转基因JAK3体外长期扩增T淋巴祖细胞的实验研究

目的探讨激活JAK3信号传导通路是否能够体外长期扩增调控T淋巴祖细胞并评价其定向分化潜能的可行性。方法构建含有JAK3基因的逆转录病毒载体MG I-F2JAK3,内含有绿色荧光蛋白(GFP)和两个可以结合小分子二聚化合物AP20187的结合位点F36v。将该载体转入小鼠的骨髓造血干细胞中,在无血清培养基X-V ivo15培养体系中扩增,分为4组:空白对照组;AP20187组;干细胞因子(SCF)组;AP20187+SCF组。对扩增的细胞进行流式细胞仪检测免疫分型,定向分化、胸腺内注射等研究。结果AP20187+SCF组可以使转导的造血细胞获得长期大量对数级的扩增,扩增50 d后细胞可以达到1.2×1012倍±0.2×1012倍,所扩增的细胞为最早期的T淋巴祖细胞,表型为C-k ith iCD44+CD25-TN。该祖细胞群在SCF+IL-7+IL-3培养条件下,可定向分化为Thy1.2阳性的T淋巴细胞,并在小鼠的胸腺内可定向分化为GFP+CD3+和GFP+CD4+双阳性的成熟T淋巴细胞。结论AP20187联合SCF激活JAK3信号,可以大量扩增最早期的T淋巴祖细胞。该祖细胞具有定向分化为成熟T淋巴细胞的功能。该系统有助于研究T淋巴细胞的发生发育。

人造血干/祖细胞体外诱导分化为T淋巴细胞的研究进展

本文介绍人造血干/祖细胞在体外微环境中产生并分化发育为成熟T淋巴细胞的相关环节和影响因素,涉及到人体外微环境的建立,包括模仿胸腺微环境的培养体系、无胸腺组织的培养体系;与T细胞分化有关的细胞因子的研究;T细胞在体外的分化过程;T细胞分化研究的应用与展望。