慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞受体β链V区家族的表达及意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血T淋巴细胞受体β链V区(TCR BV)各家族谱系的表达及其临床意义方法选择32例CHB患者(CHB组)及20例健康体检者(健康对照组),分别采集其外周血、肝素钠抗凝,分离单个核细胞,提取RNA并应用RT-PCR扩增TCR RV的24个家族,进行两组间扩增产物定量分析结果 CHB组△Ct5、△Ct7、△Ct15、△Ct22、△Ct23值与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)结论 CHB组TCR BV 24个家族BV5、BV7、BV15、BV22、BV23的扩增产物含量均较健康对照组下降。

T细胞受体γ基因和免疫球蛋白重链基因在急性淋巴细胞白血病细胞的重排及其在分型中的意义

用PCR扩增检测27例急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL)和1例T细胞淋巴瘤(T lymphocytic lymphoma,T-LL)的T细胞受体(Tcell receptor,TCR)γ基因和免疫球蛋白重链(immunoglobulin heavy chain,IgH)基因重排。TCRγ基因在9例T-ALL及2例未分型白血病病例中全部重排;在6例B-ALL中有1例重排;在10例C-ALL中有1例重排,而IgH基因在24例ALL病例中重排,其中7例为T-ALL,1例为未分型白血病。TCRγ和IgH基因在1例T-LL中均无重排,在T-ALL、B-ALL和C-ALL中均有交叉重排现象。我们探讨了这些结果在分型中的意义,同时还注意到,在28例中的10例病人存在IgH和TCRγ基因双重重排,如作为特异的双标记检测其微小残留白血病细胞,无疑会提高准确率。

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排检测在急性非淋巴细胞白血病患者中的意义

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体γ(TCRγ)基因重排在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者中的临床意义。方法 用聚合酶链反应 (PCR)检测50例ANLL患者骨髓、外周血单个核细胞(MNCs)中克隆性IgH、TCRγ基因重排。结果 克隆性IgH和/或TCRγ基因重排在50例ANLL中检出率为32.0 % (16/50) ,其中IgH为28.0% (14/50) ,TCRγ为16.0 % (8/50)。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重排。27例非M3 初发ANLL患者经DA或HA标准方案化疗 ,10例基因重排阳性的患者1疗程后获完全缓解3例 (30.0% ) ,而17例基因重排阴性患者1疗程后完全缓解13例 (76.5 % ) ,两者差别具有显著性意义 (P<0.05)。结论 (1)IgH、TCRγ基因重排不仅出现于淋巴细胞来源的肿瘤 ,也可见于部分ANLL患者;(2)出现IgH和/或TCRγ基因重排可能是ANLL患者预后不佳的指标之一。

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的 :探讨初诊急性淋巴细胞白血病 (ALL)患者免疫球蛋白重链 (IgH)、T细胞受体γ(TCRγ)基因重排情况。方法 :应用多聚酶链反应 (PCR)检测 19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果 :19例标本中 10例发生单一IgH基因重排 ,5例发生单一TCRγ基因重排 ,2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论 :ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排 ,且存在着交叉重排现象。

降落式PCR和SSCP检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体γ基因重排

目的以降落式PCR和单链构型多态性(SSCP)方法检测淋巴细胞白血病单克隆T细胞受体(TCR)γ基因重排,探讨其在淋巴细胞白血病诊断中的价值。方法盐析法提取淋巴细胞白血病患者外周血白细胞DNA,TCR-γ基因重排通用引物和降落式PCR扩增基因重排。分别采用琼脂糖凝胶电泳、SSCP和DNA直接测序方法检测PCR扩增产物。阳性细胞系DNA模板与反应增生性淋巴组织DNA按不同比例混合后扩增,检测降落式PCR的灵敏度。结果琼脂糖电泳中,18例T淋巴细胞白血病中有15例、4例B淋巴细胞白血病中有2例为阳性,阳性标本经SSCP进一步分析,呈不连续条带。DNA直接测序证实扩增产物为TCR-γ基因重排。阳性对照模板占1%以上时可得到阳性扩增结果。结论TCR-γ基因重排通用引物结合降落式PCR可有效扩增T淋巴细胞白血病基因重排,可用于T淋巴细胞白血病的辅助诊断。

T细胞受体β链可变区基因在芳香族抗癫痫药物皮肤不良反应机制中的研究进展

芳香族抗癫痫药物(aromatic antiepileptic drugs,AAEDs)是临床抗癫痫治疗中常用的一类药物,较其他抗癫痫药物更易诱发皮肤不良反应(cutaneous adverse drug reactions,cADRs),严重者可致患者死亡。目前,AAEDs-cADRs的机制尚未阐明,可能的影响因素包括遗传、免疫、病毒、药物代谢等。其中,涉及免疫机制相关的研究结果显示,T细胞介导的免疫应答在AAEDs-cADRs中起重要作用,T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链可变区(beta chain variable region,BV)基因会出现限制性取用。本文就TCR及TCR BV基因在AAEDs-cADRs机制中的研究进展进行综述。

应用半重叠TCRγ链特异性引物检测淋巴细胞白血病

采用更加敏感的半重叠式ＴＣＲγ特异性引物的ＰＣＲ方法，对２８例ＡＬＬ初治、ＣＲ及ＢＭＴ患儿进行检测。２８例ＡＬＬ患儿中１６例检出ＴＣＲγ特异性条带，占５７．１％。其中ＭＲＤ组１８例，阳性检出１２例，占６６．７％。其中免疫分型标记为Ｂ细胞型的４例，占２５％，免疫标记为Ｔ细胞型者全部出现ＴＣＲγ阳性条带。

淋巴细胞白血病和淋巴瘤T细胞受体基因重排研究

目的:探讨淋巴细胞白血病及淋巴瘤的T淋巴细胞受体(TCR)Vβ亚家族分布特点。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测急性淋巴细胞白血病5例,慢性淋巴细胞白血病2例,弥漫大B淋巴瘤3例及外周T淋巴瘤3例患者的外周血或淋巴结T淋巴细胞TCR Vβ亚家族表达。对照组为健康人8例。结果:对照组健康8例外周血淋巴细胞表达全部24个Vβ亚家族。急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞TCR Vβ亚家族均呈限制性表达,外周T淋巴瘤2例和弥漫大B淋巴瘤1例Vβ亚家族呈限制性表达,另外3例表达未受抑制。而淋巴瘤患者淋巴结标本Vβ亚家族全部呈限制性表达。结论:TCR基因重排对淋巴瘤和淋巴细胞白血病的诊断有辅助作用。

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞受体谱型特征及其与干扰素抗病毒近期疗效的关系

目的了解慢性乙型肝炎(CHB)患者细胞免疫功能,并探讨与干扰素-α抗病毒治疗早期病毒学应答的关系。方法入选19例接受干扰素-α治疗的CHB患者,治疗前收集外周血5 mL,分离并提取单个核细胞(PBMC)中的总RNA,利用反转录-荧光定量聚合酶链反应扩增T细胞受体(TCR)各β链可变区(BV)家族互补决定区3(CDR3)基因,溶解曲线分析各BV家族CDR3谱系的克隆性增生情况,同时观察治疗前及治疗3个月乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、肝功能水平变化。结果 19例CHB患者治疗前外周血TCR BV家族CDR3谱型均发生不同程度的单、寡及偏峰性克隆增生;治疗3个月时谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及HBV-DNA载量较治疗前均显著下降(P<0.01);病毒学应答组较无应答组TRBV CDR3克隆增生异常率、HBV-DNA载量及ALT水平差异均无统计学意义(P>0.05),应答组AST水平显著高于无应答组(P<0.05)。结论 CHB患者外周血T淋巴细胞存在不同程度的克隆性增生,且细胞免疫功能与干扰素-α抗病毒治疗的早期病毒学应答效果间无相关性,采用细胞免疫功能状态来评估干扰素抗病毒近期疗效存在局限性。

α_2-肾上腺素受体在T淋巴细胞中的表达

目的:从分子水平揭示T淋巴细胞表达α2-肾上腺素受体(α2-AR)mRNA的现象,为神经内分泌系统调节免疫功能的机制提供更多新的证据。方法:取大鼠肠系膜淋巴结细胞,用尼龙毛柱粘附法分离和纯化T淋巴细胞,应用E花环法检测T细胞的分离纯度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测T细胞中α2-AR mRNA的表达。结果:经过对肠系膜淋巴结细胞的分离和纯化,获得的T细胞的纯度明显高于未分离和纯化的淋巴细胞,但分离纯化后的T细胞,其活性仍然保持与分离前T细胞的活性相似;这些纯化的T细胞可表达α2-AR mRNA。结论:淋巴细胞可能像机体的其它组织细胞一样能表达和合成α2-AR。

T淋巴细胞受体与多发性硬化

免疫性T淋巴细胞在多发性硬化(MS)的发病中有重要地位,国外关于MS患者T淋巴细胞受体β链可变区的研究显示MS患者T淋巴细胞受体β链可变区的某些区段会有克隆性扩增,并且与临床类型、病程、MRI表现、扩展残疾状态评分有一定关系。本文就MS患者T淋巴细胞受体β链可变区的表现进行综述。

自身免疫模型小鼠T细胞受体可变区β链(TCR Vβ)偏向取用研究进展

T细胞是机体的主要免疫细胞,且在适应性免疫中起到主要作用。而T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性受体,是识别抗原的主要部位;TCR具有多样性和特异性,其中,最具多样性的是T细胞受体β链可变区(TCR Vβ),TCR Vβ的研究可为临床疾病的诊断和治疗提供新的思路和方向。TCR Vβ家族在各种疾病的动物模型的研究中具有重要的意义和应用价值,本文将对Vβ亚家族偏向取用在小鼠模型中的研究进展进行综述。

视神经脊髓炎(谱病)患者外周血T细胞受体可变区β链多态性研究

目的了解视神经脊髓炎(NMO)患者与视神经脊髓炎谱病(NMOSD)患者外周血T细胞受体可变区β链(TCRVβ)表现特点。方法收集NMO患者7例,NMOSD患者23例,健康志愿者30例,采取EDTA抗凝外周血2m L,应用TCRVβ单克隆抗体标记后进行流式细胞仪分析,应用相关软件分析24个TCRVβ亚家族成员表达水平。结果 NNO、NMOSD组TCRVβ扩增率、扩增程度较对照组增高(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05);NMO组CD4+TCRVβ5.1、CD8+TCRVβ13.6,NMOSD组CD4+TCRVβ2、CD8+TCRVβ2扩增频率高于对照组(P<0.014),NMO组CD8+TCRVβ11,NMOSD组CD4+TCRVβ11、CD8+TCRVβ11表达水平低于对照组(P<0.05),NMO组CD8+TCRVβ13.6扩增频率高于NMOSD组(P<0.014),NMO组CD8+TCRVβ9、17表达水平低于NMOSD组(P<0.05)。ROC曲线分析提示CD8+TCRVβ11的定量分析对NMO+NMOSD的诊断,CD4+TCRVβ2的定性分析、CD8+TCRVβ11的定量分析对NMOSD的诊断具有中等意义诊断价值。结论可通过检测部分TCRVβ片段对NMO与NMOSD的诊断提供方法与初步依据。

急性淋巴细胞白血病患儿化疗结束后T淋巴细胞克隆谱系分析

目的了解急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿化疗结束后T淋巴细胞免疫重建情况。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)高压变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测8例正常对照及44例化疗结束后的ALL患儿外周血T细胞受体(TCR)β链可变区(BV)第三互补决定区(CDR3)的克隆谱系。结果白血病化疗结束至48个月TCRBV家族仍可见表达增高或降低(P均<0.05)。化疗结束后TCRBVCDR3谱型多态性基本恢复,但寡克隆增生情况仍明显高于正常对照组(P均<0.05),小于6个月组差异最明显(P均<0.05)。16例普通B细胞急淋(c-ALL)BV8、BV5.1、BV5.2和BV12发生克隆性增生的频率较高,9例前B细胞急淋(pre-B)BV6家族发生克隆性增生较多。结论白血病患儿化疗结束至48个月T细胞免疫尚未完全恢复;T细胞克隆谱系异常以寡克隆增生为主。

应用PCR方法检测淋巴细胞白血病IgH和TCRγ基因重排

本文应用PCR方法扩增IgH基因重排产生的CDR-Ⅲ区序列和TCRγ基因重排产生的V_9区序列,共检测了20例淋巴细胞白血病病人,其中15例B淋巴细胞白血病均发生IgH基因重排,并有2例出现两种基因扩增产物,它的大小为70-140bp;另5例T淋巴细胞白血病中有2例发生TCRγ基因重排,扩增产物的大小为170-230bp,而在正常人和非淋巴细胞白血病中均未发现有IgH和TCRγ基因重排。

再生障碍性贫血T细胞受体Vβ基因表达及生血合剂对其的干预作用

目的 利用免疫学和分子生物学技术，着重从T细胞受体β链可变区（TCR Vβ）亚家族基因表达角度探讨再生障碍性贫血（AA）的免疫发病机制及中药复方生血合剂的治疗作用。方法 AA患者分别用生血合剂（治疗组10例）和环孢霉素（对照组10例）治疗6个月以上，采用RT-PCR、基因扫描方法检测治疗前后外周血单个核细胞TCR Vβ基因表达的变化。结果 20例AA患者Vβ24个亚家族基因谱型倾斜，寡克隆亚家族所占百分率明显增多，与健康人（10名）比较差异有显著性（P〈0．01）。30％～50％的AA患者存在Vβ2、Vβ5、Vβ6、Vβ15、Vβ16、Vβ22、Vβ23寡克隆亚家族，50％以上的患者存在Vβ8、Vβ21寡克隆亚家族。治疗后两组寡克隆亚家族均比治疗前减少（P〈0．05）。结论 多个克隆性增殖的T细胞家族参与了AA的发病过程，生血合剂可改善TCR Vβ谱型倾斜程度，降低异常T细胞克隆性增殖，从而减少异常克隆的T细胞对造血组织的免疫损伤，有利于骨髓造血功能的恢复。

单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病模型的建立及移植物抗宿主病靶器官T细胞受体克隆检测

目的:建立单倍型骨髓移植小鼠模型,观察单倍型骨髓移植小鼠移植物抗宿主病(GVHD)靶器官的组织病理表现及器官特异性T细胞受体克隆表达。方法:建立单倍型异基因移植小鼠GVHD模型,进行移植前后GVHD靶器官的病理分析,同时应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、结肠、肾脏等组织移植前、后T细胞受体β链可变区(TCRBV)20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达和CDR3克隆的性质。结果:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14d临床开始出现典型的GVHD表现。移植后24d受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞,而肾脏等非GVHD靶器官中浸润的淋巴细胞为多克隆的T细胞增生。结论:单倍型骨髓移植小鼠在移植后14d出现典型的GVHD表现,GVHD靶器官出现的T细胞单克隆及寡克隆增生可能与GVHD的发生相关。

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBVCDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明:单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBVCDR3分子存在一些C′末端保守的CDR3氨基酸基序(motif)。结论:单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBVCDR3基序,识别类似的抗原。

胰蛋白酶原基因与T淋巴受体Vβ7.2片段之间的间隔序列分析

目的鉴定人类T淋巴细胞受体β链基因(Tcell receptor beta-chain,TCRβ)上两个毗邻基因,即胰蛋白酶原基因(cationictrypsinogen,PRSS1)与TCR Vβ7.2片段之间的间隔序列在胰腺炎和健康人群中的分布情况。方法对来自3位胰腺炎患者及2位健康体检者的DNA样本利用特异引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,产物经电泳、纯化后直接测序,并分析该序列的碱基在胰腺炎组和正常人群中的组成情况。结果利用自行设计的引物在2份胰腺炎患者外周血DNA样本中扩增出片段长度约为2.6 kb的条带,DNA测序结果显示两个毗邻基因之间的片段在健康人群和胰腺炎人群中均不是稳定组成。结论TCRβ序列中胰蛋白酶原基因(PRSS1)与TCR Vβ7.2基因之间间隔序列存在不稳定性。