血必净注射液对脓毒症大鼠Claudin4蛋白和辅助性T淋巴细胞1型表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肺组织Claudin4蛋白表达的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠100只,体重(250±25)g,随机分入4组,每组25只:假手术组大鼠只开腹、关腹和复苏,不行盲肠结扎穿孔术(CLP);脓毒症组大鼠行CLP;血必净3h组大鼠于CLP后3h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg;血必净12h组大鼠于CLP后12h腹腔内注射血必净注射液2mL/kg。每组随机留取8只大鼠进行生存率分析。假手术组、脓毒症组、血必净3h组大鼠在术后6、15和24h,血必净12h组大鼠在术后15和24h各随机处死5只,分别留取血液和肺组织标本,测定肺组织湿/干质量比(肺水肿指数),对肺组织进行病理学观察并进行肺损伤病理学评分,测定血清促炎细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用免疫组织化学方法测定肺组织骨架蛋白Claudin4蛋白表达情况,采用流式细胞术检测辅助性T淋巴细胞1型(Th1)在外周血单核细胞中的表达情况。结果假手术组、脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠的术后72h存活率分别为8/8、0、1/8和0,血必净3h组显著高于脓毒症组(P<0.01),血必净12h组与脓毒症组的差异无统计学意义(P>0.05)。假手术组大鼠术后各项检测指标均基本不变。脓毒症组、血必净3h组和血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数,以及术后6、15和24h的肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6、15和24h,以及血必净12h组大鼠术后15和24h的肺水肿指数、肺损伤病理学评分、血清IL-6和TNF-α水平、肺组织Claudin4蛋白表达阳性率均显著高于血必净3h组同时间点(P值分别<0.05、0.01);脓毒症组与血必净12h组术后同时间点间上述指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。脓毒症组和血必净3h组大鼠术后各时间点的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于假手术组同时间点(P值均<0.01);脓毒症组大鼠术后6和15h的外周血单核细胞中Th1的表达率均显著高于血必净3h组同时间点(P值均<0.01),术后24h的外周血单核细胞中Th1的表达率显著低于血必净3h组同时间点(P<0.05)。结论早期使用血必净治疗可以有效地抑制脓毒症大鼠肺组织的炎性反应,减轻肺损伤,提高大鼠存活率,其可能机制与抑制肺组织Claudin4蛋白表达,降低肺泡通透性有关。

克拉霉素对铜绿假单胞菌慢性肺部感染小鼠辅助性T淋巴细胞1型/辅助性T淋巴细胞2型免疫平衡的调节作用

目的探讨克拉霉素对铜绿假单胞菌(PA)慢性肺部感染小鼠肺组织辅助型T淋巴细胞(Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法将54只小鼠随机分入克拉霉素组、0.9%氯化钠溶液组和对照组。克拉霉素组和0.9%氯化钠溶液组通过小鼠气道接种由包裹PA的琼脂糖珠方法建立的PA慢性肺部感染模型,自建模后第7天起分别给予克拉霉素和0.9%氯化钠溶液治疗,对照组小鼠经气道接种无菌琼脂糖珠给予0.9%氯化钠溶液。分别于建模后第7、10、14天处死小鼠。标本进行肺组织细菌培养、病理学检查、支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ-干扰素(IFN-γ)/白细胞介素(IL)-4水平测定和肺组织转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA表达水平分析。结果克拉霉素组小鼠在治疗后慢性肺部感染的症状明显改善。经气道接种后第7天,0.9%氯化钠溶液组和克拉霉素组BALF中IFN-γ、IL-4水平均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组的IFN-γ水平显著低于0.9%氯化钠溶液组(P<0.05)。气道接种后第10、14天,克拉霉素组BALF中IL-4水平均显著高于0.9%氯化钠溶液组和对照组同时间点(P值均<0.05),而IFN-γ/IL-4比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组同时间点(P值均<0.05)。气道接种后第7、10天,克拉霉素组与0.9%氯化钠溶液组的Th1、Th2细胞转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA表达水平相近,均显著高于对照组(P值均<0.05)。气道接种后第14天,克拉霉素组T-betmRNA表达水平、T-betmRNA/GATA-3mRNA比值均显著低于0.9%氯化钠溶液组(P值均<0.05)。结论在PA慢性肺部感染初期采用克拉霉素治疗可使小鼠肺组织的Th1/Th2平衡向Th2偏移,有利于缓解气道炎症。

猴嗜T淋巴细胞病毒l型核酸快速检测方法的建立

猴嗜T淋巴细胞病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1,STLV-1)是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一,其潜伏期较长,主要侵害猴的免疫系统。为强化口岸对进出境野生及实验用灵长类动物STLV-1感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了确认。

嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ型核心蛋白P24基因的克隆与表达

目的 从感染HTLV-1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增编码HTLV-1核心蛋白P24的cDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA,应用巢式PCR方法扩增出HTLV-1核心蛋白P24的cDNA并测序,与pGEX-20T载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21中表达,采用ELISA和Westernblot分析重组蛋白活性。结果HTLV-1核心蛋白P24基因序列高度保守,构建重组载体后,在大肠杆菌中表达的重组蛋白,经检测具有较强的抗原活性。结论 成功地表达了HTLV-1型病毒的核心蛋白P24基因,为国产诊断试剂和疫苗的研发打下了基础。

人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染复制及致病机制研究进展

主要针对人类T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)及其与成人T淋巴细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL)的关系,尤其是人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染、复制及致病机制进行了综述.HTLV-1属于逆转录病毒,它的感染可导致成人T细胞白血病.HTLV-1病毒主要通过细胞与细胞间接触进行传播,并通过促进其感染细胞的增殖增加病毒拷贝数.病毒基因的调控及宿主免疫系统共同决定了体内HTLV-1病毒的载量.病毒编码的HBZ和Tax蛋白在ATL发生过程中发挥着至关重要的作用,它们在功能上相互配合,共同调节病毒的复制,诱导感染细胞增殖及病毒传播.对于HTLV-1病毒与ATL关系的深入研究,将对认识病毒和宿主的相互作用及相关传染性疾病的防治带来新的启示.

循环滤泡型辅助性T淋巴细胞及IL-21在自身免疫性肝炎中的初步研究

目的检测外周血滤泡型辅助性T淋巴细胞百分率(Tfh)及细胞上CCR7、PD-1、IL-21R等分子的表达水平,血清IL-21的表达水平,为进一步研究Tfh细胞及其相关分子在自身免疫性肝炎发病机制中的作用提供实验依据。方法收集20例自身免疫性肝炎患者与20例健康志愿者外周抗凝血,流式细胞仪检测循环Tfh细胞百分率与细胞膜上CCR7,PD-1,IL-21R等分子的表达水平,并进一步分析CCR7+Tfh亚型细胞上PD-1、IL-21R等分子的表达水平,同时ELISA检测外周血血清IL-21的水平;统计分析健康对照与自身免疫性肝炎患者的外周血Tfh细胞百分率、细胞膜上PD-1与IL-21R分子表达水平,血清IL-21表达水平的差异。结果 1)循环Tfh细胞百分率在健康对照(4.793%±1.5609%)与自免肝患者(8.915%±3.235%)具有显著性差别;循环Tfh细胞表达的PD-1分子(健康对照:91.173%±5.032%,自免肝患者:5.177%±3.267%)与IL-21R(健康对照97.625%±1.137%,自免肝患者27.800%±7.918%)具有显著性差别;2)外周血血清IL-21水平[健康对照(:444.75±75.05)pg/ml,自免肝患者(:862.80±109.83)pg/ml]也具有显著性差别;3)自身免疫性肝炎患者循环Tfh细胞百分率与血清GGT、ALP呈正相关与细胞上的PD-1表达水平呈负相关,后者与血清TB呈正相关。结论 Tfh细胞及其表达的相关分子(PD-1,IL-21R)在健康人与自免肝患者的表达水平是不同的,可能参与介导了自身免疫性肝炎的发生与发展。

猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。

猴T淋巴细胞趋向性病毒l型RPA和荧光RPA检测方法的建立

目的为了提高口岸对进出境野生及实验用灵长类动物猴T淋巴细胞趋向性病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1, STLV-1)感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了重组酶聚合酶扩增(RPA)和荧光RPA检测STLV-1的方法。方法使用软件分析不同国家和地区分离的STLV-1的gag蛋白(gag polyprotein)基因序列,设计RPA引物和探针,建立RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行验证。结果通过将猴其它特定病原体与STLV-1对比检测,证实建立的检测方法具有良好的特异性;通过敏感性试验,证实建立的RPA和荧光RPA方法检测下限与PCR一致;通过对30份STLV-1阳性和阴性核酸样本的检测,证实建立的RPA和荧光RPA方法,具有PCR方法一样的稳定性和可靠性。结论本研究建立的RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法具有良好的特异性、敏感性和可靠性,可应用于STLV-1的监测和流行病学调查。

CD45RA/CD45RO过渡表达γδ型T细胞急性淋巴细胞白血病1例报道并文献复习

γδ型T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是起源于T系定向前体细胞的恶性肿瘤,发病率低,仅占T-ALL的0.3%~3.0%。恶性T细胞CD45RA/CD45RO表达模式以CD45RA^(-)CD45RO^(+)发生率最高,CD45RA/CD45RO过渡表达者罕见。本文报道了1例CD45RA/CD45RO过渡表达γδ型T-ALL,对其免疫表型进行了深入分析并回顾相关文献,以期为此类疾病的诊断提出新的参考。

微小残留病在监测儿童急性T淋巴细胞白血病复发中的意义

目的探讨微小残留病(MRD)监测急性T淋巴细胞白血病患儿复发的临床指导意义。方法采用四色流式细胞术对2006年8月1日-2008年4月1日32例急性T淋巴细胞白血病住院患儿在治疗不同时间点进行追踪监测,分析不同MRD水平与患儿的临床反应及复发之间的关系。结果诱导治疗第33天以及诱导治疗结束巩固治疗前(治疗12周)MRD<10-4和≥10-4两组患儿的复发率差异有显著性(P=0.003,P=0.002)。结论监测急性T淋巴细胞白血病患儿MRD水平,在评估早期治疗反应、监测复发以及估计预后中具有重要临床价值。

儿童T细胞型急性淋巴细胞白血病中NOTCH1基因突变的特征及临床意义研究

目的阐明NOTCH1基因突变在儿童T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL)中的特征及临床意义。方法通过对28例T-ALL患儿NOTCH1基因的异二聚体(HD)区及脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸(PEST)区测序,研究T-ALL患儿中NOTCH1基因突变的发生率、位点、类型及其与预后的相关性。结果 28例T-ALL患儿中,15例(51.57%)患儿的NOTCH1基因发生突变,均为杂合性突变。突变患儿入院时外周幼稚淋巴细胞比例及骨髓幼稚细胞比例与无突变患儿相比均明显升高(P<0.05)。28例患儿的一年缓解率为75.0%(21/28),其中突变患儿的一年缓解率为80.0%(12/15),无突变患儿为69.2%(9/13)。此外,3例复发的突变组患儿至一年随访时均已死亡(一年时病死率为20%),而4例复发的无突变患儿经再次化疗后至一年随访时均存活(一年时病死率为0%)。结论儿童T-ALL患者中NOTCH1基因突变发生率高、位点多样;NOTCH1突变者初诊时疾病更严重,短期预后较好、而复发后挽救治疗预后更差的趋势。

T细胞型大颗粒淋巴细胞白血病1例报道并文献复习

T-大颗粒淋巴细胞白血病(T-large granular lymphocytic leukemia，T-LGLL)属少见类型白血病。主要特征为外周血及骨髓中大颗粒淋巴细胞克隆性增殖伴粒细胞减少，免疫表型显示T细胞起源，分子遗传学检查发现TCR基因重排。其漏诊率较高，本文报道1例病例并结合文献，讨论其发病、诊断、治疗及预后。

广东等五省区猴场实验猴血清T淋巴细胞趋向性病毒1型抗体检测分析

为调查广东等地实验猴养殖场猴T淋巴细胞趋向性病毒1型(Simian T-lymphotropic virus 1,STLV-1)的流行情况,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对采集自广东、广西、云南、海南以及河南境内主要猴场的752份实验猴血清样本进行STLV-1抗体检测。结果显示,不同猴场实验猴STLV-1感染率差异较大,其中,云南猴场的感染率最高,达到25%,其次是广东境内的猴场,感染率为5%~13.5%,海南与河南境内猴场的检出率较低,分别为5%和3.13%,广西猴场未检出。按照动物种属划分,恒河猴感染率高于食蟹猴且差异显著(P<0.05)。调查结果可为实验猴生产繁育、质量控制和生物净化提供参考。

Notch1的异常激活与T细胞型急性淋巴细胞白血病

Notch1受体的异常激活在T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL)的发病中起主导作用。近期研究表明,超过60%的T-ALL患者中存在Notch1的激活性突变。文章简要介绍Notch1异常激活在T-ALL发病中的作用,以及针对Notch1异常激活的现有方法及其面临的问题,为T-ALL的研究及靶向治疗提供参考。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

血小板表达的HLA-G对人类T淋巴细胞白血病1型病毒蛋白Tax表达的影响

目的探讨血小板表达的HLA-G对人类嗜T淋巴细胞1型病毒(HTLV-1)蛋白Tax表达的影响。方法从抗凝全血中分离血小板,运用流式细胞术检测血小板膜分子HLA-G;运用ELISA技术检测血小板裂解前后分泌型HLA-G分子含量;使用血小板裂解液(PL)培养HTLV-1的人淋巴瘤细胞MT2,采用蛋白免疫印迹技术(WB)评价血小板表达的HLA-G对HTLV-1蛋白Tax表达的影响。结果血小板膜表面高表达膜型mHLA-G;血小板裂解后分泌型sHLA-G表达量(ng/mL)升高(15.73±1.01vs6.65±0.47),且随着血小板含量的升高而升高,呈剂量依赖效应;与胎牛血清相比,PL明显促进MT2细胞高表达HLA-G蛋白和HTLV-1病毒Tax蛋白,在PL中加入抗HLA-G抗体可有效抑制MT2细胞表达Tax、HLA-G蛋白。结论血小板上高表达的免疫耐受分子HLA-G可诱导人淋巴瘤细胞MT2高表达HTLV-1蛋白Tax,进而促进病毒感染。

结核性及恶性肿瘤性胸腔积液淋巴细胞亚群比例以及Th1／Th2免疫平衡研究

目的探讨Th1/Th2免疫应答平衡在结核性和恶性肿瘤性胸腔积液病理生理过程中的可能作用。方法对24例治疗前结核性胸腔积液以及28例患者恶性胸腔积液患者胸液标本进行有核细胞计数、分类和流式细胞仪检测淋巴细胞亚群,检测CD3+,CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞亚群比例,并计算CD4+/CD8+值;利用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胸液标本中INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度。结果结核性胸腔积液患者胸水中T辅助淋巴细胞以CD3+CD4+细胞为主,其CD3+细胞比例、CD3+CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+值均高于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。2组研究对象INF-γ、IL-18、TNF-α以及IL-10的浓度分别是(中位数):结核性胸腔积液组942.0、1 526、62 pg/ml和153 pg/ml;恶性胸腔积液组10.35、1 763、8.85 pg/ml和66.85 pg/ml。结核性胸腔积液中INF-γ、TNF-α以及IL-10均明显高于恶性肿瘤性胸腔积液中的水平(P<0.01),且平均分别高约90倍、7倍和2倍。IL-18在2组胸腔积液中的含量无显著性差异(P>0.05)。结核性胸腔积液IL-18/IL-10明显低于恶性肿瘤性胸腔积液组(P<0.01)。结论结核性胸腔积液表现为Th1免疫应答为主;而恶性肿瘤性胸腔积液患者存在明显的细胞免疫功能低下。这种低下可能主要以T辅助淋巴细胞受损、Thl免疫应答降低以及Th2免疫应答升高为主。IFN-γ可作为鉴别结核性胸腔积液和恶性肿瘤性胸腔积液特异性和敏感度较高的指标。

NFκB与成人T淋巴细胞白血病关系的研究进展

在成人T淋巴细胞白血病(ATL)细胞中,人类T细胞白血病Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)非结构基因编码的TAX蛋白对调节病毒的复制和核因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)的激活起关键作用。NFκB是一类细胞核转录因子,它能通过经典的TAX蛋白激活途径或者通过不依赖TAX蛋白的途径而活化,使得宿主细胞CD4^+T淋巴细胞内一系列与细胞增殖存活有关的基因表达,如细胞因子、细胞凋亡调控蛋白、抗凋亡蛋白等,最终细胞无限增殖和转化导致ATL的发生,近些年NFκB已被作为治疗ATL的分子靶点。

中药复方提取物对猴免疫缺陷病毒感染恒河猴外周CD4＋T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨中药复方提取物湘A1号（HNA-1）对猴免疫缺陷病毒（SIV）感染恒河猴外周血CD4＋T淋巴细胞亚群的影响。方法利用HNA-1治疗SIV感染恒河猴，同时对不同时间点的冻存外周血单核细胞（PBMC）进行幼稚型细胞、中央型记忆细胞和效应型记忆细胞的分类和计数，并检测血浆病毒载量，对各组数据进行统计分析。结果高、低剂量治疗组CD4＋T淋巴细胞绝对数治疗8周后较治疗前和对照组出现了较为明显的上升（P〈0．05），且停药后较快回落。高剂量组治疗8周和16周后幼稚型CD4＋T淋巴细胞比例均较治疗前明显增长（P〈0．05），低剂量组治疗8周和16周后也出现了明显增长（P〈0．05）。转换成细胞绝对数后，高、低剂量组幼稚型CD4＋T淋巴细胞分别从治疗前的（364±342）个／μl、（309±216）个/μl，增至治疗8周后的（699±319）个／μl、（639±337）个／μl，差异有统计学意义（P〈0．05）。而血浆病毒载量改变不明显。结论中药能有效增加SIV感染恒河猴的外周幼稚型CD4＋T淋巴细胞，HNA-1可能会延缓获得性免疫缺陷综合征的发生，有望作为高效抗逆转录病毒疗法的辅助药物加快免疫重建，值得更长期、全面地对其进行深入研究。