脑脊液淋巴细胞非特异性酯酶活性初步观察

报道21例以酸性非特异性酯酶(α-荼醋酸酯酶)标志脑脊液中T淋巴细胞/淋巴细胞的结果:脑肿瘤组5例(不包括CNS淋巴瘤):仅37.2±10.91％,结核性脑膜炎(结脑)5例:66.0±18.81％;对照组7例:53.0±8.85％,脑肿瘤组阳性率明显低于对照组(P<0.02),结脑组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。二例CNS淋巴瘤均阴性,符合B细胞淋巴瘤的实际病理学表现。非特异性酯酶染色简便易行,其脑脊液淋巴细胞初步观察结果显示能较准确地评价CNS疾病的细胞免疫功能,可应用于临床检测。

诱导性调节T细胞的体外扩增及其对小鼠角膜移植免疫排斥的抑制作用

背景 研究表明,CD4＋CD25＋自然调节性T细胞（nTregs）在维持外周免疫耐受及自身免疫平衡中起到重要作用,而体外诱导和扩增的诱导性调节性T细胞（iTregs）可通过过继转移的方式抑制器官移植的免疫排斥反应.目前iTregs的诱导方法仍在不断优化,且其对角膜移植的作用尚不明确.目的 研究iTregs的体外诱导和扩增方法,及其在体内对免疫排斥反应的抑制作用和在体外对效应T细胞（Teffs）增生的抑制作用.方法 从C57B L/6小鼠股骨骨髓组织中提取和培养骨髓来源树突状细胞（BMDCs）;取BALB/c小鼠脾脏,磁珠分选CD4＋ CD25＋T细胞和CD4＋ CD25-T细胞,将CD4＋ CD25-T细胞分为阴性对照组（单纯CD4＋CD25-T细胞）、CD3/28抗体珠组（CD4＋ CD25-T细胞＋抗鼠CD3/28抗体珠）、2.5 ng/ml转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组.在不同质量浓度TGF-β1和抗CD3/CD28抗体珠（细胞和抗体珠比例为1：1）条件下诱导iTregs的生成,并使用抗CD3/CD28抗体珠（细胞和抗体珠比例为1：2）、白细胞介素-2（IL-2）和TGF-β1体外扩增iTregs.采用流式细胞仪检测Tregs各表面因子的表达,采用混合淋巴细胞反应分析体外扩增iTregs对Teffs的抑制能力.建立同种异体小鼠角膜移植模型（C57BL/6→BALB/c）,并将模型分为nTregs注射组、iTregs注射组和PBS组;根据分组经小鼠对侧眼球后静脉丛分别注射0.1 ml nTregs、体外扩增iTregs悬液和PBS,观察注射后3个组小鼠植片情况.结果 阴性对照组、CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组中CD4＋CD25-T细胞表达CD4＋ CD25＋T细胞的比例分别为（6±3）％、（91±4）％、（91±3）％和（86±6）％,其中CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/mlTGF-β1诱导组CD4＋CD25＋T细胞比例明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.CD3/28抗体珠组、2.5 ng/ml TGF-β1和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例分别为（1.18±0.20）％、（8.70±1.80）％和（21.80±3.36）％,其中2.5 ng/ml TGF-β1诱导组和10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例明显高于CD3/28抗体珠组,且10.0 ng/ml TGF-β1诱导组Foxp3＋T细胞比例明显高于2.5 ng/ml TGF-β1诱导组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.体外扩增iTregs中CD69＋T细胞比例明显低于nTregs,PD-1＋、Foxp3＋和CD25＋T细胞比例均明显高于nTregs,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.在1：1、1：2、1：4、1：8和1：16Tregs/Teffs比例条件下,iTregs与Teffs混合培养后Teffs的增生能力明显低于nTregs与Teffs混合培养组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.iTregs注射组角膜植片存活时间为4周,永久耐受者占50％,而nTreg组小鼠角膜植片的存活时间为3周,永久耐受者占17％,2个组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 TGF-β1可诱导CD4＋ CD25-T细胞生成iTregs并高表达Foxp3,体外扩增iTregs较nTregs具有更强的抑制淋巴细胞增生能力,从而抑制角膜移植排斥反应的发生.