褪黑素对T淋巴细胞株免疫相关基因表达谱的作用

目的 利用基因表达谱芯片研究T淋巴细胞株 (HUT78)在褪黑素作用后免疫相关基因表达的差异性。方法 用Cy5和Cy3两种不同的荧光染料通过逆转录反应将干预组和对照组的HUT78细胞的mRNA分别标记成两种探针 ,并与载有一组靶基因的基因表达谱芯片进行杂交 ,通过扫描荧光强度 ,计算机软件分析 ,寻找经褪黑素作用后表达有差异的基因。结果 T淋巴细胞株受褪黑素作用 2 4h后 ,共筛选出 42条差异表达基因 ,其中 3 5条基因上调 ,7条基因下调。结论 褪黑素激活的人淋巴细胞 。

提高体外细胞培养的成功率

提供介绍在ＲＰＭＩ－１６４０培养液中加入适量丙酮酸钠前后，肿瘤细胞株Ｋ５６２（人红白血病细胞株）、ＣＥＭ（人类Ｔ淋巴细胞白血病株）等状态的变化情况，旨在阐述体外细胞培养中较为可观的两点因素．

腺病毒介导c-FLIPs基因诱导淋巴细胞抗凋亡作用

目的 探讨表达c FLIPs重组腺病毒诱导淋巴细胞抗凋亡作用。方法 采用RT PCR方法,从人T淋巴细胞株的总RNA中克隆c FLIPs基因;通过pAdeasy系统,构建表达c FLIPs的重组腺病毒Ad c FLIPs;Hochest染色法及PI染色流式细胞仪检测anti Apo 1诱导感染Ad c FLIPs后的H9细胞凋亡。结果 采用RT PCR方法从人T淋巴细胞株中扩增出c FLIPs基因;构建重组腺病毒Ad c FLIPs ;经Hoechst染色,荧光显微镜下观察细胞核的形态,结果发现,经anti Apo 1诱导凋亡处理2 4h后,未经Ad c FLIPs感染的H9细胞有大量的细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞;Ad c FLIPs感染的H9细胞中细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数明显减少,大部分细胞染色质呈弥漫均匀低强度荧光;流式细胞仪分析经PI染色后的H9细胞,未经Ad c FLIPs预处理的H9细胞在anti Apo 1作用2 4h后,细胞的凋亡率分别为4 8 33%±7 4 1% ;经Ad c FLIPs预处理1d的H9细胞,其细胞凋亡率分别下降到3 6 0 %±0 2 1%。结论 重组腺病毒Ad c FLIPs可有效地诱导淋巴细胞的抗凋亡作用。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导CTLL-2细胞凋亡的信号途径研究

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对动物免疫功能的影响及其机理,以细胞毒性T淋巴细胞株CTLL-2为材料,用不同浓度的DON(0、0.5、1、2μg/m L)处理CTLL-2细胞48h,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印记法检测细胞凋亡相关通路蛋白CleavedCaspase 9、Cleaved-Caspase 3、Fas L、Fas、Cleaved-Caspase8等表达情况;并用流式细胞术检测了DON(1μg/m L)与Fas L中和抗体(10μg/m L)共处理后细胞的凋亡率。结果表明,随着DON浓度的升高,CTLL-2细胞的凋亡率呈上升趋势,染毒组均较对照组有极显著差异(P<0.01);Bax/Bcl-2的比值升高,呈剂量-效应关系;DON促进细胞色素c(Cyt-c)从线粒体中释放到胞浆中,能够上调Cleaved-Caspase 9、Cleaved-Caspase 3的表达,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);Fas L、Fas、Cleaved-Caspase 8蛋白表达量随着DON浓度的升高逐渐增加,染毒组均较对照组有显著性或极显著差异(P<0.05或P<0.01);随着DON浓度的升高,p38 MAPK、JNK、Erk的磷酸化水平也升高,呈剂量-效应关系;与DON处理组相比,Fas L中和抗体与DON共同处理组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。结果表明,DON可以诱导CTLL-2细胞发生凋亡,激活CTLL-2细胞线粒体通路、MAPKs通路,DON通过死亡受体途径诱导CTLL-2细胞凋亡,影响动物的免疫机能。