目的探讨巨噬细胞表达共刺激因子VSIG4(V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)对T细胞增殖与活化的影响。方法分别从VSIG4基因敲除型(VSIG4-/-)小鼠和同窝的野生型(VSIG4+/+)小鼠(遗传背景为C57BL/6)腹腔收集巨噬细胞,...目的探讨巨噬细胞表达共刺激因子VSIG4(V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)对T细胞增殖与活化的影响。方法分别从VSIG4基因敲除型(VSIG4-/-)小鼠和同窝的野生型(VSIG4+/+)小鼠(遗传背景为C57BL/6)腹腔收集巨噬细胞,在CD3单抗的刺激下与T细胞共培养,设为VSIG4-/-/T组及VSIG4+/+/T组,经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为对照组,未经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为空白组。3H-TdR掺入法检测细胞增殖;FACS测T细胞的活化标志CD69;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测共培养上清中IL-2、IFN-γ蛋白表达变化,RT-PCR法检测IL-2、IFN-γ基因水平表达变化。结果两共培养组中T细胞3 H掺入量均低于对照组(P<0.01);CD69阳性率、IL-2、IFN-γ的蛋白及基因表达同样均低于对照组(P<0.05);且VSIG4+/+/T组中T细胞以上指标相对于VSIG4-/-/T组下降更加明显,且两组间比较差异显著(P<0.05)。结论巨噬细胞特异表达的共刺激因子VSIG4在巨噬细胞与T细胞共培养抑制T细胞增殖活化的过程中发挥了作用。展开更多
目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其...目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其与患者临床特征的关系。方法选取肺结核患者30例(肺结核组)和20例健康体检者(健康对照组),通过流式细胞术检测2组外周血淋巴细胞CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg细胞的阳性率,以及检测BTLA/HVEM在肺结核患者外周血和淋巴细胞上的表达;利用蛋白芯片法检测结核抗体;通过影像检测结果判断肺结核进展程度;采用罗氏培养法培养结核分枝杆菌。结果结核组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(9.14±2.66)%,健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(6.39±1.73)%,相对于健康对照组,肺结核组患者外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg比率明显增高;健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上BTLA和HVEM的表达率高于肺结核组;BTLA、HVEM在肺结核组患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达呈正相关;BTLA、HVEM在CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达在痰涂阳性患者组中更低,而与其他临床特征无关。结论肺结核患者体内的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg增高,可能是抗结核免疫应答被抑制的原因,提示过度扩增导致数量异常增高的Treg是免疫应答不足和MTB逃逸的一个重要因素。负性共刺激信号BTLA/HVEM在结核患者体内下调提示其参与对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg的增殖的抑制作用。展开更多
目的检测共刺激分子B7-H3在骨肉瘤细胞侵袭转移中的作用及机制。方法运用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blot方法检测B7-H3分子在三种骨肉瘤细胞U-2OS、MG-63及Saos-2中的表达。通过Lipofectamine&...目的检测共刺激分子B7-H3在骨肉瘤细胞侵袭转移中的作用及机制。方法运用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blot方法检测B7-H3分子在三种骨肉瘤细胞U-2OS、MG-63及Saos-2中的表达。通过Lipofectamine®2000体外转染B7-H3 si RNA或B7-H3 c DNA质粒至骨肉瘤细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中B7-H3 m RNA和蛋白的表达。Transwell侵袭小室实验检测过表达/沉默B7-H3分子对骨肉瘤细胞侵袭能力及对MMP-2表达水平的影响。结果共刺激分子B7-H3在骨肉瘤细胞中均组成性表达。转染B7-H3 si RNA基因后,MG-63细胞B7-H3基因表达水平显著低于空载体转染组和未转染组[(0.131±0.002)vs.(0.504±0.007),(0.131±0.002)vs.(0.613±0.013),均P<0.05]。与对照组细胞相比,转染B7-H3 si RNA后MG-63细胞的侵袭力明显下降(P<0.05),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)分子的表达水平显著下降(P<0.05)。转染B7-H3 c DNA的Saos-2细胞B7-H3基因表达水平显著高于空载体转染组和未转染组,[(0.701±0.008)vs.(0.512±0.007)],[(0.701±0.008)vs.(0.403±0.013)],均P<0.05],Saos-2细胞的侵袭力明显增加(P<0.05),MMP-2分子的表达水平显著增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 B7-H3基因可能通过调控MMP-2分子进而参与调节骨肉瘤的侵袭转移。展开更多
文摘目的探讨巨噬细胞表达共刺激因子VSIG4(V-set and immunoglobulin domain-containing protein 4)对T细胞增殖与活化的影响。方法分别从VSIG4基因敲除型(VSIG4-/-)小鼠和同窝的野生型(VSIG4+/+)小鼠(遗传背景为C57BL/6)腹腔收集巨噬细胞,在CD3单抗的刺激下与T细胞共培养,设为VSIG4-/-/T组及VSIG4+/+/T组,经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为对照组,未经CD3单抗刺激的T细胞单独培养设为空白组。3H-TdR掺入法检测细胞增殖;FACS测T细胞的活化标志CD69;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测共培养上清中IL-2、IFN-γ蛋白表达变化,RT-PCR法检测IL-2、IFN-γ基因水平表达变化。结果两共培养组中T细胞3 H掺入量均低于对照组(P<0.01);CD69阳性率、IL-2、IFN-γ的蛋白及基因表达同样均低于对照组(P<0.05);且VSIG4+/+/T组中T细胞以上指标相对于VSIG4-/-/T组下降更加明显,且两组间比较差异显著(P<0.05)。结论巨噬细胞特异表达的共刺激因子VSIG4在巨噬细胞与T细胞共培养抑制T细胞增殖活化的过程中发挥了作用。
文摘目的研究B、T淋巴细胞衰减因子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)及其配体疱疹病毒进入中介体(herpesvirus entry mediator,HVEM)在肺结核患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)调节性T细胞(CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg)中的表达及其与患者临床特征的关系。方法选取肺结核患者30例(肺结核组)和20例健康体检者(健康对照组),通过流式细胞术检测2组外周血淋巴细胞CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg细胞的阳性率,以及检测BTLA/HVEM在肺结核患者外周血和淋巴细胞上的表达;利用蛋白芯片法检测结核抗体;通过影像检测结果判断肺结核进展程度;采用罗氏培养法培养结核分枝杆菌。结果结核组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(9.14±2.66)%,健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg所占比例为(6.39±1.73)%,相对于健康对照组,肺结核组患者外周血中CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg比率明显增高;健康对照组CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上BTLA和HVEM的表达率高于肺结核组;BTLA、HVEM在肺结核组患者CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达呈正相关;BTLA、HVEM在CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg上的表达在痰涂阳性患者组中更低,而与其他临床特征无关。结论肺结核患者体内的CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg增高,可能是抗结核免疫应答被抑制的原因,提示过度扩增导致数量异常增高的Treg是免疫应答不足和MTB逃逸的一个重要因素。负性共刺激信号BTLA/HVEM在结核患者体内下调提示其参与对CD4^(+)CD25^(+)CD127^(low)Treg的增殖的抑制作用。
文摘目的检测共刺激分子B7-H3在骨肉瘤细胞侵袭转移中的作用及机制。方法运用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blot方法检测B7-H3分子在三种骨肉瘤细胞U-2OS、MG-63及Saos-2中的表达。通过Lipofectamine®2000体外转染B7-H3 si RNA或B7-H3 c DNA质粒至骨肉瘤细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中B7-H3 m RNA和蛋白的表达。Transwell侵袭小室实验检测过表达/沉默B7-H3分子对骨肉瘤细胞侵袭能力及对MMP-2表达水平的影响。结果共刺激分子B7-H3在骨肉瘤细胞中均组成性表达。转染B7-H3 si RNA基因后,MG-63细胞B7-H3基因表达水平显著低于空载体转染组和未转染组[(0.131±0.002)vs.(0.504±0.007),(0.131±0.002)vs.(0.613±0.013),均P<0.05]。与对照组细胞相比,转染B7-H3 si RNA后MG-63细胞的侵袭力明显下降(P<0.05),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)分子的表达水平显著下降(P<0.05)。转染B7-H3 c DNA的Saos-2细胞B7-H3基因表达水平显著高于空载体转染组和未转染组,[(0.701±0.008)vs.(0.512±0.007)],[(0.701±0.008)vs.(0.403±0.013)],均P<0.05],Saos-2细胞的侵袭力明显增加(P<0.05),MMP-2分子的表达水平显著增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 B7-H3基因可能通过调控MMP-2分子进而参与调节骨肉瘤的侵袭转移。
