槲皮素调节T淋巴细胞效应对肺纤维化大鼠气道反应的作用及机制

目的:探讨槲皮素调节T淋巴细胞效应对肺纤维化大鼠气道反应的作用机制。方法:将大鼠分为对照组、模型组、槲皮素组,放射免疫测定法检测大鼠肺纤维化指标羟脯氨酸(HYP)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)含量,ELISA检测血清中白介素17(IL-17)、白介素4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化,观察气道反应及肺组织病理学变化。结果:与对照组比较,模型组HYP、HA、LN均显著增加,肺出现组织纤维化;与模型组比较,槲皮素组大鼠HYP、HA、LN含量明显下降。模型组中IL-17、IL-4表达较对照组升高,IFN-γ表达较对照组降低;槲皮素组血清中IL-17、IL-4较模型组明显下降,IFN-γ表达较模型组明显升高。与对照组比较,模型组大鼠CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平明显降低,CD8~+水平升高;槲皮素组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平较模型组升高,且CD8~+水平较模型组明显下降。在同等剂量mACh激发的气道反应性检测中,模型组大鼠的压力峰值-时间指数(APTI)值显著高于对照组;与模型组比较,槲皮素组APTI值明显降低。模型组肺泡结构紊乱,多数肺泡出现闭锁、裂隙、萎陷,部分融合成大肺泡,肺泡腔及间质内有炎性细胞渗出,肺泡间隔明显增宽增厚。槲皮素组较模型组肺泡腔炎症细胞浸润减轻,肺间隔略微增宽,部分肺泡融合,结构紊乱。结论:槲皮素可通过调节T淋巴细胞效应改善肺纤维化大鼠的高气道反应,进而对肺纤维化气道具有很好的治疗效果。

曲马多、吗啡术后自控镇痛对肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的影响比较

目的:比较曲马多、吗啡术后自控镇痛对肺癌患者行肺叶切除术后外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法:20例患者采用美国麻醉医师协会分级法(ASA)分级,均为Ⅰ～Ⅱ级肺癌患者,择期行肺叶切除手术。随机分为曲马多、吗啡术后自控镇痛组。两组患者均接受相同的气管插管静脉复合吸入麻醉。分别于麻醉前、术毕、术后4h、术后24h采取外周静脉血,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+。结果:两组患者术毕及术后4hCD3+、CD4+、及CD4+/CD8+明显低于术前(P<0.05),术后24h曲马多组虽然仍低于术前值,但已有所恢复,反之吗啡组上述各数值尚未上升。结论:曲马多自控镇痛较吗啡能改善术后细胞免疫抑制。

KDEL修饰的HSV-2CD8^+T细胞表位促进CTL效应的研究

目的:研究赖氨酸天冬氨酸谷氨酸亮氨酸(Lys-Asp-GluLeu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype2,HSV2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte,CTL)效应。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,用各抗原肽免疫C57BL/6小鼠,采用3HTdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应、标准4h51Cr释放试验检测CD8+T细胞特异性CTL效应,观察HSV2CD8+T细胞表位(SSIEFARL,S1)、KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL-KDEL,S1-KDEL)、4拷贝串联的CTL表位[(SSIEFARL)4,S4]及KDEL修饰的串联CTL表位[(SSIEFARL)4KDEL,S4-KDEL]的特异性细胞免疫应答。结果:3HTdR掺入试验中,S4组和S4KDEL组cpm值显著高于对照组和S1组、S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组的cpm值显著高于S4组(P<0.05);S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,cmp值亦无显著性差异(P>0.05)。以S1致敏的EL4细胞为靶细胞的杀伤实验中,S4和S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于对照组、S1组及S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于S4组(P<0.05),S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,差异亦无显著性(P>0.05);以EL4细胞为靶细胞的实验中,实验组的杀伤率均在10%以下,与对照组?

大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应

目的:建立分离、纯化和培养大鼠肝脏Kupffer细胞(KC)的方法,并观察KC对同种反应性T细胞增殖的影响。方法:采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度离心技术,进行肝移植受体大鼠肝脏KC分离、纯化和培养。在体外实验中进一步观察KC在MLR(混合淋巴细胞反应)体系中对同种反应性T细胞增殖程度的影响。结果:KC得率为(1.1±0.2)×107/肝,平均存活率为(93.5±1.8)%,纯度≥90%,ED-2(+)。培养24h可见大量细胞伸展生长,呈现典型的星形或多边形。在MLR体系中加入未经辐照的KC后,反映T细胞增殖程度的每分钟脉冲数值明显降低,且接受联合免疫治疗并长期存活的D、E两组所获得的KC对T细胞增殖有着更为明显的抑制作用。结论:本实验成功建立了分离、纯化和培养大鼠KC的方法。KC对同种反应性T细胞增殖具有抑制作用,尤其从接受联合免疫治疗后长期存活受体大鼠所获得的KC抑制作用更为明显。

鼻咽癌患者外周血调节性T细胞变化

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者外周血调节性T(Tr)细胞比例变化的特点及其与临床分期的关系和意义。方法采用流式细胞技术检测56例NPC患者治疗前后和14例健康对照者外周血中T细胞亚群和CD4+CD25+Tr细胞的比例。结果 NPC患者治疗前CD3、CD4降低,CD4+CD25+Tr细胞比例增高(P<0.05),中晚期患者CD3、CD4低于早期患者和健康对照组,而CD4+CD25+Tr细胞则显著高于该两组(P<0.05);54例治疗后患者CD3、CD8和CD4+CD25+Tr细胞比例较治疗前降低(P<0.05),而中晚期患者CD4+CD25+Tr细胞比例有降低的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NPC患者存在免疫抑制,治疗后免疫抑制程度降低;免疫状态的呈现是多因素综合作用的结果,免疫抑制仅仅是免疫功能异常的一个表现。

系统性红斑狼疮患者调节性T细胞及相关细胞因子的变化

目的检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞占CD4+T细胞的比率以及可溶性细胞因子TGF-β及IL-10、IL-12的血清浓度,初步探讨调节性T细胞在SLE体内发病机制中可能的作用。方法采用流式细胞仪检测54例SLE患者及20例正常对照外周血CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞比率,ELISA检测血清细胞因子(TGF-β及IL-10、IL-12)。结果①SLE组CD4+CD25highT细胞的比率较正常对照组降低;TGF-β水平较正常对照组降低,IL-10、IL-12水平较正常对照组均升高;CD4+CD25highT细胞与IL-12呈负相关;②初发SLE组CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25highT细胞的比率均较正常对照组显著降低;CD4+CD25highT细胞与IL-10及IL-12均呈负相关。结论调节性T细胞可能通过细胞因子TGF-β、IL-10、IL-12参与SLE的发病机制,但具体机制有待于进一步研究。

维生素C对DC-T过继免疫细胞功能的影响

目的通过研究VC处理过的DC细胞在过继免疫T细胞培养中是否发挥促进作用,进一步探讨维生素C对于免疫调控的作用机制,同时为制备非特异性CTL提供方法及思路。方法采集健康志愿者外周血50 ml,用淋巴细胞分离液分离外周血PBMC,贴壁后获得单核细胞。用VC对DC进行孵育(24 h)后经PBS洗涤,培养5 d后与添加anti-CD3+单抗的T细胞混合培养至第12天,同时设立空白对照组(none DC组、0 mmol/L VC-DC组)。流式细胞仪检测T细胞亚群及细胞因子分泌情况。LDH法检测VC对DC-T细胞非特异性杀伤情况。结果 VC处理的DC细胞可显著刺激T细胞成熟,其CD8+CD28+及CD40L表型有显著升高(61.23%±6.78%,68.87%±4.37%),同时发现Treg细胞明显降低(4.51%±1.22%)。细胞因子分泌情况分析结果显示,vc DC可促进T细胞因子分泌,IFN-γ、IL-2有显著升高(32.29%±3.26%,19.66%±4.37%),IL-4有显著降低(3.36%±1.29%)。杀伤结果显示对不同肿瘤细胞非特异性杀伤有明显增强。结论 VC通过致敏DC进而可激活T细胞向非特异性CTL(CD8+CD28+)分化,提高T细胞因子分泌能力。

西安地区肠道病毒71型手足口病患儿细胞免疫功能的临床研究

目的:研究西安地区肠道病毒71型手足口病患儿急性期外周血T淋巴细胞亚群的变化,以探讨其细胞免疫功能变化的临床意义。方法:根据病情轻重,将100例肠道病毒71型手足口病患儿分为重症组40例,轻症组60例,并与20例同期身体健康的同龄儿童进行对照,应用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群。结果:三组患儿总T淋巴细胞(CD3+CD19-)、抑制性T淋巴细胞(CD3+CD8+)以及辅助性T淋巴细胞(CD3+CD4+)的百分率比较具有显著性差异(P<0.05);其中T淋巴细胞、抑制性T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞在重症组最低,对照组最高;NK(CD16+CD56+)细胞百分率、B(CD19+)淋巴细胞百分率、辅助/抑制性T淋巴细胞比值在三组间的比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:肠道病毒71型手足口病患儿急性期细胞免疫功能受到抑制,重症手足口病患儿存在显著的细胞免疫功能紊乱。

利用RNA干扰诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性

目的探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的免疫学特性。方法取SD大鼠骨髓，培养分离树突状细胞（DC），设计、合成主要组织相容性复合物（MHC）I类小片段干扰RNA（siRNA），以MHCIsiRNA转染DC。先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCIsiRNA的IX2，然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8^＋T淋巴细胞共同培养，通过磁珠法分离出Ts细胞。分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞（反应细胞）和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞（刺激细胞）组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞，检测反应细胞增殖情况；分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白（OVA）刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞，然后再按不同比例加入Ts细胞，检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况；在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2（rrIL-2），观察IL-2对Ts细胞功能的影响；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）测定Ts细胞中转化生长因子／3（TGF-β）和7干扰素（IFN-γ）mRNA的表达，流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达。结果Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之间的混合淋巴细胞反应（MLR）具有抑制作用，但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用。在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后，SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加（P〉0．05）。与CD8^＋ CD28^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞比较，Ts细胞的TGF-β和IFN-γmRNA的表达量明显升高（P〈0．01，P〈0．05），而CD25的表达量明显降低（P〈0．05）。结论采用经MHCIsiRNA干扰的DC能够诱导CD8^＋T淋巴细胞产生CD8^＋CD28^-Ts细胞；Ts细胞在体外具有免疫抑制特性，其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转，且其免疫调节作用具有抗原特异性。

恒河猴外周血调节性T淋巴细胞的分离纯化及鉴定

目的建立恒河猴外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(regulatory T cells,Tregs)快速有效的分离纯化方法。方法 4～5岁健康恒河猴10只,雌性4只,雄性6只,体重5～8 kg;于大隐静脉抽取外周血,每只抽取8 mL。密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),分别采用非人灵长类Tregs分离试剂盒的生物素标记的混合抗体和磁珠标记的抗生物素抗体阴性分选,以及大鼠抗人CD4-活化蛋白C(activatedprotein C,APC)和抗APC多选试剂盒中的磁珠标记的抗APC抗体阳性分选出CD4+T淋巴细胞,比较两种方法获得细胞的得率、活性及纯度;选择得率、活性和纯度较高的分选方法获得的CD4+T淋巴细胞,用磁珠标记的抗人CD25抗体进行阳性分选,获得CD4+CD25+Tregs,流式细胞仪检测纯度、活性及FoxP3表达水平,以及Tregs对刀豆蛋白(concanavalinA,ConA)刺激的自体CD4+CD25-效应性T淋巴细胞(effective T cells,Teffs)增殖的抑制功能。结果 CD4+T淋巴细胞阳性分选和阴性分选后,细胞活性均达95%左右,差异无统计学意义(P>0.05),但阳性分选后CD4+T淋巴细胞得率和纯度均显著高于阴性分选(P<0.05)。后续CD4+CD25+Tregs分选采用阳性分选法获得的CD4+T淋巴细胞。经双阳性分选收集的目的细胞中CD4+CD25+Tregs占76.2%±8.6%,活细胞比例为93.3%±4.7%,FoxP3阳性细胞比例为74.2%±6.9%。混合培养后Tregs均对ConA刺激的Teffs的增殖有抑制作用。结论免疫磁珠双阳性分选法能有效分选出恒河猴外周血中有功能的CD4+CD25+Tregs。

灸法治疗难治性肺结核的红细胞免疫学观察

本文旨在观察艾灸调节慢性难治性肺结核［ＣＩＰＴ］患者的红细胞免疫功能变化，并考察有关循环免疫复合物含量及Ｔ淋巴细胞亚群比值变化。结果表明：难治性肺结核患者的红细胞免疫功能低下，经艾灸治疗后，红细胞免疫功能得到明显改善。推测艾灸的主要作用环节是在某些因子介导下，对血清中红细胞免疫粘附促进因子或抑制因子的良性调节作用。Ｐ＜０．０１（治疗组治疗前后对比）上表提示，患者治疗前红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（ＲＢＣ—Ｃ３ｂ）与红细胞免疫复合物均低于正常值。红细胞免疫粘附促进率（ＲＦＥＲ）低于正常值，而红细胞免疫粘附抑制率（ＲＦＩＲ）高于正常值。治疗后上述指标有明显改善，治疗前后比较有显著性差异。进一步探讨患者治疗前后红细胞Ｃ３ｂ受体花环率与促进率和抑制率之间的相关关系。结果表明，花环率与促进率呈正相关关系：治疗前ｒ＝０．５９８７，Ｐ＜０．０１，治疗后ｒ＝０．６８１６，Ｐ＜０．００１；花环率与抑制率呈负相关关系：治疗前ｒ＝－０．５５４０，Ｐ＜０．０１，治疗后ｒ＝－０．７１４０，Ｐ＜０．００１。３．２血清循环免疫复合物（ＣＩＣ）含量测定见表２。表２ＣＩＣ含量测定结核患者治疗前后ＣＩＣ阳性率差别显著，经统计学处理，Ｘ＝８．２８６，?

白癜风患者Teff亚群、Treg及其细胞因子表达及意义分析

目的探讨白癜风患者效应性T细胞(Teff)、调节性T细胞(Treg)及其细胞因子表达情况及临床意义。方法选取2018年6月至2019年6月期间德州市人民医院皮肤性病科收治的白癜风患者84例(稳定期38例,进展期46例)及健康体检者30例(对照组)为研究对象,采用流式细胞实验检测受试者外周血Teff亚群、Treg细胞水平,采用酶联免疫吸附法检测Teff亚群、Treg细胞相关细胞因子水平,分析外周血Teff亚群与Treg细胞水平间关系,Teff亚群、Treg细胞相关细胞因子与白癜风病程、皮损面积关系。结果白癜风组外周血Th17、Th22水平较对照组明显升高,Treg细胞水平明显降低(P<0.05);与白癜风稳定组比较,白癜风进展组外周血Th17、Th22水平升高,Treg细胞水平降低(P<0.05);Treg细胞与Th17细胞水平呈负相关(r=-0.303,P=0.001),与Th22细胞水平呈负相关(r=-0.200,P=0.033);白癜风组血清IL-17、IL-22水平较对照组明显升高,TGF-β水平明显降低(P<0.05);与白癜风稳定组比较,进展组血清IL-17、IL-22水平升高,TGF-β水平降低(P<0.05)。白癜风患者血清IL-17水平与皮损面积呈正相关(r=0.361,P<0.05),IL-22水平与皮损面积呈正相关(r=0.288,P<0.05),TGF-β水平与皮损面积呈负相关(r=-0.312,P<0.05)。结论白癜风患者存在Teff/Treg细胞失衡,明显向Teff亚群偏移,白癜风疾病进展可能与Teff亚群、Treg细胞相关细胞因子有关。

实验性自身免疫性葡萄膜炎模型的研究进展

葡萄膜炎是眼科常见的致盲性眼病之一。实验性自身免疫性葡萄膜炎模型(EAU)是研究人类葡萄膜炎乃至全身自身免疫性疾病的一种实验动物模型。EAU模型通过视网膜抗原诱导造模,以眼部视网膜及周围相关组织为靶器官,是研究葡萄膜炎机制以及检验新型抗感染及免疫抑制类药物的重要工具。文章就实验性自身免疫性葡萄膜炎模型的造模方法、基本病程、评价方法、模型机制以及研究前景等方面进行综述。

电针疗法对老年医院获得性肺炎患者免疫系统影响的临床研究

目的:观察电针疗法对老年医院获得性肺炎(HAP)患者单核细胞人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、T细胞亚群和NK细胞活性的影响。方法:ICU内45例单核细胞HLA-DR<30%的老年HAP患者纳入本研究,随机分为治疗组和对照组。治疗组在HAP常规治疗基础上予电针治疗,对照组仅给予HAP常规治疗。在治疗前后应用流式细胞仪测定患者的单核细胞HLA-DR、T细胞亚群和NK细胞活性。结果:电针治疗后单核细胞HLA-DR、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值和NK细胞明显上升,对照组治疗后无改善。结论:电针疗法具有改善老年HAP患者免疫功能的作用。