一次力竭组,跑台训练1次/d,每周运动6 d,休息1 d,共训练2周。运动组大鼠分别于运动后0 h及24 h(各10只)取材,应用实时荧光定量PCR技术测定T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达变化,应用细胞急性分离及全细胞膜片钳技术测定通道电流密度变化,以观察跑台训练运动对大鼠心脏窦房结细胞膜上T-Ca2+通道的影响。结果与结论:与对照组相比,反复力竭运动0 h和反复力竭运动24 h组Cav3.1 mRNA表达明显下降(P<0.01)。反复力竭运动0 h和反复力竭运动24 h组T-Ca2+通道ICa,T电流密度明显低于对照组及一次力竭组(P<0.01)。结果表明,2周反复力竭跑台训练可引起窦房结细胞膜T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达及ICa,T电流密度减少,这可能引起窦房结细胞舒张期自动除极及自律活动减慢,提示反复力竭运动对于T-Ca2+通道的影响可能成为运动引发窦房结功能障碍及运动性心律失常的离子通道机制之一。

人成牙本质细胞L型钙离子通道特异性基因片段的克隆研究

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因片段。方法:选取新鲜拔除的健康恒牙,利用牙科专用慢速切锯制备牙齿切片,采用酶消化法分离出完整的人成牙本质细胞,利用RT-PCR技术直接从人成牙本质细胞中克隆L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因片段,将其亚克隆入pGM-T载体进行序列测定。结果:从人成牙本质细胞中获得452bp的特异性片段。序列分析表明,其与Gen-Bank中已登录的人L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因序列一致。结论:成功地从人成牙本质细胞中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列片段。

雌二醇增加脓毒症小鼠心肌电压门控钙通道α1C亚基(CACNA1C)水平

目的探讨雌二醇对脓毒症小鼠心肌电压门控钙通道α1C亚基(CACNA1C)的影响。方法雄性昆明小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇,在此基础上利用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症模型。小鼠分为雌二醇处理的脓毒症组、脓毒症组、假手术组、雌二醇处理的假手术组。造模后3、6、12、24 h,实时荧光定量PCR检测左心室CACNA1C的mRNA水平,Western blot法检测CACNA1C的蛋白水平;造模后12 h,免疫组织化学染色法检测左心室CACNA1C的表达及分布情况。结果术后6 h,脓毒症组CACNA1C表达显著降低,在12 h和24 h一直处于较低水平。雌二醇处理的脓毒症组小鼠术后3 h、6 h和12 h CACNA1C的水平未见明显变化,24 h其水平显著增加。结论外源性雌二醇可提高脓毒症小鼠左心室CACNA1C水平。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因的克隆、原核表达和纯化

目的:获得原核表达的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白。方法:采用RT-PCR技术从人成牙本质样细胞系中获得cDNA,亚克隆至PUC18载体中,经测序确认后,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌DH5α,以IPTG诱导蛋白表达,并经Ni-NTA亲和柱层析纯化,SDS-PAGE鉴定。结果:获得的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致。结论:成功克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因,建立了原核表达、纯化体系,制备了纯化的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白。

lncRNA KCNQ1OT1调控miR-384/CACNA1C轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控miR-384/L型钙离子通道α1C亚基基因(CACNA1C)轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测正常培养的大鼠心肌H9c2、CP-R073细胞及缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2、CP-R073细胞中的KCNQ1OT1、miR-384、CACNA1C蛋白表达。将H9c2细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-KCNQ1OT1组、mimic NC组、miR-384 mimic组、si-KCNQ1OT1+inhibitor NC组、si-KCNQ1OT1+miR-384 inhibitor组。除Ct组外,其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R损伤模型。qRT-PCR检测细胞中KCNQ1OT1、miR-384表达;CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中肌红蛋白(Mb)、肌钙蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)水平;Western blot检测CACNA1C、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-384、miR-384与CACNA1C的关系。结果H/R诱导的H9c2、CP-R073细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达升高,miR-384表达降低,且H/R诱导的H9c2细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达最高,miR-384表达最低,因此,后续选择H9c2细胞为研究对象。与Ct组比较,Model组细胞中KCNQ1OT1、细胞凋亡率、Mb、cTnⅠ水平、CACNA1C、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,miR-384表达、D 450值、EdU阳性率、PCNA蛋白表达降低(P<0.05);沉默KCNQ1OT1或过表达miR-384可促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡;miR-384 inhibitor减弱了沉默KCNQ1OT1对H/R诱导的H9c2细胞增殖的促进作用,以及对细胞凋亡的抑制作用;KCNQ1OT1靶向调控miR-384/CACNA1C轴。结论沉默KCNQ1OT1可能通过上调miR-384来抑制CACNA1C表达,进而促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡。

家庭性低血钾型周期性麻痹CACNL1A3基因新的突变点528精氨酸被甘氨酸替代

目的筛查低血钾性周期性麻痹家系的骨骼肌二氢吡啶受体敏感的钙离子通道α1亚基和骨骼肌电压门控钠离子通道α亚基基因突变。方法总结低血钾型周期性麻痹家系Ⅵ代27例患者的临床特点,并应用聚合酶链反应和高液相变性技术筛查编码钙离子通道α1亚基的528位及1239位精氨酸和钠离子通道α亚基669位及672位精氨酸基因的突变点。结果钙离子通道α1亚基编码528位精氨酸的1582位碱基序列发生错义突变(C→G),编码的精氨酸变为甘氨酸,528位精氨酸被甘氨酸替代,而其他3个已知突变点的碱基序列完全正常。结论国人钙离子通道α1亚基存在528位精氨酸被甘氨酸替代突变,与国外报道的钙离子通道α1亚基528位精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被甘氨酸和钠离子通道α亚基基因的669精氨酸被组氨酸替代,或672位的精氨酸被组氨酸、甘氨酸、色氨酸、半胱氨酸替代的突变不同,是一个新的突变类型。

CACNA1C基因多态性与中国新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性研究

目的:探究L型钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)多态性与新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性。方法:选取2010年5月至2016年5月在我区治疗的新疆维吾尔族精神分裂症患者985例为病例组,并以2016年1月至5月健康体检者1123例为对照组。采用Taqman探针分型对CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点进行基因分型,观察等位基因及基因型与精神分裂症发病风险的关系;比较两组CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点基因型与等位基因频率;比较两组阳性与阴性症状量表(PANSS)评分;分析CACNA1C基因rs1006737位点(A/G)、rs2239015位点(C/T)多态性与精神分裂症及PANSS评分的相关性。结果:病例组rs1006737位点A等位基因频率低于对照组(P<0.05);经多元Logistic回归分析,精神分裂症家族史、CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与精神分裂症患病因素呈正相关(P<0.05)。结论:新疆维吾尔族精神分裂症患者CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)基因检出率较高,并且CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与患者PANSS量表评分呈正相关,可能是精神分裂症的危险因素。

动物CACNA2D1基因研究进展

CACNA2D1基因是编码动物L-型钙离子通道2αδ1亚基的基因。有研究表明,CACNA2D1基因可影响钙离子通道钙流的性质,其单核苷酸变异与某些疾病有关。综述了CACNA2D1基因在生物学特性、染色体上的位置、基本功能、表达调控及其单核苷酸多态性与疾病的关系等方面的最新研究成果。

CACNA1S基因与低钾周期性麻痹

CACNA1S基因是L-型钙离子通道α1亚单位的编码基因,CACNA1S的基因突变会引起人低钾周期性麻痹及猪高温综合症,有关研究推测该基因是影响猪肉质性状的候选基因。笔者对CACNA1S基因的生物学特性、结构组成和CACNA1S基因突变引发的遗传病及CACNA1S基因的研究进展作了综合性阐述。

CACNA1H基因变异与神经系统疾病

T型钙离子通道是一种低电压依赖性介导钙离子跨膜转运的膜蛋白,由于其特殊的电生理特性,在调节神经元兴奋性中具有重要作用。目前研究发现CACNA1H突变所致T型钙离子通道异常与多种神经系统疾病发生密切相关,如特发性全面性癫痫,孤独症谱系疾病,肌萎缩侧索硬化等,虽然其作为易感基因在疾病发生发展中的作用已得到一定证实,但致病机制尚不明确,本综述针对T型钙通道在神经系统中的电生理学作用,及CACNA1H突变与部分神经系统疾病之间关系进行探讨,旨在为突变致病机制的研究提供思路,并为后续精准治疗提供依据。

CACNA1C基因多态性与精神分裂症的关联研究

目的探讨L型钙离子通道cdC亚基（calcium channel，voltage-dependent，Ltype，Mpha 1C subunit，CACNA1C）基因多态性与精神分裂症的关联。方法纳入1432例精神分裂症患者及1153名正常对照，采用连接酶检测一聚合酶链反应（1igasedetectionreaction—polymerasechainreaction，LDR．PCR）方法对CACNAlC基因rs1006737、rs1024582位点进行基因分型，观察其等位基因及基因型与精神分裂症发病风险的关系。结果患者组rs1006737位点的基因分布（A、G等位基因频率分别为5．3％、94．7％，AA、AG、GG基因型频率分别为O．2％、10．2％、89．6％）与对照组（A、G等位基因频率分别为4．0％、96．0％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．4％、7．4％、92．3％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05），患者组rsl024582位点的基因分布（A、G等位基因频率分别为4．9％、95．1％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．2％、9．3％、90．5％）与对照组（A、G等位基因频率分别为4．0％、96．O％，AA、AG、GG基因型频率分别为0．1％、7．8％、92．1％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。rs1006737位点G等位基因（OR=1．332，95％CI=1．016～1．746）与精神分裂症相关联（P〈0．05）。结论本研究支持在汉族人群中CACNA1C基因rs1006737位点多态性与精神分裂症相关联。