乳癌患者转移淋巴结中T细胞受体β链互补决定区3谱型分析

目的：：分析乳癌患者转移淋巴结标本中 T 细胞受体（TCR）β链互补决定区3（CDR3）的谱型偏移及氨基酸序列特点。方法：选取5例乳癌患者转移淋巴结和2例乳腺反应性增生患者的淋巴结标本，应用 RT-PCR 扩增 T细胞24个 TCR β链可变区（BV）亚家族，经基因扫描确定 T 细胞克隆性，对提示单、寡克隆性增生的 TCR BV 亚家族的 PCR 产物进行测序。结果：乳腺反应性增生患者淋巴结中 T 细胞均为多克隆性增生。乳癌患者转移淋巴结中T 细胞呈单、寡克隆及多克隆性增生，克隆性增生 T 细胞中存在2~5个 BV 亚家族的谱型偏移；CDR3氨基酸序列分析证实单、寡克隆性增生 T 细胞的 CDR3氨基酸序列呈现多样性的特点。结论：乳癌患者 TCR BV 亚家族取用存在谱型偏移，不同 T 细胞克隆的 CDR3氨基酸序列不同。

免疫组库测序分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体β链CDR3的多样性

目的采用免疫组库测序的方法分析新生儿脓毒症患者外周血T细胞受体(T cell receptor,TCR)β链互补决定区3 (complementarity determining region 3,CDR3)的多样性,探讨新生儿脓毒症的可能发病机制。方法 12例新生儿脓毒症确诊患儿为病例组,9例胎龄、出生体重及日龄相匹配的健康足月儿为对照组。采用Omega公司核酸纯化试剂盒(SQ Blood DNA Kit Ⅱ)从外周血样品中提取DNA,对TCRβ链CDR3进行多重PCR扩增,然后对产物进行高通量测序,分析其TCRβ链CDR3多样性及表达的差异。结果病例组和对照组的TCRβ链CDR3长度和类型相似,且均呈高斯分布。采用D50和香农-威纳指数作为多样性的评价指标,显示病例组TCRβ链CDR3多样性低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。针对TCRβ链V片段48个基因的使用频率进行比较,其中TRBV10-3、TRBV2和TRBV20-1的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对TCRβ链J片段13个基因的使用频率进行比较,其中TRBJ2-3、TRBJ2-5和TRBJ2-7的使用频率病例组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿脓毒症患者外周血TCRβ链CDR3多样性发生了明显改变,提示这可能与新生儿脓毒症的免疫发病机制有关。

高通量测序分析自身免疫性疾病T细胞受体β链CDR3组库的特征

自身免疫性疾病是机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。导致其发病的基本因素可能是自身免疫耐受的破坏。T细胞在自身免疫病的适应性免疫应答过程中起着至关重要的作用。每一个成熟的 T 细胞表面表达一种特定的T细胞受体（TCR），互补决定区3（CDR3）最能直接反应TCR多样性。 T 细胞对众多抗原的识别依赖于CDR3区的多样性，故对TCR CDR3区序列的分析，可作为判别 T 细胞抗原识别特性的重要指标。研究［1］发现高通量测序技术检测 TCR CDR3组库特征变化已被广泛应用，包括恶性肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病等。本文就自身免疫性疾病的TCRβ链CDR3组库特征变化的研究进展进行综述。

高通量测序分析脓毒症患者早期T细胞抗原受体β链CDR3的组成及多态性

目的 采用高通量测序的方法探讨脓毒症患者早期T细胞抗原受体（TCR）β链互补决定区3（CDR3）的组成及多态性。 方法 从深圳市人民医院重症医学科收集脓毒症患者6例，从体检科收集年龄匹配的对照患者9例，入科后留取其静脉血，分离外周血单核细胞并提取DNA，对TCR β链CDR3进行多重PCR扩增，然后对产物进行高通量测序及数据分析。 结果 脓毒症组（S组）和对照组（N组）的TCR β链CDR3长度呈高斯分布，且两组前60种特有核苷酸序列和特有氨基酸表达水平存在很大差异；针对TRβV片段59个基因的表达水平进行比较，其中TRBV 10-2、TRBV 10-3、TRBV 12-1、TRBV 5-7的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）；对TRβJ片段中的14个基因的表达水平进行了F检验，其中TRBJ 1-1、TRBJ 1-2、TRBJ 2-1、TRBJ 2-5的表达水平差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 脓毒症患者早期T细胞TCR β链CDR3的多态性发生了明显改变，提示其与脓毒症的免疫发病机制有关，这将为脓毒症的发病机制研究、治疗和预后的判断提供新的方法和手段。

B细胞BCR CDR3受体库的高通量测序分析概况

B细胞是介导机体体液免疫应答的主要细胞群,其识别、结合抗原主要依赖互补决定区（CDR）,它决定着抗体的特异性,而互补决定区3（CDR3）比CDR1、CDR2更具多样性,通过观察机体B细胞BCR CDR3受体库的多样性、重叠率的大小、

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)基因谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1.1和Vβ8基因,且为单克隆,而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因,均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCR CDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。

重症/难治性结缔组织病患者自体外周血干细胞移植治疗前后TCRBV和CDR3的变化规律

目的探讨结缔组织病患者经造血干细胞移植后T细胞受体BV亚家族(T cell receptor BV,TCRBV)的重建规律。方法重症/难治性结缔组织病13例,其中系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)8例,类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)4例,原发性干燥综合征1例。分别于动员前、动员后、移植后第2周、1月、3月、6月、12月及18月,共8个时间窗,取外周血,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基因扫描方法,观察TCRBV和互补决定区3(complementarity determinative region3,CDR3)表达的动态演变。结果动员前的TCRBV亚家族和CDR3谱型呈一定程度的偏移性/寡克隆性表达;移植后2周,其偏移性/寡克隆性呈现一过性增强;而后再向多克隆化演变。结论移植后的TCRBV和CDR3的免疫重建具有自身反应性TCR的优势表达和CDR3的寡克隆性增殖受抑的特点,有向正常人表达类型发展的趋势。

基因扫描分析小鼠T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立小鼠T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法应用RT-PCR方法分别扩增近交系小鼠C57BL/6H-2b,Balb/CH-2d和F1代小鼠(Balb/c×C57BL/6F1H-2d/b,CB6F1)脾脏T细胞的21个TCRVα家族和18个TCRVβ家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果3种小鼠脾脏T细胞均表达所有的TCRVα和VβCDR3基因,基因扫描显示全部TCRCDR3谱型呈高斯(钟型)分布,提示均为多克隆T细胞。各家族CDR3基因表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。结论基因扫描分析TCRαβCDR3基因谱型是检测小鼠T细胞克隆性的精确敏感方法。

乙型肝炎病毒性相关性肝细胞癌患者外周血与肝癌组织T淋巴细胞受体谱系分析

目的比较乙型肝炎病毒性相关性肝细胞癌（HBV-RHCC）患者外周血T淋巴细胞（PBLs）与肝癌组织中浸润性T淋巴细胞（TILs）受体（TCR）谱系及互补决定区3（CDR3）序列特点。方法选择新乡市中心医院2014年3～8月行肝癌切除术患者10例为研究对象。应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增TCRβ链可变区（BV）中CDR3基因的24个家族,采用扭曲率、缺失率、正态率、单峰率以及复杂评分分析TCR-BV各家族谱系的完整性与多样性,并将优势利用的谱系家族进行CDR3测序。结果 10例HBV-RHCC患者CDR3谱系多数呈现扭曲分布。PBLs与TILs复合评分比较差异有统计学意义（P=0.042）;且上述谱系特征与肝癌家族史、AFP水平有关,但与患者的病毒载量无关。此外,在PBLs与TILs中发现了＂GGTGVSPLH＂＂LGTGNDDPF＂共有序列。结论 HBV-RHCC患者PBLs与TILs中存在克隆性增生,并证实了局部细胞免疫功能差异的存在。多个共有序列的发现,为HBV-RHCC的靶向治疗提供理论基础与潜在的靶点。

牙周炎中T细胞受体CDR3谱系研究进展

牙周炎是一种由菌斑微生物引发的牙周支持组织的慢性炎症性、破坏性疾病,其发生、发展与宿主的免疫应答密切相关,其中T细胞在牙周炎免疫应答中发挥着重要作用。本文将从T细胞免疫应答及T细胞受体(T cell receptor,TCR)互补决定区3(complementarity⁃determining region 3,CDR3)谱系特征着手,对TCR CDR3谱系特征与牙周炎发病的关系作一综述,为牙周炎的发病机制研究及临床个性化治疗提供新思路。对牙周炎TCR CDR3谱系的文献复习提示,牙周炎局部病变中存在T细胞的寡克隆积累及V(variable)、J(join⁃ing)基因的偏向取用,且在CDR3区发现重复取用的核苷酸序列及保守的氨基酸基序,提示TCR CDR3组库的特征在牙周炎免疫发病机制中具有重要作用。

HIV感染T细胞受体CDR3谱型研究新进展

获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)引起的以获得性细胞免疫功能缺陷为特征的传染性疾病。在抗HIV过程中,机体特异性T淋巴细胞介导的细胞免疫发挥着重要作用。其中,T细胞受体-抗原受体互补决定区(CDR3)与HIV抗原结合,介导T细胞免疫,通过对T细胞受体CDR3的测定来表征特定T细胞克隆扩增的程度,从而反映出T细胞的功能和状态,进一步为艾滋病的诊断、治疗及疫苗研制提供理论支持。

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移和序列鉴定

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移,为SLE的免疫应答机制和个性化治疗研究提供基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析5例正常献血员的CDR3分布特征及5例SLE患者PBMC中T细胞TCRβ链CDR3的优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果5例正常献血员PBMCTCRBVCDR3谱型均呈高斯分布,5例活动型SLE患者24TCRBVCDR3家族均出现不同的优势表达,对单/寡克隆性增生T细胞β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论SLE活动期外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与SLE的免疫发病机理有关,特异应答的T细胞TCRCDR3序列的确定,将为SLE的发病机制研究和个性化治疗提供新的方法与手段。

正常人外周血αβ T细胞TCR β链CDR3多态性和长度分析

采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血T细胞TCRβ链CDR3的多态性和长度分布.提取6例正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)的总RNA,逆转录成cDNA,以24个TCR BV基因家族为上游引物,共同的TCR BC基因为下游引物(荧光标记),6例样品PCR产物的基因扫描分析表明,24个TCRBV家族的CDR3谱型分析在1.5%琼脂糖凝胶电泳图上显示1个模糊条带.序列测定结果显示,各TCR BV家族的CDR3谱型均超过8个条带.GeneScan分析证明,正常人外周血T细胞的24个TCR BV家族的CDR3谱型为标准的高斯分布,各家族的CDR3表达频率相近,呈现不同的CDR3多态性和不同的CDR3长度.多数TCR BV家族产物为框架内重排(相邻2个PCR产物相差3个碱基),少数TCR BV家族表现为两个峰群的重排.该研究对正常人TCRβ链CDR3谱系的详细分析将为T细胞应答、TCR重组等研究提供基础.利用免疫谱型分析技术能监测到TCR CDR3谱型分布特征和表达频率的变化.

IL-2体外诱导健康人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的研究

目的研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响。方法分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果3例健康志愿者外周血T细胞对鼻咽癌细胞系CNE2没有杀伤作用;PBMC的TCRVβCDR3谱型均呈高斯分布,经IL-2体外培养后部分家族出现不同的优势表达。结论IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移有一定影响,对其非特异性杀伤无影响。

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体介导的αβT细胞CDR3谱系漂移

目的探讨抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-1)介导的αβT细胞CDR3谱系漂移,为双特异性抗体介导的T细胞免疫应答机制提供理论基础。方法采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员T细胞在人卵巢癌SKOV3细胞联合BHL-1刺激前后的TCR库多样性变化(CDR3谱型分布特征)及刺激后T细胞TCRα、β链CDR3优势利用情况,对克隆性增生T细胞的CDR3区进行序列分析。结果刺激前6例正常献血员TCR CDR3谱型均呈高斯分布,刺激后发生CDR3谱系漂移,部分TCR Vα、Vβ家族出现优势增生,明确了BHL-1介导下单克隆增生T细胞的α、β链CDR3序列。结论 SKOV3联合BHL-1诱导的T细胞CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达可能与BHL-1介导的特异性T细胞免疫反应有关,特异应答T细胞TCR CDR3序列的确定,将为卵巢癌的T细胞免疫治疗提供基础。

系统性红斑狼疮T细胞受体BV亚家族基因克隆谱型分析

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中T细胞受体β链可变区(TCRBV)亚家族互补决定区3(CDR3)基因表达谱型及对增殖的T细胞克隆进行序列分析,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫病的相关性。方法应用RT-PCR的方法扩增8例SLE患者外周血的TCRBV24个家族的基因序列,分析TCRBVCDR3基因表达情况。对增生的T细胞克隆的TCRBV进行序列分析,通过生物信息学分析,了解TCRBV基因与自身免疫病的相关性。结果8例SLE患者TCRBVCDR3谱型图均出现异常,表现为CDR3多态性降低,BV家族寡克隆增生。在TCRBV13.1基因家族有4例患者均出现寡克隆增生;在BV8、BV9、BV18家族中有3例出现寡克隆增生。未发现SLE的TCRBV的CDR3区有共同的氨基酸基序,但与基因库中的其他自身免疫病的T细胞克隆有较高的一致性。结论SLE患者T细胞出现寡克隆增生,CDR3多态性降低,可能与自身免疫病发病有关。

外周造血干细胞移植后及出现GVHD时T细胞β链CDR3谱型分析

目的初步探讨外周造血干细胞(PBSC)移植后以及出现移植物抗宿主疾病(GVHD)时,外周血T细胞!链的CDR3谱型变化和特征。方法采用免疫扫描谱型分析技术,监测1例重型β-地中海贫血移植前、移植后23d、GVHD时(移植后28d)患者外周血单核细胞(PBMC)及供者PBSC标本T细胞β链的CDR3谱型变化,基因扫描(GeneScan)和测序分析克隆性增生T细胞TCR分子特征。结果患者移植前PBMC的24个TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布,部分家族在移植后23d、和GVHD时呈现为寡峰和单峰,同时部分家族消失,单克隆增生T细胞TCR beta链的测序结果显示不同的CDR3区组成,设计特异的CDR3引物进一步分析提示其可能来源于干细胞移植后的分化。结论PBSC移植后23d,PBMC中的多数24TCR BV家族CDR3谱型表现为多克隆,GVHD时,部分家族出现明显的单、寡克隆增生,这些特异T细胞可能在GVHD中发挥重要作用。对移植前后TCR CDR3谱型和特异TCR分子特征的分析将有助于PBSC移植后免疫重建的评估和出现排斥反应时的特异性治疗。

肺结核患者外周血αβT细胞CDR3谱系研究

目的探讨活动性肺结核患者外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系漂移,为肺结核患者特异性T细胞免疫应答机制和免疫治疗研究提供基础。方法采用基因扫描谱型分析技术,分析6例正常献血员及6例活动性肺结核患者PBMC中T细胞TCR CDR3谱型分布特征及患者TCRVα和Vβ基因家族的优势取用情况,对克隆性增生T细胞CDR3区进行序列分析。结果6例正常献血员外周血中TCR 32 Vα,24Vβ家族CDR3谱型均呈高斯分布(gaussian distribution),6例活动性肺结核患者出现不同Vα和Vβ家族优势取用,对部分单/寡克隆增生T细胞α,β链CDR3区基因进行测序,证实存在不同的CDR3序列。结论肺结核患者活动期外周血T细胞TCRα,β链CDR3谱系出现明显漂移,提示CDR3的选择性表达与结核患者细胞免疫应答机制有关,优势取用Vα,Vβ家族T细胞TCR CDR3序列的确定,为肺结核患者特异性T细胞免疫治疗研究提供基础。

TCR CDR3组库及HLA等位基因与新型冠状病毒肺炎关系的研究概况和进展

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致。机体抗病毒的适应性免疫应答主要依赖T细胞选择性地清除病毒感染宿主细胞,而T细胞受体(T cell receptor,TCR)的结构决定其对病毒抗原决定簇的特异性识别,感染者TCR互补决定区3(complementarity determining region 3,CDR3)组库的特征在COVID-19的发生与发展中有重要的提示意义。此外,人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是不同个体对抗原引起免疫应答差异的主要原因,在人体的免疫应答中发挥着重要作用。文章重点概述TCR CDR3组库的特征和HLA等位基因的组成与COVID-19之间关系的研究概况和进展。

难治性天疱疮自体外周血干细胞移植后T细胞受体克隆性的分析

目的探讨难治性天疱疮患者自体外周血干细胞移植(APBSCT)前、后T细胞抗原受体β链(TCRβ)互补决定区3(CDR3)基因表达谱型变化,深入了解天疱疮发病机制以及患者造血干细胞移植后T细胞克隆的免疫重建特点。方法应用RT-PCR方法扩增天疱疮患者移植前、后外周血单个核细胞24个TCRβ CDR3区段基因序列,分析其基因表达情况。采用免疫扫描谱型分析技术,分析正常人外周血单核细胞TCRβ链CDR3谱型分布特征,以及难治性天疱疮患者干细胞移植前、后CDR3谱型变化情况。结果动员前天疱疮患者TCRβ CDR3谱型均出现异常,表现为一定程度的T细胞单(寡)克隆增生性表达;移植后12个月内仍出现部分表达缺失及寡克隆表达;而后T细胞克隆分布渐趋于正常,CDR3恢复多态性。结论难治性天疱疮患者外周血T细胞表现单(寡)克隆增生,CDR3多态性降低,可能与其发病机制有关。APBSCT后的免疫功能重建恢复了CDR3的多态性,提示造血干细胞移植是治疗难治性天疱疮的有效手段。