辅助性和调节性T淋巴细胞亚群与过敏性紫癜患儿疾病严重程度的关系

目的 探讨辅助性(Th)(CD3^(+)CD4^(+))和调节性(Treg)(CD4^(+)CD25^(+))T淋巴细胞亚群与过敏性紫癜(HSP)患儿疾病严重程度的关系。方法 选择2018年1月至2021年1月苏州大学附属儿童医院收治的HSP患儿(150例)为研究对象,根据HSP症状积分将其分为轻度组(<33分,50例)、中度组(33~67分,56例)、重度组(>67分,44例);另选择同期于门诊进行体检的健康儿童(150例)为对照组。对比分析各组儿童的一般资料、临床症状及实验室指标。通过曲线拟合及阈值效应分析CD3^(+)CD4^(+)和CD4^(+)CD25^(+)与HSP症状积分的关系。通过LASSO模型和多因素Logistic回归分析探讨HSP患儿病情加重的影响因素,建立反向传播(BP)神经网络模型,并对模型进行评价。结果 轻度组、中度组、重度组患儿皮肤紫癜持续时间>28d的比例比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.340,P<0.05)。轻度组、中度组、重度组、对照组儿童的白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、D-二聚体(D-D)、免疫球蛋白A(IgA)、CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)、白细胞介素-21(IL-21)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平比较差异均有统计学意义(F值分别为6.559、9.707、29.202、12.719、7.671、5.290、10.226、19.119、13.329,P<0.05),随着HSP病情加重,WBC、CRP、D-D、IgA、TGF-β1及TNF-α水平均有所升高,而CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)及IL-21水平均有所降低。随着HSP患儿病情的进展,CD3^(+)CD4^(+)和CD4^(+)CD25^(+)的水平均有所下降,当CD3^(+)CD4^(+)<37.3%时,随着CD3^(+)CD4^(+)水平升高,HSP症状积分呈下降趋势(OR=0.962,95%CI:0.947~0.977,P<0.001);当CD4^(+)CD25^(+)<10.2%时,随着CD4^(+)CD25^(+)水平升高,HSP症状积分呈下降趋势(OR=0.976,95%CI:0.953~0.998,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,CRP>12.4mg/L(OR=5.017,95%CI:4.609~5.811)、D-D>3.4mg/L(OR=4.391,95%CI:4.051~5.132)、IgA>2.3g/L(OR=3.148,95%CI:2.742~3.524)、TGF-β1≥6.5pg/mL(OR=4.137,95%CI:3.372~4.512)及TNF-α≥14.5pg/mL(OR=3.811,95%CI:3.028~4.226)均为发生重度HSP的独立危险因素(P<0.05);CD3^(+)CD4^(+)≥32%(OR=0.694,95%CI:0.443~0.956)、CD4^(+)CD25^(+)≥7%(OR=0.644,95%CI:0.399~0.910)及IL-21≥23.1pg/mL(OR=0.442,95%CI:0.185~0.807)均为独立保护因素(P<0.05)。BP神经网络模型的隐含层节点数为4时,交叉验证的均方根误差最小,其中CRP(0.160分)、D-D(0.154分)、CD3^(+)CD4^(+)(0.135分)、CD4^(+)CD25^(+)(0.130分)对模型分类的贡献度较高。受试者工作特征(ROC)曲线、校准曲线和临床决策曲线(DCA)显示,该预测模型的区分度、准确性和有效性均较高。结论 CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)水平异常变化与HSP症状积分密切相关,随着患儿HSP病情进展,CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)水平明显降低;患儿HSP病情进展还与CRP、D-D、IgA、TGF-β1、TNF-α及IL-21水平密切相关。临床医护人员应密切关注相关指标,以期改善预后。

调节性T细胞在肝细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨在不同病理分期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(LOW)Treg的含量变化及临床意义。方法收集60例HCC患者的外周抗凝血作为HCC试验组并进行Edmondson-steiner病理分期,20名健康体检者的外周抗凝血作为健康对照组,检测两组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(LOW)Treg水平。结果HCC患者外周血中Treg占CD4^(+)T细胞的百分率显著高于健康对照组(P<0.01);且在HCC不同分期中,Ⅲ、Ⅳ期患者外周血中Treg占CD4^(+)T细胞的百分率显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P<0.05)。结论在HCC患者外周血中,Treg随着疾病的发生发展而逐渐增多,且在Ⅲ、Ⅳ期快速增殖,其可能与肿瘤细胞免疫逃逸密切相关。

基于lncRNA PVT1表达分析银杏内酯B对ITP患者B淋巴细胞及Treg/Th17免疫失衡的影响

目的探讨银杏内酯B对原发性免疫血小板减少症(ITP)患者长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(lncRNA PVT1)、B淋巴细胞和调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17(Treg/Th17)免疫失衡的影响及其相关性。方法依据双盲法将2021年5月至2023年5月廊坊市中医医院收治的130例ITP患者分为对照组(65例)和观察组(65例)。对照组给予长春地辛治疗,观察组给予银杏内酯B治疗,两组均治疗4周。比较两组患者临床疗效;比较两组患者治疗前后lncRNA PVT1表达、B淋巴细胞亚群[CD19^(+)、B1淋巴细胞]比例、Treg/Th17免疫失衡细胞因子[白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-21(IL-21)];分析lncRNA PVT1表达与CD19^(+)、B1淋巴细胞比例以及IL-17、IL-21水平的相关性。结果研究过程中对照组失访7例,观察组失访5例,最终分组为对照组58例,观察组60例。治疗后两组患者lncRNA PVT1表达、IL-17、IL-21水平以及CD19^(+)、B1淋巴细胞比例较治疗前均有所降低(P<0.05),观察组治疗后lncRNA PVT1表达、IL-17、IL-21水平以及CD19^(+)、B1淋巴细胞比例明显低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,观察组临床疗效更优(P<0.05)。lncRNA PVT1表达与CD19^(+)、B1淋巴细胞、IL-17、IL-21水平均呈正相关(P<0.05)。结论银杏内酯B对ITP患者具有较高临床疗效,可以显著改善其lncRNA PVT1表达、B淋巴细胞比例、Treg/Th17免疫失衡细胞因子水平,值得临床推广。

消癌解毒方联合化疗对弥漫大B细胞淋巴瘤外周血CD4+CD25+CD127^(low)调节性T细胞的影响

目的检测初诊弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)采用R-CDOP(利妥昔单抗联合环磷酰胺、脂质体多柔比星、长春新碱及泼尼松)方案联合或不联合消癌解毒方治疗前后外周血调节性T细胞(Treg)百分比的变化,探讨Treg对于DLBCL发病及预后可能的影响以及消癌解毒方是否具有调控Treg表达的作用。方法入组2018年1月至2022年1月南京中医药大学附属医院收治的初诊DLBCL病人共47例(治疗组24例,对照组23例)和健康对照45例,治疗组采用消癌解毒方联合R-CDOP方案,对照组单纯采用R-CDOP方案治疗,两组均化疗6个周期,采用流式细胞术检测两组病人治疗前后及健康对照的外周血CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比,观察两组病人的临床疗效以及治疗前后CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比的变化。结果治疗前,治疗组及对照组两组病人和健康对照的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为6.01%、5.73%、7.32%,两组病人外周血Treg百分比均低于健康人(P<0.05)。治疗6周期结束后,治疗组及对照组两组病人的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比中位数分别为7.33%和5.85%,治疗组Treg百分比较治疗前明显上升(P<0.05),对照组治疗前后Treg百分比变化差异不明显(P>0.05)。治疗组和对照组相比,治疗组比对照组的CD4+CD25+CD127^(low) Treg百分比明显上升(P<0.05)。两组病人临床疗效评估结果比较,治疗组和对照组的总缓解率(ORR)分别为79.17%和69.56%,两组ORR差异无统计学意义(P>0.05)。结论消癌解毒方有可能通过上调DLBCL病人失衡的Treg百分比发挥调控肿瘤免疫环境的作用。

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)调节性T淋巴细胞功能的影响

目的观察胸腺肽α1对慢性乙型肝炎CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)调节性T淋巴细胞(Treg)功能的影响。方法选取2016年12月-2017年7月陕西省人民医院感染性疾病科收治的慢性乙型肝炎患者67例,其中38例接受恩替卡韦抗病毒治疗(对照组),29例接受恩替卡韦联合注射用胸腺肽α1治疗(治疗组),分别于治疗前后分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)Treg水平,纯化CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)Treg,与自体CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK-8法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞因子分泌水平。计量资料2组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ2检验。结果对照组、治疗组患者经治12周CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)Treg均较基线水平明显下降,差异均有统计学意义(8.85±2.18)%vs(12.32±1.22)%、(9.26±2.30)%vs(13.71±2.32)%,t值分别为4.579、4.803,P值分别为0.0005、0.0003]。选取17例对照组患者和21例治疗组患者检测细胞因子分泌水平。经治12周对照组患者治疗12周后Treg与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养系统中细胞增殖和分泌细胞因子水平均无明显变化;治疗组共培养系统中细胞计数较基线水平明显升高,差异有统计学意义[(3.66±0.95)×106个vs(2.07±0.51)×106个,t=5.709,P<0.0001];治疗组共培养细胞分泌抑制性细胞因子IL-10、IL-35水平明显降低,差异均有统计学意义[(41.40±11.89)pg/ml vs(56.53±27.85)pg/ml、(122.9±9.98)pg/ml vs(130.0±15.98)pg/ml,t值分别为2.639、2.459,P值分别为0.019、0.028)],分泌抗病毒细胞因子IFNα、IFNγ水平明显升高,差异均有统计学意义[(297.5±83.56)pg/ml vs(235.6±67.72)pg/ml、(5.83±0.85)pg/ml vs(4.39±0.95)pg/ml,t值分别为2.603、4.659,P值分别0.017、0.0004]。结论胸腺肽α1能够抑制慢性乙型肝炎CD4^+CD25^+CD127^(dim/-)Treg水平及免疫抑制功能,提高患者免疫功能。

清温并用法对慢加急性肝衰竭大鼠调节性T淋巴细胞/辅助性T淋巴细胞17表达的影响

目的观察清温并用法对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T淋巴细胞(Th) 17表达的影响,探索其抗肝衰竭的作用机制。方法 SD大鼠140只随机分为正常组、模型组、清法组、温法组及清温并用法组。采用牛血清白蛋白致敏建立免疫性肝纤维化大鼠模型,然后以D-氨基半乳糖+脂多糖攻击建立ACLF模型。观察24 h内各组大鼠血清肝功能(ALT、TBil)、肝组织病理学改变及外周血Treg、Th17细胞数,并计算Treg/Th17比值。计量资料多组间比较釆用One-Way ANOVA比较,进一步两两比较选用LSD-t法检验。结果与正常组比较,模型组大鼠ALT、TBil在各时间点明显升高(P值均<0. 01),肝小叶结构被破坏,肝细胞见桥接及片状坏死,汇管区可见炎细胞浸润,外周血Treg、Th17细胞比例明显升高(P <0. 01),且Th17高于Treg,Treg/Th17比值明显降低(P <0. 01)。与模型组比较,清法组、温法组、清温并用法组ALT、TBil明显降低(P <0. 05),肝小叶结构较完整,肝细胞可见小片状、点状坏死,门区少量纤维组织增生,外周血Treg、Th17比例明显降低(P <0. 05),且Th17降低趋势高于Treg,其中以清温并用法组降低最明显(分别与清法组、温法组比较,P <0. 05)。结论清温并用法具有调节ACLF大鼠Treg/Th17失衡的作用,是其抗肝衰竭的作用机制之一。

杂色曲霉素对小鼠胸腺和脾脏转录因子Foxp3^+调节性T淋巴细胞的影响

目的探讨杂色曲霉素(ST)对机体免疫调节功能的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组、ST3,30,300和3000μg·kg-1组。小鼠ip给药24h后,处死取胸腺和脾脏,采用流式细胞术测定胸腺和脾脏细胞中CD4+和CD8+T淋巴细胞及转录因子Foxp3阳性(Foxp3+)调节性T淋巴细胞的百分率,免疫组织化学法检测胸腺和脾脏组织中Foxp3+调节性T淋巴细胞数量,Western蛋白印迹法和RT-PCR分别测定胸腺和脾脏组织中Foxp3蛋白和mRNA的表达。结果溶剂对照组与正常对照组比较,小鼠胸腺和脾脏CD4+,CD8+和Foxp3+T淋巴细胞百分率均无明显差异。与溶剂对照组比较,ST3μg·kg-1组胸腺CD8+T淋巴细胞百分率降低,ST3和30μg·kg-1组脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率明显升高,ST300和3000μg·kg-1组胸腺和脾脏CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率无明显变化。在ST3～3000μg·kg-1内,胸腺和脾脏细胞中Foxp3+调节性T淋巴细胞百分率、胸腺和脾脏组织内Foxp3+调节性T淋巴细胞数量、Foxp3蛋白和mRNA表达均随ST浓度的增高而增加。结论ST可诱导小鼠淋巴器官内Foxp3+调节性T淋巴细胞数量增加,从而影响机体免疫耐受功能。

HBeAg(+)与HBeAg(-)乙型肝炎病毒携带者外周血CD4^+CD25^+调节性T淋巴细胞比例的变化及意义

目的探讨HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)的变化及其意义。方法 HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者两组各50例患者,应用流式细胞仪测定外周血CD3+T淋巴细胞所占比例、CD4+和CD8+T淋巴细胞所占比例及其比值、CD4+CD25+Treg所占比例;以同期门诊健康体检者20例为健康对照组。结果与健康对照组相比,HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者,在外周血CD3+T淋巴细胞、CD4+与CD8+T淋巴细胞所占比例差异无统计学意义。CD4+与CD8+T淋巴细胞比值,在HBeAg(+)HBV携带者有升高趋势,但与HBeAg(-)HBV携带者和对照组比较差异无统计学意义。HBeAg(+)HBV携带者,CD4+CD25+Treg所占比例较对照组明显升高,而HBeAg(-)HBV携带者,CD4+CD25+Treg所占比例较对照组明显降低,差异均有统计学意义。结论尽管肝功能在正常范围,HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者外周血CD4+CD25+Treg比例不同,HBeAg(+)HBV携带者高于健康对照组,而HBeAg(-)HBV携带者低于健康对照组,提示HBeAg(+)与HBeAg(-)HBV携带者处于不同的免疫状态。

黄体酮保胎治疗对不明原因复发性流产患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞免疫失衡的影响研究

目的评价不明原因复发性流产(URSA)患者黄体酮保胎治疗前后外周血辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T淋巴细胞(Treg)变化及其与妊娠结局的关系。方法选取2013年1月—2014年1月重庆医科大学附属第一医院妇产科门诊诊治的URSA患者30例为URSA组,给予黄体酮20 mg/d肌肉注射治疗,孕56 d行B超检查确定有无胎心,根据妊娠结局分为保胎成功组22例和保胎失败组8例。同时选择同时期本院妇产科门诊手术室收治的妊娠12周以内要求人工流产的正常早孕妇女15例作为对照组。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17和Treg数量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血清中白介素(IL)-4、IL-10、IL-17水平;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PBMC中Th17、Treg转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头翼状螺旋转录因子3(Fox P3)mRNA表达水平。结果治疗前,保胎成功组、保胎失败组患者PBMC中Th17/CD_4^+细胞及Th17/Treg高于对照组,Treg/CD_4^+细胞低于对照组(P<0.05);治疗后,保胎失败组患者PBMC中Th17/CD_4^+细胞及Th17/Treg高于保胎成功组,Treg/CD_4^+细胞低于保胎成功组(P<0.05)。治疗前,保胎成功组、保胎失败组患者外周血清中IL-4、IL-10水平低于对照组,IL-17水平及IL-17/IL-4、IL-17/IL-10高于对照组(P<0.05);治疗后,保胎失败组患者外周血清中IL-4、IL-10水平低于保胎成功组,IL-17水平及IL-17/IL-4、IL-17/IL-10高于保胎成功组(P<0.05)。治疗前,保胎成功组、保胎失败组患者PBMC中RORγt mRNA表达水平高于对照组,Fox P3mRNA表达水平低于对照组(P<0.05);治疗后,保胎失败组患者PBMC中RORγt mRNA表达水平高于保胎成功组,Fox P3 mRNA表达水平低于保胎成功组(P<0.05)。结论 URSA与Th17/Treg免疫平衡异常密切相关,黄体酮保胎治疗可通过下调Th17/Treg及相应细胞因子水平,改善URSA患者的Th17/Treg免疫失衡而改善妊娠结局。

强直性脊柱炎患者血小板参数和外周血B、T淋巴细胞衰减因子及调节性T细胞变化

目的观察强直性脊柱炎(AS)患者血小板参数的变化及外周血B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、调节性T细胞(Treg)的表达。方法选取60例AS患者,检测患者血小板参数,采用流式细胞术检测外周血BTLA及Treg的表达,观察AS患者血小板变化及其影响因素。结果 AS患者存在血小板参数异常变化,表现为PLT、PCT的升高。与正常组比较,AS患者外周血BTLA及Treg的表达降低;与BTLA正常者比较,BTLA异常组血小板参数PLT、PCT升高;与Treg正常者比较,Treg异常者血小板参数PLT、PCT升高,MPV降低(P<0.05 or P<0.01)。血小板参数与BTLA、Treg及C3、hs-CRP、IGG存在一定相关性(P<0.05 or P<0.01)。结论 AS患者外周血BTLA、Treg表达降低可能是引起血小板参数异常的原因。

辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞比值失衡在免疫性肝损伤大鼠模型中的变化特点

目的探讨大鼠免疫性肝损伤模型建立的方法以及辅助性T淋巴细胞(Th)17/调节性T淋巴细胞(Treg)失衡在免疫性肝炎大鼠模型中的变化特点。方法采用随机数字表法将30只雌性Wistar大鼠分为3组,每组10只,分别是急性免疫性肝损伤模型(AC)组、慢性免疫性肝损伤模型(CC)组和健康对照(HC)组。AC组和CC组分别通过尾静脉注射α-galcer和刀豆蛋白A(ConA)建立,HC组注射等量的生理盐水。建模成功后检测血清转氨酶ALT、AST等;HE染色观察大鼠肝脏病理改变;免疫组化法检测肝脏中Foxp3、RORγt蛋白表达。外周血和脾脏悬液中Th17、Treg细胞频率变化采用流式细胞分析术检测并计算Th17/Treg比值。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。结果与HC组比较,AC组、CC组血清中ALT、AST、TBil均升高,Alb水平降低,差异均有统计学意义(F值分别为14.782、20.765、16.088、74.181,P值均<0.001)。HE染色,与HC组相比,AC组、CC组分别出现急慢性肝细胞损伤改变。与HC组相比,AC组Th17细胞频率及蛋白(RORγt)水平均显著升高(P值均<0.05),Treg细胞频率亦升高(P<0.05),Th17/Treg比值也显著上升(P<0.05);CC组Th17细胞频率、Treg细胞频率均显著升高,Th17/Treg比值明显下降(P值均<0.05)。结论α-galce及ConA均可成功建立免疫性肝损伤模型,均未出现死亡,肝组织学及血清生化学变化符合急、慢性免疫性肝炎特点。Th17/Treg失衡在炎症反应、组织损伤中发挥了重要作用,且与其免疫状态和病情进展密切相关。

术后加速康复策略对腹腔镜胃癌根治术患者外周血调节性T淋巴细胞和Th1/Th2细胞平衡的影响

目的探讨术后加速康复(enhanced recovery after surgery,ERAS)策略对腹腔镜胃癌根治术患者外周血调节性T淋巴细胞(Treg细胞)和Th1/Th2细胞平衡的影响。方法选择2015年8月至2016年1月在我院行择期腹腔镜胃癌根治术的患者60例,性别不限,年龄45-68岁,体重指数18-29kg/m^2,ASA分级Ⅰ-Ⅱ级,采用随机数字表法将其分为2组:ERAS策略组(E组)和传统手术组(C组),每组30例。E组实施ERAS策略,C组实施传统常规围术期处理及麻醉方法。记录2组患者手术方式、手术时间、麻醉时间、术中出血量、尿量、补液量、芬太尼总用量、术前、术毕时CVP和体温;分别于麻醉前(T_0)、术毕(T_1)、术后第1d(T_2)、第3d(T_3)及第7d(T_4)时,采集静脉血样,采用流式细胞术检测Treg细胞、Th1细胞和Th2细胞亚群比例,计算Th1/Th2比值,采用ELISA法测定血清TGF-β、IFN-γ和IL-4浓度。记录患者术后4、8、24、48h的VAS疼痛评分和Ramsay镇静评分。结果与C组比较,E组术中补液量、芬太尼总用量、术毕时CVP和术后4、8、24h时VAS疼痛评分明显降低,术毕时体温明显升高(P<0.05);与T_0比较,C组T_2-T_4时、E组T_2-T_3时外周血Treg细胞、Th2细胞百分比和血清TGF-β、IL-4浓度明显升高,外周血Th1细胞百分比、Th1/Th2比值和血清IFN-γ浓度明显降低(P<0.05);与C组比较,E组T_2-T_4时外周血Treg细胞、Th2细胞百分比和血清TGF-β和IL-4浓度明显降低,外周血Th1细胞百分比、Th1/Th2比值和血清IFN-γ浓度明显升高(P<0.05)。结论 ERAS策略可减少胃癌根治术患者术中芬太尼用量,防止术中低体温的发生,且提供满意的术后镇痛,在一定程度上可减轻术后细胞免疫的抑制程度。

调节性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞17在HBV相关肝病中的作用

目前,免疫细胞在HBV感染免疫调节中的作用得到广泛关注。对近年来调节性T淋巴细胞(Treg)和辅助性T淋巴细胞(Th)17在HBV相关性疾病,尤其是HBV相关性肝纤维化和肝衰竭以及肝细胞癌的发生、发展和预后中所起的作用进行了回顾。指出了Treg和Th17在HBV感染不同时期的动态变化及其在肝细胞癌中的作用还需要进一步研究,并期待后期研究通过不同信号通路对Treg或Th17进行调节,为HBV相关疾病治疗提供更加精准的方向。

青藤碱对类风湿关节炎患者外周血辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞比例的影响

目的从细胞层面探讨抗风湿中药单体青藤碱(SIN)对辅助性T淋巴细胞(Th)17/调节性T淋巴细胞(Tregs)细胞比例的影响,进一步阐明SIN治疗类风湿关节炎(RA)的机制。方法分别抽取SIN组和双氯酚酸钠组RA患者治疗前、治疗12周后以及对照组健康体检者的外周静脉血20mL,以肝素钠抗凝,采用Ficol1密度梯度离心法分离外周血单核细胞,进行荧光抗体标记,应用流式细胞仪测定Th17(CD4+IL-17+)和Tregs(CD4+CD25+CD127lowFoxP3+)细胞比例,观察SIN组和双氯芬酸钠组治疗前后类风湿因子(RF)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体水平和疾病活动性评分(DAS)28评分的变化,比较SIN组和双氯芬酸钠组Th17/Tregs细胞比例,观察SIN的临床疗效。结果 SIN组和双氯酚酸钠组治疗后的CRP、ESR、RF、抗CCP抗体水平均较同组治疗前显著下降(P值分别<0.05、0.01),但两组间治疗前后上述各项指标的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。SIN组和双氯酚酸钠组治疗后的DAS28评分均较同组治疗前显著下降(P值均<0.05),双氯芬钠组治疗后的DAS28评分显著高于SIN组(P<0.05)。SIN组和双氯芬酸钠组治疗前的Th17细胞比例均显著高于对照组(P值均<0.05),SIN组治疗后的Th17细胞比例较同组治疗前显著降低(P<0.05)。SIN组和双氯芬酸钠组治疗前的Tregs细胞比例均显著低于对照组(P值均<0.01),SIN组治疗后的Tregs细胞比例较同组治疗前显著升高(P<0.01),双氯芬酸钠组治疗前后Tregs细胞比例的差异无统计学意义(P>0.05)。双氯芬酸钠组治疗后的Tregs细胞比例显著低于SIN组(P<0.01)。结论 SIN可能通过抑制致炎细胞Th17升高,具有免疫抑制作用的Tregs细胞比例,而产生治疗RA的作用。

输血相关性急性肺损伤患者免疫调节性T淋巴细胞表达与预后的关系

目的探讨输血相关性急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)患者外周血免疫调节性T细胞(Treg)免疫活性的变化规律,并探讨其在患者不良预后中的临床意义。方法 TRALI患者(TRALI组)26例,根据临床多器官功能障碍综合征(MODS)的诊断标准,分为并发MODS组(n=8)和非MODS组(n=18),根据患者的预后情况,将其分为死亡组(n=5)和生存组(n=21);输血未发生TRALI组(非TRALI)30例,正常对照组为同期健康体检者30例。分别采集各组的外周静脉血,采用免疫磁性分离系统对外周血CD4+CD25+Treg进行分离纯化;采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg表面分子T淋巴细胞毒性相关抗原-4(CTLA-4)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Treg孵育液上清中IL-10的水平。结果 TRALI组患者CD4+CD25+Treg表面分子CTLA-4表达率[(37.65±7.33)%]及分泌IL-10水平[(45.34±4.19)pg/mL]与正常对照组[(22.12±7.23)%和(12.12±3.23)pg/mL]比较,均明显升高(P<0.05,P<0.01);MODS组患者CTLA-4表达率[(42.23±7.43)%]及分泌IL-10水平[(61.35±10.09)pg/mL]显著高于非MODS组[(30.26±5.65)%和(37.87±6.55)pg/mL](P<0.05,P<0.01);死亡组CTLA-4表达率(44.45±12.34)%及分泌IL-10水平(65.76±22.32)pg/mL显著高于生存组[(31.43±10.12)%和(43.46±10.67)pg/mL](P<0.05,P<0.01)。结论 TRALI患者外周血CD4+CD25+Treg表面分子表达及细胞因子分泌在是否并发MODS及是否生存等不同组间存在显著差异,提示TRALI可促进CD4+CD25+Treg表面分子表达,并刺激其分泌大量抑制性细胞因子发挥自身免疫作用,从而导致机体免疫功能障碍甚至免疫紊乱的发生与发展。

自发性高血压大鼠肾损伤伴随调节性T淋巴细胞下降及连接蛋白43的表达增强

目的探讨高血压大鼠肾损伤时调节性T淋巴细胞（regulatory T lymphocytes,Treg）及连接蛋白43（connexin 43,Cx43）在外周血的表达变化。方法选取16~17周龄雄性自发性高血压大鼠（spontaneous hypertension rats,SHR）和正常Wistar京都（Wistar-Kyoto,WKY）大鼠,各17只,测量血压后,采用苏木素-伊红（hematoxylin and eosin,HE）染色观察大鼠肾脏组织的病理学改变,应用流式细胞术检测大鼠外周血中CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞以及Cx43在CD4＋和CD8＋T细胞的表达比率。结果与WKY大鼠比较,SHR肾脏血管壁增厚,部分血管周围炎性细胞浸润和肾小球萎缩等肾损伤现象;WKY大鼠和SHR外周血中CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞所占CD4＋T细胞的频率分别为（3.1±0.1）%和（1.9±0.1）%,两者间有显著性差异（P〈0.01）;WKY大鼠和SHR外周血中CD4＋Cx43＋的表达比率分别为（0.76±0.20）%和（1.83±0.34）%;CD8＋Cx43＋的表达比率分别为（25.33±1.71）%和（36.46±2.87）%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论自发性高血压大鼠肾损伤伴随其外周血中CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞的频率下调,且Cx43在CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的表达增加。

干扰素治疗慢性乙型肝炎患者HBeAg转阴率和CD4^+CD25^+调节性T淋巴细胞水平的关系

目的观察干扰素抗病毒治疗前后慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)表达水平的变化和HBeAg转阴的关系。方法选择用干扰素α-2b治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎56例,分别于治疗前、48周时检测外周静脉血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的比例,同时检测HBeAg、ALT和HBV DNA载量。结果抗病毒治疗48周后HBeAg转阴组CD4+CD25+Treg水平[(9.12±2.45)%]较治疗前[(11.99±3.25)%]明显下降(P<0.01);而HBeAg未转阴组较治疗前无明显下降(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者经干扰素α-2b抗病毒治疗,HBeAg血清转换者CD4+CD25+Treg水平降低,而未转阴者Treg下降不明显。

急性脑梗死患者免疫调节性T淋巴细胞表达与预后的关系

目的探讨急性脑梗死患者外周血免疫调节性T淋巴细胞的表达及其与预后的关系。方法急性脑梗死患者30例,根据多器官功能障碍综合征诊断标准分为多器官功能障碍综合征组(n=8)和非多器官功能障碍综合征组(n=22),根据患者转归分为死亡组(n=5)和生存组(n=25);正常对照组为同期健康体检者30例。分别采集各组的外周静脉血,采用免疫磁性分离系统对外周血CD4+CD25+Treg进行分离纯化;采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg表面分子T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CD4+CD25+Treg孵育液上清中白细胞介素10(IL-10)的水平。结果急性脑梗死组患者CD4+CD25+Treg表面分子CTLA-4表达率(36.68%±7.41%)及分泌IL-10水平(15.38±3.79 ng/L)与正常对照组(22.20%±7.18%和8.96±3.28 ng/L)比较,均明显升高(P<0.01);多器官功能障碍综合征组患者CTLA-4表达率(42.10%±7.44%)及分泌IL-10水平(28.30±9.48 ng/L)显著高于非多器官功能障碍综合征组(30.26%±5.60%和17.86±6.54 ng/L;P<0.01);死亡组CTLA-4表达率(44.45%±12.34%)及分泌IL-10水平(33.90±10.62 ng/L)显著高于生存组(31.43%±10.12%和16.08±8.67 ng/L;P<0.01)。结论急性脑梗死患者可促进外周血CD4+CD25+Treg表面分子表达,并刺激其分泌大量抑制性细胞因子发挥自身免疫作用,从而导致机体免疫功能障碍甚至免疫紊乱的发生与发展,且与患者的预后密切相关。

1,25-二羟维生素D_3对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞和气道炎症的影响

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对哮喘大鼠调节性T淋巴细胞(即CD4+CD25+Foxp3+T细胞)及气道炎症的影响。方法28只Wistar大鼠用卵白蛋白作为致敏原制备大鼠哮喘模型,然后随机分为四组(n=7)。治疗组1于激发前1 h给予口服1,25(OH)2D3;治疗组2于激发前1 h给予皮下注射地塞米松;治疗组3则于激发前1 h给予以上两药联合应用;组4于激发前1 h不用药(哮喘对照组)。分别测定各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IL-10水平,计数总细胞数和嗜酸性粒细胞数;流式细胞仪检测外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞的比值;检测肺组织中IL-10和Foxp3mRNA表达。以未造模Wistar大鼠作为正常对照组(n=7)。结果哮喘对照组与正常对照组比较各项指标均有显著差异。与哮喘对照组比较,各哮喘治疗组大鼠BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞计数明显减少,IL-4水平降低而IL-10水平增高;外周血和脾脏单个核细胞中Treg与CD4+T细胞比值明显增高;肺组织中IL-10 mRNA和Foxp3 mRNA表达增加。各哮喘治疗组间及其与正常对照组间各项检测指标比较均无显著差异。结论哮喘大鼠给予1,25(OH)2D3可增加外周血和脾脏Treg比例和Foxp3mRNA表达水平。提示1,25(OH)2D3对Treg具有调节作用,对哮喘可能有潜在的治疗作用。

CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T淋巴细胞数量及功能变化与子宫内膜异位症患者发病相关性研究

目的:分析子宫内膜异位症(EMs)患者在位、异位内膜及外周血内CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的数量、分布及功能特性,探讨Treg细胞与EMs发病之间的关系。方法:收集EMs患者在位、异位内膜组织及外周血标本,并以非内异症患者作为对照,免疫组化分析在位、异位内膜内叉头状/翅膀状螺旋转录因子3(FOXP3)阳性细胞的数量及分布变化情况,并与EMs患者的r AFS临床分期进行相关性分析。流式细胞术检测Treg细胞占外周血CD4^+T淋巴细胞的百分比,及磁珠分选外周血内CD4^+CD25^+T细胞及CD4^+CD25-T细胞,3H-thymidine法测定CD4^+CD25^+T细胞免疫抑制功能变化情况。结果:EMs、非EMs患者在位内膜内平均FOXP3阳性细胞密度并无显著差异[(76.44±62.14)/mm^2vs(50.59±20.79)/mm^2;WU=152.0,P=0.20]。进一步按月经周期行亚组分析:EMs分泌期内膜内FOXP3阳性细胞密度显著高于非EMs患者[(94.84±53.91)/mm^2vs(31.37±19.02)/mm^2;MU=43.00,P=0.03]。不同r AFS期别患者卵巢异位症病灶内FOXP3阳性细胞密度并无显著差异[I^II期:(123.00±115.00)/mm^2vs III^IV期:(111.00±108.00)/mm^2;MU=139.5,P>0.05]。EMs患者外周血内Treg细胞比例显著低于非EMs患者[(0.58±0.21)%vs(1.35±0.38)%,P<0.001],但EMs患者外周血CD4^+CD25^+T淋巴细胞对CD4^+CD25-T淋巴细胞增殖抑制率,与非EMs相比并无显著变化[(68.43±18.15)%vs(66.37±17.78)%,P>0.05]。结论:EMs患者在位内膜内Treg细胞失去正常的周期波动性,EMs患者分泌期内Treg细胞数目增加可能与内异症发病相关。EMs患者外周血内Treg细胞比例下降,但其免疫抑制功能并无明显改变。