全真一气汤对肾气虚型哮喘大鼠转录因子FOXP3/RORγt及Th17/Treg免疫失衡的影响

目的 观察全真一气汤对肾气虚型哮喘大鼠Th17/Treg及相关细胞因子(IL-6、IL-17、IL-10、IL-35)和转录因子维甲酸相关孤独核受体-γt(OrPhan nuclear recePtor gamma t,RORγt)、叉头状转录因子(forkhead transcriPtion factor P3,FOXP3)的影响,探讨全真一气汤调控哮喘气道炎症的机制。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、全真一气汤低剂量治疗组(8.33g·kg^(-1))和全真一气汤高剂量治疗组(33.32 g·kg^(-1)),每组6只。模型组与低、高剂量治疗组予卵蛋白1mg、氢氧化铝凝胶10 mg的混悬液1 mL致敏,1%的卵清蛋白超声雾化吸入以激发哮喘,进行惊恐刺激,负重游泳直至力竭等进行肾气虚型哮喘大鼠造模,造模成功后开始药物干预。空白组和模型组予生理盐水3 mL灌服,治疗组按低、高剂量予全真一气汤3 mL灌服,每日1次,连服30 d。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time Quanti tative PCR,qRT-PCR)检测各组大鼠肺组织中FOXP3、RORγt mRNA水平,流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞百分比,酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清IL-6、IL-17、IL-10、IL-35细胞因子含量。结果 与空白组相比,模型组血Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17含量及相关肺组织中RORγt mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),模型组Treg细胞比例、血清IL-10、IL-35含量及相关肺组织中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,全真一气汤低、高剂量组血Th17细胞百分比、血清IL-6、IL-17含量及肺组织RORγt mRNA和蛋白的表达明显减少(P<0.05),高剂量组血Treg细胞百分比显著升高(P<0.05),但全真一气汤低剂量组血Treg细胞百分比无显著变化(P>0.05),高剂量组血清IL-10含量增加(P<0.05),全真一气汤低剂量组IL-10含量亦增加,但差异无统计学意义(P>0.05),两组血清IL-35含量、FOXP3 mRNA及蛋白的表达同时明显升高(P<0.05);与全真一气汤低剂量组相比,高剂量组Th17细胞百分比明显降低(P>0.05),IL-17亦降低(P>0.05),IL-6含量及RORγt表达减少(P<0.05),高剂量组IL-35含量及Treg相关的FOXP3表达增加(P<0.05)。结论 全真一气汤低剂量组、全真一气汤高剂量组全真一气汤均可降低Th17细胞及相关促炎因子IL-6、IL-17的含量,抑制RORγt的表达;高剂量组可以升高Treg细胞百分比,而全真一气汤低剂量组对Treg细胞百分比影响则不明显,但都可以上调FOXP3的表达,促进相关抑炎因子IL-10、IL-35分泌。

Th17细胞及相关因子IL-17与绝经后骨质疏松的相关性研究

目的观察辅助性T细胞17（T helper cell 17,Th17）及及相关因子白细胞介素17（interleukin 17,IL17）在绝经后骨质疏松（Postmenopausal osteoporosis,PMOP）患者外周血及血清中的表达水平,并探讨IL-17细胞与绝经后骨质疏松的发病的关系。方法选取2011年7月~2014年7月在我院确诊的绝经后骨质疏松患者（60例）为研究组,选取同期来我院体检的绝经后骨量正常人群为对照组（60例）,采用流式细胞术检测绝经后骨质疏松患者及骨质正常人外周血中Th17细胞水平,采用ELISA法检测两组人群外周血中IL-17、IL-6及TGF-β的蛋白水平;采用RT-PCR法检测两组人群外周血中转录因子T孤独核受体（retinoid-related orphan receptor gamma t,RORγT）的mRNA水平。通过Pearson相关分析绝经后骨质疏松患者中IL-17水平与骨密度（bone mineral density,BMD）以及血清钙可能存在的关系。结果绝经后骨质疏松患者外周血中Th17细胞比例为（2.17±0.41）%,显著高于健康对照组人群的（0.61±0.45）%,差异有统计学意义（P〈0.001）;绝经后骨质疏松患者血清IL-17水平（31.51±10.09）pg/ml,显著高于对照组人群的（16.61±9.93）pg/ml,差异有统计学意义（P〈0.001）;绝经后骨质疏松患者外周血RORγT mRNA的表达水平显著高于正常人群,差异有统计学意义（P〈0.001）。绝经后骨质正常对照组人群外周血血清中IL-6及TGF-β水平均显著低于绝经后骨质疏松患者,差异有统计学意义（t=8.99,P=0.000;t=4.71,P=0.000）;此外,Pearson相关分析结果显示,绝经后骨质疏松患者血清中IL-17与BMD呈显著负相关（r=0.788,P〈0.05）。结论Th17细胞可能通过分泌IL-17促进绝经后骨质疏松的产生,IL-17可能作为治疗绝经后骨质疏松的重要靶点。

Th17细胞在痤疮发病中的作用及与痤疮严重度相关性的功能研究

目的:探究Th17细胞在痤疮发生过程中的作用机理及与痤疮严重度的相关性。方法:根据Pillsbury法将136例对象分成对照组、轻度痤疮组、中度痤疮组和重度痤疮组。然后利用流式细胞仪检测Th17细胞在各组间的表达量;采用ELISA方法检测血清中IL-17、IL-23、IL-6、转化生长因子(TGF)-β1的表达水平,最后通过RT-PCR方法分别测定孤独核受体γt(RORγt)mRNA和IL-17 mRNA表达水平。结果:实验结果表明,中重度痤疮患者血清中IL-17、IL-23的表达量明显高于对照组和轻度痤疮患者(P<0.05),中重度痤疮组的IL-6、TGF-β1的表达量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),中度痤疮组IL-6、TGF-β1的表达量与轻度痤疮患者差异无统计学意义(P>0.05);此外,IL-17 mRNA和RORγt mRNA的表达在各组间均存在统计学差异(P<0.05)。结论:Th17细胞在轻度痤疮、中度痤疮和重度痤疮中有级联放大作用,这可为今后重度痤疮探索治疗提供新靶点。

电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt、Foxp3表达的影响

目的:观察电针对高血压前期大鼠血压及血管RORγt及Foxp3表达的影响。方法:24只4周龄的雄性自发性高血压大鼠(SHRs)分为模型组、阻断剂组及电针组,每组8只,8只相同周龄雄性大鼠WKY(Wistar-kyoto)为正常组。电针组予电针“人迎”“太冲”穴(2/15 Hz,1 mA,15 min,1次/日);阻断剂组予腹腔注入AG490,5μg/g,1次/日;正常组及模型组仅予抓取与固定;干预2周。采用无创鼠尾血压仪测压,采用RT-PCR、Western blot检测大鼠胸主动脉RORγt、Foxp3 mRNA及蛋白表达的变化。结果:4~6周龄SHRs大鼠的血压明显高于同周龄WKY大鼠(P<0.05);阻断剂组在治疗1周时收缩压及舒张压值均低于模型组(P<0.05);而电针组在治疗2周时收缩压低于模型组(P<0.05)。与正常组相比,模型组中的RORγt mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05),Foxp3 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型组比,阻断剂组和电针组RORγt mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05)、Foxp3 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:电针人迎、太冲穴有延缓高血压前期大鼠血压升高的作用,其机制可能与调节血管RORγt及Foxp3的表达有关。

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ~Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。

电针人迎、太冲穴对自发性高血压大鼠模型肾脏组织FoxP3和RORγt的影响

[目的]观察“活血散风”针刺法对高血压前期大鼠肾脏组织叉头转录因子(FoxP3)和维甲酸相关孤独核受体(RORγt)蛋白和mRNA表达的影响。[方法]将16只4周龄自发性高血压大鼠(SHRs)随机分为模型组(SHR组)和电针组(电针+SHR组),每组8只,另将8只同周龄WKY大鼠作为空白对照组(WKY组)。电针组给予针刺人迎、太冲治疗,每日1次,连续治疗2周。采用Softron无创血压仪测量干预前、干预1周、干预2周时的收缩压水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏结构形态,蛋白免疫印迹(Western blot)和聚合酶链反应(PCR)技术检测大鼠肾脏组织FoxP3、RORγt蛋白和mRNA表达情况。[结果]SHR大鼠收缩压水平明显高于WKY组(P<0.05),干预两周后,电针+SHR组收缩压水平明显低于SHR组(P<0.05);SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显高于WKY组(P<0.05),FoxP3蛋白和mRNA的表达、FoxP3/RORγt比值明显低于WKY组(P<0.05);电针+SHR组肾脏组织RORγt mRNA表达明显低于SHR组(P<0.05),FoxP3蛋白表达、FoxP3/RORγt比值明显高于SHR组(P<0.05);电针干预后SHR大鼠未出现明显的肾脏形态改变。[结论]“活血散风”针刺法可调节FoxP3和RORγt的表达,其对高血压前期大鼠的降压作用可能与调节FoxP3和RORγt的平衡有关。

IL-17参与小鼠心脏移植排斥反应的实验研究

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平。免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况。结果RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达。免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌。结论Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。

百草枯致大鼠肺组织Th17细胞相关细胞因子变化及IL-17抗体的拮抗作用

目的探讨急性百草枯染毒大鼠肺组织内Th17细胞相关细胞因子的表达变化及IL-17抗体的中和作用。方法将72只健康SPF级Wistar大鼠随机分为对照(生理盐水)组、百草枯中毒组和抗体中和组,每组24只,雌雄各半。百草枯中毒组和抗体中和组一次性灌胃染毒百草枯(50mg/kg);抗体中和组2 h后腹腔注射3μg/ml的IL-17抗体。分别于染毒后第1、3、7、21天,检测外周血IL-17、IL-6、TGF-β浓度和肺组织中维甲酸孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平。观察肺组织的病理学改变。结果与对照组相比,百草枯中毒组和抗体中和组雌、雄大鼠各时间点血清IL-17、IL-6、TGF-β浓度及肺组织RORγtmRNA的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与百草枯中毒组相比,抗体中和组雌、雄大鼠第1、3天血清IL-17、IL-6含量及第3、7天血清TGF-β含量以及第1、3、7天肺组织RORγt mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。而雄性大鼠第7天血清IL-17含量及雌性大鼠第21天肺组织RORγt mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Th17细胞参与了百草枯中毒大鼠急性炎症反应过程,IL-17抗体对急性百草枯致肺损伤具有拮抗作用。