T细胞受体Vβ基因谱系分析在血液肿瘤研究中的应用

分析T细胞受体(TCR)Vβ基因谱和CDR3长度可以确切了解TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性。目前TCR Vβ基因谱分析已广泛应用于判断血液肿瘤和免疫相关疾病患者的免疫功能状态及某些致病克隆的确定;评价不同造血干细胞移植后的免疫重建;探索性区分临床移植物抗白血病效应和移植物抗宿主病;以及为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供依据等。

单细胞测序分析病毒性肺炎患者T细胞受体基因差异

目的:采用单细胞测序分析病毒性肺炎患者外周血T细胞受体(TCR)基因差异,探讨可能发病机制。方法:利用NCBI数据库获得数据,设置病例组和对照组进行实验。使用RStudio软件R语言分析单细胞测序数据,绘制表格和图片,得出结论。结果:病例组和对照组TCR有显著差异。对TCRα链和β链V、J基因片段使用频率进行分析,其中病例组TRAV1-2、TRAV29/DV5、TRAJ33、TRAJ48、TRBV20-1、TRBV2、TRBJ2-3、TRBJ1-1等基因使用频率明显高于对照组(P<0.05)。进一步V-J基因组合分析显示,病例组α链V-J对使用频率最高的是TRAV1-2-J33,β链V-J使用频率最高的是TRBV20-1-J2-1,αβ双链V-J使用频率最高的是TRAV30-J24-TRBV3-1-J2-7。结论:病毒性肺炎患者外周血TCR基因发生了明显改变,可能与病毒免疫发病机制有关。

中晚期非小细胞肺癌能谱CT分析与EGFR基因表达的相关性研究

目的:探讨中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表皮生长因子受体EGFR基因表达和能谱CT成像参数的相关关系。方法:选取2017年7月—2019年6月于新疆军区总医院术前行CT能谱成像且经手术切除病理学检查证实为NSCLC的患者71例,采用免疫组化染色检测肿瘤组织内EGFR的表达,用Spearman等级相关分析观察EGFR的表达与CT能谱参数水浓度、标准化碘浓度(NIC)、能谱CT曲线斜率(λ)、70 keV单能量水平下病灶内的CT值(CT 70 keV)的相关性。结果:EGFR-组的70 keV CT值、NIC值、λ值低于EGFR+组,EGFR-组的NIC值低于EGFR+组,但水浓度高于EGFR+组,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR高表达与NIC呈正相关(r=0.851,P=0.012),与水浓度呈负相关(r=-0.320,P=0.037),与能谱曲线斜率呈正相关(r=0.441,P=0.025),但与CT 70 keV无相关性(r=0.180,P=0.452)。结论:NSCLC能谱CT成像定量参数NIC和λ与EGFR阳性率均有正相关性,在NSCLC的早期诊断中有参考价值。

FDA调查接受靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后发生T细胞恶性肿瘤的严重风险

美国食品药品监督管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后患者出现T细胞恶性肿瘤(包括嵌合抗原受体CAR阳性淋巴瘤)的报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。FDA已确定,T细胞恶性肿瘤的风险适用于目前批准的所有经基因修饰的靶向BCMA和靶向CD19的自体CAR-T细胞免疫疗法。接受过多种同类产品治疗的患者发生了T细胞恶性肿瘤。

嵌合抗原受体基因修饰T细胞免疫疗法在肺癌治疗中的研究进展

肺癌是全世界所有癌症中发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一,目前仍缺乏较好的治疗手段。嵌合抗原受体基因修饰T(CAR-T)细胞免疫疗法作为一种新的治疗方法在血液系统恶性肿瘤中疗效显著,也为肺癌等实体肿瘤的免疫治疗开辟了新途径。然而,由于实体瘤的异质性、肿瘤微环境免疫抑制、肿瘤靶抗原逃逸及脱靶毒性等问题,造成CAR-T细胞免疫疗法在肺癌治疗中的应用存在挑战和障碍。本文总结了CAR-T细胞免疫疗在肺癌治疗中的最新研究进展,包括CAR-T细胞生物学特征、靶点选择、早期临床研究和治疗不良反应,并提出肺癌CAR-T细胞免疫疗法的优化策略,旨在为肺癌的临床免疫治疗提供新思路。

和解汤对慢性乙型肝炎T细胞受体Vβ7基因表达的影响

目的:探讨和解汤对慢性乙型肝炎（简称慢乙肝）临床疗效与T细胞受体Vβ7（TCRVβ7）基因表达特征的相关性。方法:将慢乙肝患者45例随机分为两组,治疗组（30例）采用和解汤治疗,对照组（15例）采用常规西药治疗,观察治疗后TCRVβ7,基因表达变化。结果:经过6个月治疗,两组ALT水平均显著下降（P<0.01）,治疗组5例测出TCRVβ7,基因表达,并均出现HBV-DNA、HBeAg阴转;对照组无一例测出TCRVβ7基因表达,无一例出现HBV-DNA、HBeAg阴转。HBV-DNA、HBeAg未阴转的患者,虽肝功能恢复正常,但无一例测出TCRVβ7基因表达。两组总有效率比较差异无显著性,但两组显效率比较差异有显著性（P<0.01）。结论:和解汤对TCRVβ7基因表达有调节作用,可能是抑制病毒复制、清除病毒的重要途径。

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的 了解T细胞 急性淋巴细胞白血病 (T ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCRVβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法 利用RT PCR方法扩增 6个不同的T细胞株和 6例初发未治T ALL病人外周血单个核细胞中 2 4个TCRVβ基因的互补决定区 3(CDR3) ,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性 ,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果 与正常人外周血表达全部 2 4个Vβ亚家族不同 ,6例T ALL病人分别表达 5～ 12个Vβ亚家族。 6例病人均存在 1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞 ,另外 ,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变 ,呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞 ,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论 T ALL患者外周血T细胞的TCRVβ谱系出现限制性改变 ,均可检测到克隆性增殖T细胞 ,尚需进一步鉴定其性质 (肿瘤性或抗原特异性增殖 ) 。

NB4和HL-60细胞诱导的脐血T细胞TCR Vβ基因谱系分析

目的:了解经NB4细胞和HL-60细胞体外诱导后脐血T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况。方法:采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,用经丝裂霉素灭活的NB4细胞和HL-60细胞体外诱导脐血T细胞增殖,利用RT-PCR分析经MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族的利用情况,并用基因扫描分析其克隆性特点。结果:诱导前脐血T细胞表达20个TCR Vβ亚家族,诱导后的T细胞所表达的TCR Vβ亚家族随培养时间增加而逐渐减少,且诱导组呈现出克隆趋势或寡克隆增殖特点。两种细胞诱导后10 d均可见Vβ1的克隆增殖出现变化,此外,NB4诱导的T细胞出现Vβ15,而HL-60诱导的T细胞则出现Vβ23的克隆增殖情况。结论:NB4细胞和HL-60细胞可诱导脐血TCR VβT细胞克隆性增殖,此优势表达的克隆性T细胞可能与特异性抗原介导的细胞免疫反应有关。

再生障碍性贫血T细胞受体Vβ基因表达及生血合剂对其的干预作用

目的 利用免疫学和分子生物学技术，着重从T细胞受体β链可变区（TCR Vβ）亚家族基因表达角度探讨再生障碍性贫血（AA）的免疫发病机制及中药复方生血合剂的治疗作用。方法 AA患者分别用生血合剂（治疗组10例）和环孢霉素（对照组10例）治疗6个月以上，采用RT-PCR、基因扫描方法检测治疗前后外周血单个核细胞TCR Vβ基因表达的变化。结果 20例AA患者Vβ24个亚家族基因谱型倾斜，寡克隆亚家族所占百分率明显增多，与健康人（10名）比较差异有显著性（P〈0．01）。30％～50％的AA患者存在Vβ2、Vβ5、Vβ6、Vβ15、Vβ16、Vβ22、Vβ23寡克隆亚家族，50％以上的患者存在Vβ8、Vβ21寡克隆亚家族。治疗后两组寡克隆亚家族均比治疗前减少（P〈0．05）。结论 多个克隆性增殖的T细胞家族参与了AA的发病过程，生血合剂可改善TCR Vβ谱型倾斜程度，降低异常T细胞克隆性增殖，从而减少异常克隆的T细胞对造血组织的免疫损伤，有利于骨髓造血功能的恢复。

CML患者CD4^+和CD8^+ T细胞的TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的:了解慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者外周血CD4+和CD8+T细胞中TCRVβ亚家族T细胞的基因表达和克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增19例CML-CP患者外周血单个核细胞(PBMCs)、CD4+和CD8+细胞TCRVβ亚家族基因的CDR3,阳性产物进一步经基因扫描分析其克隆性。结果:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞分别表达部分(1～21个)Vβ亚家族,均以Vβ13的表达率最高,其次为Vβ9,多数患者的一些Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖,主要出现于CD8+细胞中,分别以Vβ21(CD4+)和Vβ11(CD8+)亚家族的克隆性增殖多见。结论:CML患者外周血CD4+和CD8+细胞的TCRVβ谱系均存在限制性分布,患者存在的克隆性增殖CD4+和CD8+T细胞可能与宿主抗CML抗原反应有关,它们可能在抗CML效应中起主要作用。

口腔扁平苔藓T细胞受体BV基因的优势取用初探

目的:研究口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者损害组织中浸润的T细胞受体(T cell receptor,TCR)BV基因的取用格局。方法:采用实时定量聚合酶链反应,分析OLP患者损害组织中浸润的T细胞和外周血中T细胞TCR BV基因的取用格局。采用GraphPad Prism version 5.00软件对数据进行Mann-Whitney U检验。结果:43例OLP患者的损害组织对BV4、BV14和BV18基因的取用显著高于39例OLP患者外周血对这些BV基因的取用。结论:OLP患者损害组织浸润的T细胞优势取用BV4、BV14和BV18基因,提示带有BV4、BV14和BV18基因的T细胞参与了OLP的发病。

系统性红斑狼疮患者外周血γδT细胞受体V区基因取用的初步研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） 患者外周血中γδＴ 细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ 区基因限制性取用。方法 应用ＰＣＲ特异性扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ 及ＤＩＧ 杂交等方法检测在ＳＬＥ患者和正常人外周血中ＴＣＲγ链、δ链Ｖ 区基因的表达。结果 与正常对照相比，发现ＳＬＥ 患者在Ｖγ基因、Ｖδ基因均表现出限制性取用，在７ 例ＳＬＥ患者中均未检测到ＶγⅡ、Ｖδ４ 、Ｖδ６ 。结论 提示ＳＬＥ患者ＴＣＲγδ链基因组的变化可能造成γδＴ 细胞的抗原识别受体表达异常而识别自身抗原，造成组织损伤。

老年人急性白血病T细胞受体VγI-Jγ基因重排分析

目的为研究老年人急性白血病分子生物学特点及临床意义。方法提取34例老年人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、9例老年人急性淋巴细胞白血病(ALL)及10名正常献血员DNA标本,应用PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排,对阳性的PCR产物进行SSCP分析。结果34例老年人ANLL中有16例(47.1%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,老年人ANLL TCRVγI-Jγ基因重排检测阳性率显著高于非老年人ANLL组(P<0.025)。9例老年人ALL中有7例(77.8%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,其中3例(33.3%)存在寡/亚克隆重排,老年人ALL寡/亚克隆重排阳性率显著高于非老年人ALL组(P<0.05)。10例正常献血员PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排均为阴性。TCRVγI-Jγ基因重排阳性老年人ANLL完全缓解率为25.0%(4/16),显著低于重排阴性老年人ANLL组(61.1%)(P<0.05)。结论应用PCR/SSCP方法分析老年人急性白血病TCRγ重排可作为疗效和预后判断的新指标。老年人急性白血病寡/亚克隆重排检测阳性率显著高于非老年人组可能是导致其疗效差的一个重要因素。

补肾解毒方联合程序性死亡受体配体-1抗体对HBV转基因小鼠T细胞免疫应答影响的研究

目的:观察补肾解毒方联合程序性死亡受体配体-1(PD-L1)抗体免疫,对HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T细胞(CTL)细胞免疫应答的影响。方法:HBV转基因小鼠,使用补肾解毒方灌胃,PD-L1腹腔注射,共两周。检测小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平、脾脏CD8+T细胞程序性死亡受体-1(PD-1)表达情况及脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞体外杀伤活性。结果:免疫两周后,小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ分泌水平与脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞体外杀伤活性,联合组明显高于PD-L1抗体组、补肾解毒方组及磷酸盐缓冲液(PBS)组,统计学分析差异均有显著性意义(P<0.01或0.05)。脾脏CD8+T细胞PD-1表达水平,联合组较PD-L1抗体组、补肾解毒方组及PBS组明显降低,差异均有显著性意义(P<0.01或0.05)。结论:补肾解毒方联合PD-L1抗体免疫,可显著提高HBV转基因小鼠体内HBV抗原特异性CTL活性,提高脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ水平,能降低脾脏CD8+T细胞表面PD-1分子的表达。这种联合方法有利于恢复慢性HBV感染时T细胞的免疫功能,增强其免疫应答水平。

职业铅接触工人外周血T细胞Vβ基因谱系明显缺失

目的:分析职业铅接触工人外周血中T细胞受体Vβ基因(TCR Vβ)谱系分布和克隆性特点,进一步了解铅接触后对T细胞免疫的影响。方法:利用RT-PCR分别检测6例职业铅接触工人和6例健康体检者的外周血中各TCR Vβ亚家族的表达情况;阳性产物经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度以了解T细胞克隆性。结果:所有健康体检者均可检测到24个Vβ亚家族并呈多克隆,而6例职业铅接触工人外周血TCR Vβ亚家族表现明显的限制性利用,仅能检测到1～7个,并且多数所检测到的Vβ亚家族T细胞呈现为寡克隆或双克隆增殖,发生克隆性改变的亚家族主要集中在Vβ1和Vβ16。结论:职业铅接触可能在不同程度上影响机体TCR Vβ谱系的利用和克隆性改变,可能与铅的免疫毒性有关。

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)基因谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1.1和Vβ8基因,且为单克隆,而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因,均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCR CDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。

大鼠T细胞受体Vβ5.2-HSP70和Vβ8.2-HSP70基因真核表达质粒的构建及表达

目的:构建含大鼠TCR Vβ5.2-HSP70和TCR Vβ8.2-HSP70基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达。方法:实验于2005-10/2006-09在首都医科大学免疫学系实验室完成。①以自主构建的重组表达载体pTARGET-TCR Vβ5.2和pTARGET-TCR Vβ8.2为模板,将结核杆菌HSP70的一段保守序列P111-125设计到引物中,通过PCR的方法得到TCR Vβ5.2-HSP70和TCR Vβ8.2-HSP70基因片段,将其插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70。②将BALB/c小鼠48只随机分为4组,pTARGET-TCR Vβ 5.2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ8.2-HSP70组和空质粒组肌注相应的质粒DNA100μg/次,PBS组注射PBS缓冲液100μL/次。共注射3次,每次间隔2周。于末次免疫后3d取注射部位的肌肉,用RT-PCR及免疫组化染色法检测TCR Vβ5.2/8.2-HSP70基因在注射部位的转录和表达。③将COS-7细胞分为pTARGET-TCR Vβ5.2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ8.2-HSP70组、空质粒组和未转染细胞组,进行相应质粒转染,24h后收集细胞,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达。结果:①TCR Vβ5.2/8.2-HSP70基因已被正确插入到pTARGET载体中。②pTARGET-TCR Vβ5.2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ8.2-HSP70组小鼠免疫处的肌肉组织RT-PCR检测显示,在500～600bp和400～500bp处出现特异的扩增带,分别与TCR Vβ5.2-HSP70和TCR Vβ8.2-HSP70基因片段的大小相符,而注射空质粒组和PBS组均未见此条带。③免疫组化结果显示转染重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70的COS-7细胞的胞质及胞膜都有明显的着染。结论:成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70,并在体内外检测到其转录和表达,为进一步进行TCR DNA疫苗治疗胶原诱导性关节炎的实验研究奠定了基础。

原发性血小板减少性紫癜患者T细胞受体Vβ亚家族基因的表达特点

目的:了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T细胞受体Vβ亚家族基因表达特点。方法:采用反转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测5例ITP患者外周血T细胞TCRVβ24个亚家族基因表达情况,10例正常人作为对照。结果:正常人外周血T细胞表达全部24个TCRVβ亚家族,而5例ITP患者外周血T细胞仅表达4-11个Vβ亚家族,主要为Vβ2(100%)和Vβ3(100%),其次为Vβ19(80%)和Vβ21(80%)部分。全部样本未检测出Vβ4、Vβ6、Vβ17、Vβ20、Vβ24亚家族表达。结论:ITP患者外周血T细胞TCRVβ基因谱系呈限制性表达,与其存在细胞免疫功能异常有关。

寻常型天疱疮患者外周血T细胞受体β链可变区CDR3基因克隆谱型分析

目的:探讨寻常型天疱疮(PV)患者外周血T细胞受体(TCR)互补决定区(CDR3)基因谱型变化,了解克隆扩增的T细胞与自身免疫性疾病的相互关系。方法:采用免疫扫描谱型分析技术,分析6例正常人外周血单个核细胞TCRβ链可变区(BV)CDR3谱型分布特征以及6例PV患者CDR3谱型变化情况。结果:6例正常人TCRBVCDR3谱型均符合正态分布,6例PV患者TCRBVCDR3谱型均出现多态性降低,BV亚家族单/寡克隆增生。结论:PV患者外周血TCR可变区β链CDR3谱型异常可能与PV发病有关。

直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞中T细胞受体基因谱型特征

目的 分析直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞 (tumor -infiltatinglymphocytes ,TIL)克隆的TCRβ基因谱型及CDR3区氨基酸序列 ,了解直肠癌TIL抗肿瘤细胞克隆的基因特征。方法 采用RT -PCR方法扩增直肠癌肿瘤组织、术前外周血和术后外周血T淋巴细胞TCTβ基因的 2 4个不同V基因片段 ,经过特殊的测序凝胶分离和银染色后 ,确定它们的TCRβ基因表达谱型。通过对PCR产物直接测序的方法 ,分析克隆性增殖的特征和CDR3区氨基酸序列。结果 直肠癌肿瘤组织TIL的TCRβ基因谱型中具有克隆性表达 ,表明直肠癌TIL是呈寡克隆性增生的淋巴细胞 ;来自 2例不同患者的肿瘤组织TIL中单克隆性表达的TCRβV11基因具有安全相同的DNA和氨基酸序列 ;其余四个寡克隆的CDR3区存在共同保守的氨基酸序列G/xGGN/xY(D)EQ ,这些序列可能直接接触直肠癌肿瘤组织相关抗原。结论 直肠癌肿瘤组织TIL细胞中存在特异性识别肿瘤相关抗原肽的T淋巴细胞克隆。