基于微小RNA-142-3p与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4的相互作用探讨细胞因子在原因不明反复性流产的作用

目的探讨原因不明反复性流产(URSA)过程中微小RNA-142-3p(miR-142-3p)与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的相互作用对细胞因子影响的可能机制。方法选取2016年9月至2017年12月中国科学院大学深圳医院(光明)收治的45例URSA患者纳入流产组,选取同期于中国科学院大学深圳医院(光明)进行检查的40例健康早孕者作为对照组进行回顾性研究。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的表达水平。结果流产组研究对象CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞百分比低于对照组(P<0.05);流产组研究对象外周血中白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)的表达水平低于对照组(P<0.05),而白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的表达水平均高于对照组(P<0.05);流产组研究对象的IL-2/IL-10、IFN-γ/IL-4比值均高于对照组(均P<0.05);荧光素酶报告基因检测显示,miR-142-3p与CTLA-4具有较强的结合能力。结论miR-142-3p对CTLA-4的表达具有潜在的抑制作用,这可能是促使URSA的机制之一。

T淋巴细胞相关蛋白、gp41、磷酸化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C-γ在人类免疫缺陷病毒感染患者中的表达及相关性分析

目的分析T淋巴细胞相关蛋白(MAL)、gp41、磷酸化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C-γ(pPLC-γ)在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者中的表达及相关性。方法选取2020年4月至2021年4月首都医科大学附属北京佑安医院收治的70例HIV感染患者作为观察组,另外选取同期进行健康体检的70例志愿者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测两组MAL表达,通过流式细胞仪检测两组gp41、pPLC-γ表达。分析MAL、gp41、pPLC-γ的表达变化与HIV感染的相关性。结果与对照组相比,观察组MAL表达下降,gp41、pPLC-γ表达上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。MAL、gp41、pPLC-γ表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),MAL、gp41、pPLC-γ表达与患者HIV阳性时间、是否服用抗病毒药物、临床症状相关(P<0.05)。MAL与gp41呈负相关(r=-0.637,P=0.001);MAL与pPLC-γ呈负相关(r=-0.601,P=0.001);gp41与pPLC-γ呈正相关(r=0.693,P=0.001)。三项联合对HIV感染的诊断价值高于MAL、gp41、pPLC-γ单项诊断(P<0.05)。结论HIV感染患者MAL表达下降,gp41、pPLC-γ表达上升,MAL、gp41、pPLC-γ与患者HIV阳性时间、临床症状、是否服用抗病毒药物有关,其可能参与了HIV感染的发生、发展,可为HIV临床诊断提供参考。

细胞毒T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)基因多态性与非霍奇金淋巴瘤易感性的meta分析

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA4）等位基因多态性与非霍奇金淋巴瘤（NHL）易感性的关系。方法计算机检索PubMed、MEDLINE、中国知网、万方及维普等数据库，收集1990—01—01／2016—05—25期间CTLA4基因多态性与NHL易感性关系的研究资料。采用sATA（v12．0）软件进行meta分析，计算比值比（0R）及其95％可信区间（口）并行敏感性分析和发表偏倚评估。结果共纳入6项研究，涉及CTLA4＋49A／G、-318T／C、CT60A／G3个等位基因，NHL患者803例，对照共1254例。这3个等位基因多态性与NHL的易感性无相关性（PZ〉0．05或95％CI包含1）。在CTLA4＋49A／G基因多态性的亚组分析中却发现携带AA是HNL混合型的危险因素（AAvsGG：OR=4．181，95％CI=1．362～12．833；AA＋AGvsGG：OR=3．217，95％CI：1．055～9．810；AAvsAG＋GGOR=2．827，95％CI：1．345—5．940），然而在B细胞淋巴瘤中是保护因素（AAvsGG：OR=0．465，95％CI=0．251—0．863；AAvsAG＋GG：OR=0．534，95％CI：0．362～0．788）；携带AA也是意大利人的危险因素（AAvsGG：OR=4．181，95％CI=1．362～12．833；AA＋AG粥GG：OR=3．217，95％CI：1．055。9．810；AAvsAG＋GG：OR=2．827，95％CI=1．345～5．940），但在中国人中是保护因素（AA粥GG：OR=0．643，95％CI=0．417～0．992：AA／38AG＋GG：OR=0．601，95％CI：0．395—0．913）。结论CTLA4＋49A／G、-318T／C、CT60A／G3个等位基因多态性与NHL易感性无明显关联性。

程序性死亡1/程序性死亡配体1和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4信号通路在膀胱尿路上皮癌中的研究进展

膀胱尿路上皮癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤,长期以来以铂为基础的化疗一直是不可切除或转移性膀胱尿路上皮癌的标准治疗方法,但预后不良。针对程序性死亡1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)通路的免疫检查点抑制剂在临床试验中显示出了显著的抗肿瘤活性、可耐受的安全性和长期持久的反应性,开创了晚期膀胱尿路上皮癌治疗的新时代。本文回顾PD-1/PD-L1及CTLA-4信号通路与膀胱尿路上皮癌的关系,综述膀胱尿路上皮癌中已经完成和正在进行的抗PD-1/PD-L1及CTLA-4治疗的临床试验,重点介绍免疫检查点抑制剂在膀胱尿路上皮癌不同阶段中的使用和最佳组合策略的临床研究,以期改进免疫抑制剂在膀胱尿路上皮癌中的使用,提高临床疗效。

原发性胆汁性胆管炎患者血浆细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4基因多态性分析

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者血浆细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)基因多态性变化。方法2015年9月~2020年12月我院诊治的PBC患者30例和同期健康体检者35例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测血浆CTLA-4基因rs231775、rs4675369和rs7599230位点多态性。Logistic回归分析疾病风险关联。结果PBC患者CTLA-4基因rs7599230位点基因型为CC型、CT型和TT型比率分别为16.7%、46.7%和36.6%,与健康人的20.0%、45.7%和34.3%比,无显著性差异(P>0.05),等位基因C和T比率分别为40.0%和60.0%,与健康人群的42.9%和57.1%比,也无显著性差异(P>0.05);PBC患者CTLA-4基因rs231775位点基因型为GG型和等位基因G比率分别为40.0%和61.7%,显著高于健康人的14.2%和35.7%(P<0.05),AA基因型和等位基因A比率分别为16.7%和38.3%,显著低于健康人的42.9%和64.3%(P<0.05);PBC患者CTLA-4基因rs4675369位点基因型为GG型和等位基因G比率分别为43.3%和65.0%,显著高于健康人的17.1%和41.4%(P<0.05),AA基因型和等位基因A比率分别为13.4%和35.0%,显著低于健康人的34.3%和58.6%(P<0.05);经非条件Logistic回归模型计算,校正性别和年龄,结果显示rs4675369位点GG基因型是影响PBC发生的危险基因型,其OR值为1.523(95%CI:1.113~2.085),rs231775位点GG基因型也是影响PBC发生的危险基因型,其OR值为1.636(95%CI:1.161~2.305)。结论CTLA-4基因rs231775和rs4675369位点GG基因型可能是PBC发生的易感基因型,值得进一步研究。

细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4在日本血吸虫免疫逃避中的作用及其机制研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)在日本血吸虫免疫逃避中的作用及其机制。方法雌性BALB/c小鼠随机分成3组,即正常对照组、感染对照组和抗CTLA-4单克隆抗体(Anti-CTLA-4mAb)组。各感染组每只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴40条,感染2周后,Anti-CTLA-4mAb组每只小鼠连续3d腹腔注射300μg anti-CTLA-4mAb,对照组注射等体积的PBS。感染后6周杀鼠冲虫,计数每只小鼠虫荷及每克肝脏虫卵数。流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞中调节性T细胞(CD4+CD25+Tregs)百分比。ELISA法检测各组小鼠脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10的含量。肝组织石蜡切片HE染色观察感染组小鼠肝脏虫卵肉芽肿病理变化。结果 Anti-CTLA-4mAb组减虫率为18.99%,脾淋巴细胞中CD4+CD25+Tregs百分比显著升高(P<0.05)。Anti-CTLA-4mAb组脾细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10的含量均高于感染对照组,肝脏虫卵肉芽肿直径较感染对照组明显增大。结论 AntiCTLA-4mAb使用同时增强Th1型和Th2型免疫反应,有利于机体清除日本血吸虫但以损伤机体为代价。研究结果提示宿主CTLA-4利于日本血吸虫免疫逃避。

过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1调控细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4影响胶质瘤的增殖、迁移和侵袭及其分子机制

目的探讨过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)通过细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路影响神经胶质瘤细胞增殖、迁徙和侵袭及其分子机制。方法选取南昌大学第二附属医院2018年9月至2020年6月手术治疗的103例患者的神经胶质瘤组织和癌旁组织为研究对象,癌旁组织为对照组。培养胶质瘤U251细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(PT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测LRIG1、CTLA-4基因及蛋白的表达水平。利用Flag-LRIG1质粒构建LRIG1过表达细胞模型,命名为对照组和LRIG1组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖能力,细胞划痕及Transwell实验检测两组细胞迁徙和侵袭能力。Western blot检测PI3K、Akt蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果胶质瘤组LRIG1表达水平(1.54±0.11)明显低于癌旁对照组LRIG1表达水平(2.11±0.12),差异有统计学意义(t=6.070,P<0.01)。胶质瘤组CTLA-4表达水平(3.82±0.09)明显高于癌旁对照组CTLA-4表达水平(0.51±0.48),差异有统计学意义(t=8.190,P<0.01)。Flag-LRIG1质粒转染后LRIG1组LRIG1蛋白表达水平(2.83±0.17)高于对照组LRIG1表达水平(1.41±0.08),差异有统计学意义(t=13.090,P<0.01)。LRIG1组细胞吸光度值(0.51±0.04)低于对照组细胞吸光度值(1.11±0.09),差异有统计学意义(t=10.550,P<0.01);划痕实验24 h LRIG1组细胞迁移面积[(9.52±0.12)%]低于对照组细胞迁移面积[(12.05±0.54)%],差异有统计学意义(t=7.920,P<0.05);Transwell实验LRIG1组细胞迁移数量[(43.15±5.17)个]低于对照组细胞迁移数量[(70.13±6.13)个],差异有统计学意义(t=5.830,P<0.01)。LRIG1组CTLA-4蛋白表达水平(0.50±0.08)低于对照组CTLA-4蛋白表达水平(0.83±0.14),差异有统计学意义(t=3.550,P<0.05)。结论LRIG1通过下调CTLA-4表达来调控PI3K/AKT通路从而抑制脑质瘤细胞的增殖和迁移。

肺癌合并肺结核患者病变组织中CTLA-4、PD-L1的表达与临床病理特征的相关性研究

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的一种传染病,根据《2022年全球结核病报告》,2021年有1060万人患结核病,并且有160万人死于结核病^([1])。研究^([2])表明,肺结核与癌症风险增加有关,其中与肺癌相关性最高。近年来,肿瘤的免疫治疗获得了广泛研究,其中相关靶点程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)、程序性死亡配体1(PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)的免疫检查点抑制剂已经成为肺癌的一线治疗用药,并且为患者提供了生存益处^([3-4])。

复合CTLA4的脱钙骨基质抑制T淋巴细胞免疫能力和增强骨髓间充质干细胞迁移能力的体外作用研究

目的分析复合细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)的脱钙骨基质(DBM)对T淋巴细胞免疫能力和骨髓间充质干细胞(BMMSCs)迁移能力的体外调控作用。方法通过特殊负压灌注装置将纤维蛋白凝胶复合CTLA4溶液灌注到DBM,构建复合CTLA4的DBM,并通过扫描电镜观察其微观形态。分离外周血单核细胞(PBMCs),通过植物血凝素(PHA)激活T淋巴细胞来构建免疫激活微环境。将复合CTLA4的DBM在培养基中孵育5、10、20、30、40 d,ELISA检测CTLA4的浓度,由此计算CTLA4的累积释放率。将PHA预处理的PBMCs与复合CTLA4的DBM进行Transwell共培养,ELISA检测培养基中IL-2和IFN-γ的含量。分离BMMSCs,Transwell共培养法分析复合CTLA4的DBM对BMMSCs增殖和迁移能力的影响。结果复合CTLA4的DBM结构完整有序,具有良好的三维网络结构。复合材料中CTLA4在5、10、20、30、40 d的累积释放率分别为(11.3%±1.9%)、(27.9%±3.7%)、(48.4%±3.6%)、(62.8%±3.8%)和(83.0%±2.5%)。与单纯的DBM相比,与复合CTLA4的DBM共培养可显著减少培养基中IL-2(P=0.0004)和IFN-γ(P=0.0007)的含量,增强BMMSCs的增殖能力(P=0.0006)和迁移能力(P=0.0004)。结论复合CTLA4的DBM在体外环境下具有抑制T淋巴细胞免疫能力和增强BMMSCs迁移能力的作用。

初诊SLE患者抗CTLA-4抗体水平及其临床意义

目的探讨初诊系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗CTLA-4抗体水平及其临床意义。方法选取2022年1月至2023年6月在苏州大学附属第一医院风湿免疫科就诊的初诊SLE患者56例作为病例组,同时选取我院体检中心52例体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组血清中IgG和IgM型抗CTLA-4抗体。比较不同临床特征(包括皮疹、口腔溃疡、浆膜炎等等)初诊SLE患者组间抗CTLA-4抗体水平差异。采用Pearson相关分析评估初诊SLE患者抗CTLA-4抗体与疾病活动指标[包括SLE疾病活动指数2000版(SLEDAI-2K)、抗ds-DNA以及C反应蛋白(CRP)]的关系。结果病例组IgG和IgM型抗CTLA-4水平均高于对照组(t=4.657、5.014,P均<0.05);IgG和IgM型抗CTLA-4抗体水平在SLE合并浆膜炎的患者中高于未合并浆膜炎患者(t=1.849、2.013;P=0.046、0.032);Pearson相关分析显示,IgM型抗CTLA-4抗体与SLEDAI-2K(r=0.425,P=0.029)及补体C3(r=-0.494,P=0.029)呈正相关;IgG和IgM型抗CTLA-4抗体与CRP(r=0.301、0.404;P=0.041、0.022)和抗ds-DNA抗体(r=0.644、0.363;P=0.002、0.036)呈正相关。结论初诊SLE患者血清抗CTLA-4抗体呈高表达,且该抗体与浆膜炎、疾病活动度相关。

CTLA-4Ig融合蛋白对病毒性心肌炎小鼠Foxp3+调节性T细胞的影响

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对柯萨奇B3病毒(CVB3)病毒性心肌炎(VMC)小鼠的病死率、心肌病理改变、病毒复制和心肌组织中Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的影响。方法 106只4～6周龄健康雄性Balb/c小鼠,体质量为12～16 g,随机分为CTLA-4Ig组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,CTLA-4Ig组、病毒组和IgG组小鼠腹腔注射半数组织细胞感染量(TCID50)为10-3/L的CVB3 0.15 ml,正常对照组小鼠接种0.15 ml不含病毒的Eagle液。CTLA-4Ig组、IgG组小鼠于接种病毒后6、72 h分别注射CTLA-4Ig(0.1 mg/kg)及IgG(0.1 mg/kg)。接种病毒后第7天处死所有小鼠在光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分;采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中CVB3 mRNA的表达;采用免疫组织化学法检测Foxp3分子在心肌组织中的表达,并计算Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率。结果与病毒对照组相比较,CTLA-4Ig组小鼠病死率降低(80%比50%,P<0.05),心肌组织病理积分下降(1.78±1.05比1.00±0.72,P<0.05),心肌CVB3 mRNA表达减少(3.48±2.89比0.81±1.06,P<0.05);CTLA-4Ig组小鼠心肌组织中Foxp3+Tregs所占浸润细胞数的百分率较病毒组明显增加(9.22±2.28)%比(5.42±1.59)%,(P<0.05)。结论 CTLA-4Ig可减轻VMC小鼠心肌炎症,降低心肌病毒复制及病死率,其机制可能与上调Foxp3+Tregs比、抑制T细胞活化有关。

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

恶性肿瘤中免疫检查点抑制剂与甲状腺功能异常风险的Meta分析

目的 Meta分析免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗引起恶性肿瘤患者发生甲状腺功能异常的风险。方法 检索从建库至2022年10月15日Pub Med、Embase、Cochrane Library、中国知网及万方医学网中关于恶性肿瘤ICIs治疗的相关不良反应研究。根据纳入与排除标准筛选文献,提取研究数据,采用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果 共纳入32项随机对照试验,其中使用程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein-1,PD-1)、程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand-1,PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)抑制剂单药治疗分别为17篇、6篇、3篇,两种ICIs联合使用为8篇。Meta分析显示,ICIs单药治疗引起恶性肿瘤患者发生甲状腺功能减退(RR=9.04,95%CI为7.21~11.33)、甲状腺功能亢进(RR=10.83,95%CI为6.96~16.90)、甲状腺炎(RR=7.61,95%CI为2.99~19.37)的风险明显高于对照组。PD-1(RR=8.61,95%CI为6.47~11.46)、PD-L1(RR=6.75,95%CI为4.33~10.52)、CTLA-4(RR=7.12,95%CI为3.16~16.08)和联合应用(RR=52.56,95%CI为13.15~210.12)引起的甲状腺功能减退的风险比对照组均升高。与单一ICIs比较,ICIs联合使用引起甲状腺功能减退(RR=1.77,95%CI为1.41~2.22)及甲状腺功能亢进(RR=3.79,95%CI为2.42~5.96)的风险进一步升高。结论 ICIs治疗引起恶性肿瘤患者甲状腺功能异常的风险明显升高,以发生甲状腺功能减退的风险最高,其次是甲状腺功能亢进和甲状腺炎。与ICIs单药比较,ICIs联合使用可进一步升高风险。

Mst1和WASp共同调控调节性T细胞外周稳态及抑制功能

目的以Mst1 KO、WASp KO、Mst1-WASp DKO和野生型模型小鼠为研究对象,探究Mst1和WASp共同作用对调节性T细胞(Treg)发育和功能影响及作用机制。方法使用流式细胞仪检测胸腺和脾脏中T细胞各亚群特别是Treg细胞的比例、数量及其相关分子的表达,并通过构建DKO骨髓嵌合小鼠验证表型变化是否为自发性。结果与野生型小鼠相比,DKO小鼠胸腺的T细胞各亚群比例无明显变化,而脾脏中T细胞各亚群细胞数均降低,除活化T细胞和Treg的比例升高外,其他各T细胞亚群比例均降低。DKO小鼠脾脏Treg中的NRP-1表达减少,CTLA-4的表达增加。骨髓嵌合动物模型中Treg的检测结果与上述一致。结论 Mst1与WASp以细胞固有方式共同影响Treg细胞外周稳态和功能,其机制可能涉及NRP-1和CTLA-4。

免疫检查点抑制剂CTLA-4在实体肿瘤治疗中的临床应用

近年来,免疫治疗成为实体肿瘤治疗的新方法,大量免疫制剂被开发并应用于临床,其中以免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors, ICIs)应用最为广泛,为肿瘤治疗开启了新时代。而以细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4, CTLA-4)为代表的ICIs类药物丰富了肿瘤免疫治疗方法,开启了双免疫疗法的全新治疗模式。本文就CTLA-4在晚期实体肿瘤治疗中的临床应用进行综述,以期为肿瘤免疫治疗提供参考。

CTLA4-Ig基因修饰骨髓间充质干细胞抑制大鼠肝移植排斥反应

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)在抑制大鼠原位肝移植排斥反应的作用及机制。方法采用重组腺病毒(Ad)5-CTLA4-Ig转染MSC。转染72 h后,提取细胞总蛋白,采用蛋白质印迹法检测转染后MSC中CTLA4-Ig的蛋白表达。采用细胞计数试剂盒(CCK)-8方法检测未转染和转染后的MSC对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用。以雄性Lewis大鼠为供体(40只);以雄性Brown Norway(BN)大鼠为受体(40只)。采用改良的Kamada两袖套法进行原位肝移植,建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。40只受体大鼠随机分为4组,每组10只。其中对照组(A组),于肝移植时门静脉输注生理盐水;MSC治疗组(B组),于肝移植时门静脉输注MSC;转基因MSC治疗组(C组),于肝移植时门静脉输注转基因MSC;免疫抑制剂治疗组(D组),于肝移植时门静脉输注生理盐水,术后即给予环孢素(CsA)1.5 mg/(kg·d)肌内注射,连续8 d。每组大鼠取5只观察生存情况。每组其余5只于术后第9日处死,检测外周血细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平,光学显微镜下观察肝组织病理学变化和排斥反应程度。结果重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,蛋白质印迹法可检测到转染后的MSC中有CTLA4-Ig的蛋白表达。当未转染的MSC∶外周血单核细胞比例为1∶10、1∶20时,MSC抑制淋巴细胞增殖的作用分别为85.60%、76.69%。重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,在相同的数量比下,其抑制淋巴细胞增殖的作用分别为90.50%、84.20%;与未转染的MSC比较,转染后抑制淋巴细胞增殖的作用增强(P<0.05)。A、B、C、D组大鼠肝移植术后存活时间分别为(13±3),(41±6),(90±15),(102±18)d。A、B、C组的大鼠术后存活时间比较差异有统计学意义(P<0.05),C组和D组的大鼠术后存活时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-4水平明显升高;与B组比较,C组的IL-4水平明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);C组和D组的IL-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-2、IFN-γ水平明显降低,C组的IL-2、IFN-γ水平亦低于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),C组和D组的IL-2、IFN-γ水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝组织病理检查结果显示,A组移植肝发生重度排斥反应,B组移植肝亦发生排斥反应,但与A组比较程度较轻。C组与D组移植肝有轻度排斥反应。结论重组Ad-CTLA4-Ig转染MSC可抑制肝移植排斥反应,其效果优于MSC单独应用。

CTLA-4Ig与ICAM-1单抗促进供者来源的未成熟树突状细胞诱导移植受体免疫耐受

目的:研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA-4 Ig)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)单抗体内注射促进供者未成熟树突状细胞(imDC)诱导受者免疫耐受的可能机制。方法:实验分对照组(仅输注imDC)、CTLA-4 Ig组、ICAM-1单抗组和CTLA-4 Ig+ICAM-1单抗联合组,每组均以2×106C57BL/6供者imDC经尾静脉输注受鼠(雄性),自imDC输注之日起连续2周向受鼠腹腔内注射CTLA-4 Ig或(和)ICAM-1单抗(0.1 mg/d),DC输注1周后4组均行异位心脏移植,于心脏移植后7 d和21 d,进行免疫学分析。结果:CTLA-4 Ig或联合ICAM-1单抗治疗后均明显抑制同种imDC免疫的移植受体脾脏T细胞对同种抗原刺激的增殖反应,降低淋巴细胞毒活性,明显抑制血清和MLR反应中Th1细胞因子IL-2、IFN-γ的产生,显著提高Th2细胞因子IL-10的水平;明显降低心脏移植受体同种抗体IgG的产生。ICAM-1单抗治疗组的受体T细胞对同种抗原刺激的增殖反应虽有减弱,但与对照组相比没有显著的差异;对MLR反应上清和血清中IL-2的产生有明显的抑制,而对其他细胞因子的产生没有明显的作用。结论:CTLA-4 Ig联合ICAM-1单抗治疗可通过诱导受体T细胞对同种抗原特异性的低反应性,抑制淋巴细胞毒活性和B细胞的体液免疫反应,并促进Th2细胞的极化来促进imDC诱导的同种抗原特异性的免疫耐受。

免疫检查点治疗对T细胞受体库的影响

T细胞受体(TCR)是机体适应性免疫应答的关键,而免疫检查点是肿瘤治疗的重大突破,细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)和程序性死亡蛋白1(PD-1)与TCR的关系是近年研究热点, TCR库的克隆多样性、 CDR3长度、空间异质性在免疫检查点的治疗中表现出一定的特征,我们主要总结了免疫检查点治疗对TCR库的影响以及TCR库用于肿瘤治疗的相关研究进展。

基于GEO和TCGA数据库筛选恶性胸膜间皮瘤免疫治疗疗效预测关键基因

目的探索免疫治疗在恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)中免疫疗效相关关键分子及其可能的机制。方法2018年7月至2020年7月,纳入GEO数据库中GSE117358的表达谱进行分析;首先,根据是否对免疫治疗是否有效分为两组:免疫治疗反应组和免疫治疗无反应组,同时分析两组之间差异有统计学意义基因;其次,分析两组差异有统计学意义基因在基因本体(gene ontology,GO)生物学行为及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and ge‐nomes,KEGG)富集信号通路等方面的差异;最后,对差异有统计学意义基因构建蛋白-蛋白互作网络,筛选在生物学行为中的重要模块及关键基因,并对关键基因在TCGA数据库中进行整合分析验证。结果在免疫治疗反应组(12个样本)及免疫治疗无反应组(12个样本)中共筛选出1025个差异基因,相对于免疫治疗无反应组,在免疫治疗反应组中有782个上调和243个下调基因。GO和KEGG分析显示,这些差异基因的功能主要集中在细胞因子受体通路、细胞黏附通路、T细胞受体通路及NFkappa B信号通路等;在蛋白-蛋白互作网络分析中,筛选出节点度最高的10个核心基因包括Tnf,Il6,Ptprc,Csf2,Cd86,Cxcl9,Sell,Cxcr3,Ccl2,Cd40。TCGA数据库整合分析显示,Tnf,Il6,Cd86,Cxcl9,Sell,Cxcr3,Cd40等疗效相关关键基因在肉瘤样胸膜间皮瘤中呈现相对高表达,且差异有统计学意义。结论核心基因Tnf,Il6,Ptprc,Csf2,Cd86,Cxcl9,Sell,Cxcr3,Ccl2,Cd40有望成为预测MPM的分子标志物及治疗的潜在靶点。

PD-1合CTLA-4双免疫疗法对改善晚期乳腺癌近期疗效及远期预后的影响

目的观察程序性死亡受体1(PD-1)联合细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)双免疫疗法对改善晚期乳腺癌近期疗效及远期预后的影响。方法选择2020年5月—2022年5月商丘市第一人民医院收治的124例晚期乳腺癌患者为研究对象,经随机数字表法将其分为对照组(60例)和观察组(64例),对照组予以常规PD-1单抗免疫疗法治疗,观察组采用PD-1联合CTLA-4双免疫疗法治疗,比较2组患者治疗前后肿瘤标志物水平、治疗后病灶缓解情况,对所有患者开展为期1年随访,统计并对比2组的不良反应发生情况及远期生存情况。结果治疗前,2组患者的肿瘤标志物水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后,观察组的癌胚抗原为(3.36±0.17)ng/mL,糖类抗原15-3为(25.33±5.28)U/mL,糖类抗原19-9为(38.77±5.62)U/mL,均低于对照组[(5.27±1.36)ng/mL、(28.44±5.18)U/mL、(41.25±5.46)U/mL,均P<0.05]。治疗后,观察组的完全缓解率为21.88%(14/64),部分缓解率为31.25%(20/64),病情稳定率为37.50%(24/64),均高于对照组[8.33%(5/60)、13.33%(8/60)、23.33%(14/60)],肿瘤生长率为(30.27±5.18)%,肿瘤超进展率为6.25%(4/64),均低于对照组[(33.49±5.32)%、18.33%(11/60),均P<0.05]。治疗后,观察组的不良反应发生率为34.38%(22/64),略高于对照组33.33%(20/60),组间比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组的中位无进展生存期为(9.33±2.25)月,中位总生存期为(10.76±3.32)月,均高于对照组[(7.25±2.31)月、(7.41±1.62)月,均P<0.05]。结论PD-1联合CTLA-4双免疫疗法能有效改善晚期乳腺癌的近期疗效及远期预后,此疗法未明显增加不良反应发生风险,安全性高。