造血干细胞移植术后患者的胸腺输出功能及T细胞免疫重建效果分析

目的探讨造血干细胞移植术(HSCT)后患者的胸腺输出功能及T细胞免疫重建状况。方法选择2011年6月至2015年6月在我院行HSCT治疗的30例恶性血液病患者作为研究对象。HSCT术后1个月、3个月、6个月、12个月分别检测外周血CD3^+T细胞、CD4^+T细胞、CD8^+T细胞水平,采用实时定量PCR方法检测T细胞受体重排DNA删除环(TREC)水平;对患者长期生存率(>5年)、急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生率、慢性移植物抗宿主病(cGVHD)发生率、巨细胞病毒(CMV)感染率与TREC水平的关系进行Pearson相关性分析。结果 30例患者造血干细胞植入率为100%,HSCT术后均不出现排斥反应。HSCT术后100 d,发生aGVHD患者10例,表现为局部皮疹和瘙痒;术后100 d后,又出现局部cGVHD患者5例;术后6个月,出现单纯疱疹感染9例、出血性膀胱炎7例、EB病毒(EBV)感染26例、CMV感染20例、霉菌感染8例;HSCT术后12个月,新增单纯疱疹感染2例。HSCT术后1个月后,患者CD3^+、CD4^+、CD8^+均处在较低水平。CD3^+水平在术后第3个月开始稳步上升,术后6个月后逐步达到正常水平;CD4^+水平在术后1~3个月持续下降,术后3个月后开始逐步升高;CD8^+水平在术后第1个月开始稳步上升。HSCT术后1~3个月,患者TREC总体水平较低;术后6个月,TREC水平开始显著回升;术后12个月,TREC水平达(148.61±68.34)copies/10~5 PBMNCs。Pearson相关性分析结果显示,患者长期生存率(>5年)与TREC水平呈正相关(r=0.386),cGVHD发生率与TREC水平呈负相关(r=-0.847),aGVHD发生率、CMV感染率与TREC水平无明显相关关系。结论造血干细胞移植术后患者需要较长的时间进行免疫重建,术后1年其中枢免疫功能未完全恢复。TREC水平恢复越好患者的胸腺输出功能越好,患者长期生存率越高,cGVHD发生率越低。

胸腺近期输出功能与移植后T细胞免疫重建

造血干细胞移植的成功,有赖于T细胞免疫的重建。T细胞受体重排删除环(TRECs)是目前较可靠的反映胸腺近期输出功能的检测指标。定量检测TRECs水平可判断胸腺近期输出功能,评价移植后T细胞免疫重建情况。

IL-22在小鼠胸腺受损后T细胞免疫重建中的作用研究

目的探索γ射线照射诱导胸腺损伤后胸腺内IL-22表达水平的变化趋势，并研究IL-22在胸腺损伤后T细胞免疫重建中的作用。方法建立非致死剂量γ射线照射诱导的小鼠胸腺损伤模型，分别设置正常对照组和全身照射（TBI）组，ELISA法检测鼠胸腺及血浆中IL-22的含量；分别给予TBI组小鼠PBS或重组小鼠IL-22腹腔注射处理，设为TBI＋PBS组和TBI＋IL-22组，计数胸腺内总细胞和外周血白细胞含量，同时使用流式细胞术分析胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells，TEC）、各阶段胸腺细胞以及外周血T细胞的含量，实时定量PCR分析胸腺中与TEC功能相关的基因Foxnl、Ccl25、Aire和D114的mRNA表达水平。结果①照射后小鼠胸腺内IL-22表达水平高于未经照射处理的正常对照小鼠（P值均〈0．05）；②给予TBI组小鼠IL-22腹腔注射后，TBI＋IL-22组小鼠胸腺内IL-22含量高于TBI＋PBS组（P值均〈0．05）；⑧照射后第14天，TBI＋IL-22组胸腺内Foxnl、Ccl25、Aire和Dll4mRNA表达水平均高于TBI＋PBS组（P值均〈0．05），同时，TBI＋IL-22组胸腺总细胞计数[（5．93±3．19）×106/ml对（1．42±0．46）×106／ml，t=3．128，P=0．033]和外周白细胞计数[（3．08±0．94）×106／ml对（1．43±0．30）×106／ml，t=3．730，P=0．015]均高于TBI＋PBS组。流式细胞术分析示，照射后第14天TBI＋IL-22组小鼠胸腺内TEC和各胸腺细胞亚群含量均高TBI＋PBS组（P值均〈0．05），照射后第7天和14天TBI＋IL-22组外周血T细胞含量均高于TBI＋PBS组（P值均〈0．05）。结论 γ射线照射处理可导致小鼠胸腺内IL-22的含量升高，注射外源性IL-22可增加胸腺内IL-22含量。输注外源性IL-22可促进受损胸腺内TEC功能的修复，并增加各胸腺细胞亚群以及外周血中T细胞的数量。

单倍体相合造血干细胞移植后早期T细胞数量及功能初步分析

为探讨单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical-HSCT,hiHSCT)后早期T细胞免疫重建特点,采集22例患者移植后6个月内不同时间点的外周血,应用流式细胞术检测其T细胞亚群,以评价胸腺输出功能和T细胞数量的变化规律,使用Immuknow方法测定CD4+T细胞内ATP含量,以评估重建T细胞的功能。结果表明:移植前CD3+细胞数为833.75±359.84/μl,移植后1个月为318.87±266.71/μl,3个月为1006.76±512.32/μl,6个月升至1296.38±958.77/μl。移植前CD4+细胞数为336.99±211.12/μl,移植后1个月为45.89±44.21/μl,3个月时平均值为142.97±114.85/μl,6个月为181.78±120.61/μl;移植前CD8+细胞平均值为430.21±159.48/μl,移植后1个月230.44±195.89/μl,3个月为621.64±318.83/μl,6个月为823.077±633.55/μl;移植前CD4+CD45RO+记忆T细胞平均值为227.44±73.34/μl,移植后1个月为43.47±43.40/μl,3个月为138.69±110.17/μl,6个月为147.73±82.94/μl;移植前CD8+CD45RO+记忆T细胞数为212.70±98.48/μl,移植后1个月为184.76±168.65/μl,3个月为445.90±252.50/μl,6个月为519.80±475.53/μl;移植前CD4+CD45RA+CD62L+初始T细胞数为68.94±59.74/μl,移植后1个月为2.44±2.93/μl,3个月为3.14±3.48/μl,6个月为23.22±38.38/μl;移植前CD8+CD45RA+CD62L+初始T细胞为124.82±60.95/μl,移植后1个月为19.37±17.71/μl,3个月为76.63±50.85/μl,6个月为114.49±174.29/μl。Immuknow结果显示,hiHSCT后1个月CD4+T细胞内ATP含量降至210.19±119.37 ng/ml,其后逐渐恢复,在移植后3个月左右恢复至280.62±110.03 ng/ml,在移植后6个月左右升至357.28±76.18 ng/ml。结论:hiHSCT后早期T淋巴细胞重建以CD8阳性的记忆T细胞扩增为主,胸腺输出功能较差,但受者T细胞功能在移植后3个月时达到正常水平。