曲马多、吗啡术后自控镇痛对肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的影响比较

目的:比较曲马多、吗啡术后自控镇痛对肺癌患者行肺叶切除术后外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法:20例患者采用美国麻醉医师协会分级法(ASA)分级,均为Ⅰ～Ⅱ级肺癌患者,择期行肺叶切除手术。随机分为曲马多、吗啡术后自控镇痛组。两组患者均接受相同的气管插管静脉复合吸入麻醉。分别于麻醉前、术毕、术后4h、术后24h采取外周静脉血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+。结果:两组患者术毕及术后4hCD3+、CD4+、及CD4+/CD8+明显低于术前(P<0.05),术后24h曲马多组虽然仍低于术前值,但已有所恢复,反之吗啡组上述各数值尚未上升。结论:曲马多自控镇痛较吗啡能改善术后细胞免疫抑制。

大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应

目的:建立分离、纯化和培养大鼠肝脏Kupffer细胞(KC)的方法,并观察KC对同种反应性T细胞增殖的影响。方法:采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度离心技术,进行肝移植受体大鼠肝脏KC分离、纯化和培养。在体外实验中进一步观察KC在MLR(混合淋巴细胞反应)体系中对同种反应性T细胞增殖程度的影响。结果:KC得率为(1.1±0.2)×107/肝,平均存活率为(93.5±1.8)%,纯度≥90%,ED-2(+)。培养24h可见大量细胞伸展生长,呈现典型的星形或多边形。在MLR体系中加入未经辐照的KC后,反映T细胞增殖程度的每分钟脉冲数值明显降低,且接受联合免疫治疗并长期存活的D、E两组所获得的KC对T细胞增殖有着更为明显的抑制作用。结论:本实验成功建立了分离、纯化和培养大鼠KC的方法。KC对同种反应性T细胞增殖具有抑制作用,尤其从接受联合免疫治疗后长期存活受体大鼠所获得的KC抑制作用更为明显。

系统性红斑狼疮患者调节性T细胞及相关细胞因子的变化

目的检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞占CD4+T细胞的比率以及可溶性细胞因子TGF-β及IL-10、IL-12的血清浓度,初步探讨调节性T细胞在SLE体内发病机制中可能的作用。方法采用流式细胞仪检测54例SLE患者及20例正常对照外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞比率,ELISA检测血清细胞因子(TGF-β及IL-10、IL-12)。结果①SLE组CD4+CD25highT细胞的比率较正常对照组降低;TGF-β水平较正常对照组降低,IL-10、IL-12水平较正常对照组均升高;CD4+CD25highT细胞与IL-12呈负相关;②初发SLE组CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞的比率均较正常对照组显著降低;CD4+CD25highT细胞与IL-10及IL-12均呈负相关。结论调节性T细胞可能通过细胞因子TGF-β、IL-10、IL-12参与SLE的发病机制,但具体机制有待于进一步研究。

利用RNA干扰诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性

目的探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的免疫学特性。方法取SD大鼠骨髓，培养分离树突状细胞（DC），设计、合成主要组织相容性复合物（MHC）I类小片段干扰RNA（siRNA），以MHCIsiRNA转染DC。先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCIsiRNA的IX2，然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8^＋T淋巴细胞共同培养，通过磁珠法分离出Ts细胞。分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞（反应细胞）和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞（刺激细胞）组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞，检测反应细胞增殖情况；分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白（OVA）刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞，然后再按不同比例加入Ts细胞，检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况；在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2（rrIL-2），观察IL-2对Ts细胞功能的影响；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）测定Ts细胞中转化生长因子／3（TGF-β）和7干扰素（IFN-γ）mRNA的表达，流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达。结果Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之间的混合淋巴细胞反应（MLR）具有抑制作用，但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用。在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后，SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加（P〉0．05）。与CD8^＋ CD28^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞比较，Ts细胞的TGF-β和IFN-γmRNA的表达量明显升高（P〈0．01，P〈0．05），而CD25的表达量明显降低（P〈0．05）。结论采用经MHCIsiRNA干扰的DC能够诱导CD8^＋T淋巴细胞产生CD8^＋CD28^-Ts细胞；Ts细胞在体外具有免疫抑制特性，其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转，且其免疫调节作用具有抗原特异性。

西安地区肠道病毒71型手足口病患儿细胞免疫功能的临床研究

目的:研究西安地区肠道病毒71型手足口病患儿急性期外周血T淋巴细胞亚群的变化,以探讨其细胞免疫功能变化的临床意义。方法:根据病情轻重,将100例肠道病毒71型手足口病患儿分为重症组40例,轻症组60例,并与20例同期身体健康的同龄儿童进行对照,应用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群。结果:三组患儿总T淋巴细胞(CD3+CD19-)、抑制性T淋巴细胞(CD3+CD8+)以及辅助性T淋巴细胞(CD3+CD4+)的百分率比较具有显著性差异(P<0.05);其中T淋巴细胞、抑制性T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞在重症组最低,对照组最高;NK(CD16+CD56+)细胞百分率、B(CD19+)淋巴细胞百分率、辅助/抑制性T淋巴细胞比值在三组间的比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:肠道病毒71型手足口病患儿急性期细胞免疫功能受到抑制,重症手足口病患儿存在显著的细胞免疫功能紊乱。