标准曲线法与自动阈值法对TREC检测结果稳定性的影响

为评价实时荧光PCR法检测T细胞受体剪切环(TREC)时,标准曲线法或自动阈值法对不同操作批次重复检测结果稳定性的影响,采用同一批次TREC检测试剂盒重复检测标准质粒中内参基因与靶标TREC的Ct值,同时重复检测一组TREC低值样本的Ct值;分别采用标准曲线法和自动阈值法对检测结果进行分析,比较两种分析方法得到结果(Ct值)的稳定性。对标准质粒和TREC低值样本的检测结果表明,两种分析方法得到的Ct值与两个靶标的标称浓度(log10)均呈线性相关,R^(2)为1.00。两种方法获得标准质粒中内参基因Ct平均值,标准曲线法较自动阈值法平均低1.26,标准质粒中TREC基因Ct平均值,前者较后者平均低0.96。对TREC低值样本重复检测结果表明,同一样本标准曲线法获得的两种靶标Ct值的变异系数(CV)和极差均低于自动阈值法。表明在以实时荧光PCR法检测TREC靶标从而进行重症联合免疫缺陷(SCID)的筛查时,标准曲线法的分析结果稳定性优于自动阈值法。

原发性免疫缺陷病早期筛查技术进展

原发性免疫缺陷病(PID)是一类由于单基因突变导致免疫细胞、免疫分子数量异常和/或功能缺陷的疾病。PID患者易反复感染,伴过敏、自身免疫、自身炎症和恶性肿瘤性疾病,疾病的致死、致残率极高,早期诊断和治疗有助于改善预后。目前已知的PID筛查技术包括T淋巴细胞受体剪切环筛查重症联合免疫缺陷病,Kappa重排剪切环筛查无丙种球蛋白血症,串联质谱法筛查腺苷脱氨酶缺陷和嘌呤核苷磷酸化酶缺陷,蛋白组学筛查特定的蛋白缺陷以及二代测序技术筛查基因变异。现就目前PID的早期筛查技术进行简要总结,为日后我国筛查工作的开展提供参考。