谷氨酰胺酶抑制剂CB-839介导T细胞效应抑制肺癌细胞中αKGA、Gln转化的作用机制

目的研究谷氨酰胺酶抑制剂CB-839(简称CB-839)介导T细胞效应抑制肺癌细胞α-酮戊二酸(αKGA)、谷氨酰胺(Gln)转化的作用机制。方法10只SPF级健康SD裸鼠均建立肺癌动物模型,分为模型组及抑制剂组,模型组裸鼠常规饲养;抑制剂组裸鼠皮下注射CD-839,测量两种肿瘤体积。人肺癌细胞A549购自上海匹拓公司,将肺癌细胞分为Ⅰ组(肺癌细胞常规培养)、Ⅱ组(肺癌细胞+0.25μmol/L浓度CB-839)、Ⅲ组(肺癌细胞+0.50μmol/L浓度CB-839)、Ⅳ组(肺癌细胞+1.00μmol/L浓度CB-839)。MTT法测A549细胞增殖,流式细胞仪测A549细胞凋亡及CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)水平,RT-qPCR测谷氨酸脱氢酶(GLUD1)mRNA、谷氨酰胺酶(GLS)mRNA水平,αKGA试剂盒测αKGA水平。结果培养24、48及72 h时Ⅰ组肺癌A549细胞吸光度(A值)高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05);培养24、48及72 h时Ⅳ组肺癌A549细胞A值与Ⅲ组比较,明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ组肺癌A549细胞凋亡率分别为(3.02±0.39)%、(4.72±0.52)%、(7.95±0.84)%及(13.22±1.28)%。与Ⅲ组相比,Ⅳ组肺癌A549细胞中CD80、CD86、MHCⅡ水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅳ组肺癌A549细胞中αKGA水平与Ⅲ组比较,明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。GLUD1 mRNA与GLS mRNA呈正相关(r=0.671,P<0.001),GLUD1 mRNA与αKGA呈正相关(r=0.708,P<0.001)。GLS mRNA与αKGA呈正相关(r=0.671,P<0.001)。结论CB-839可能通过介导T淋巴效应提高CD80、CD86、MHCⅡ水平,抑制αKGA及Gln相关基因转化,从而降低肺癌细胞活性,促进其凋亡,为今后肺癌的临床治疗及新药研发提供参考依据。

吉兰-巴雷综合征患者外周血记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)患者外周血记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群的变化及其临床意义。方法选取2018年6月至2020年12月于徐州医科大学附属医院神经内科住院的16例GBS患者作为研究组,并选取同期16名来院的健康体检者作为对照组。流式细胞术检测两组入选者的外周血T细胞亚群,包括CD4^(+)初始T细胞(naive T cells,TN)、CD4^(+)中央记忆性T细胞(central memory T cells,TCM)、CD4^(+)效应记忆性T细胞(effector memory T cells,TEM)和CD4^(+)终末分化效应记忆性T细胞(terminally differentiated effector memory T cells,TEMRA)及记忆性B细胞、浆母细胞的占比并分析其临床价值。结果与对照组相比,研究组患者的CD4^(+)TN及CD8^(+)TN均明显下降(P<0.05),CD4^(+)TEM及CD8^(+)TEM均明显升高(P<0.05),TCM及TEMRA在CD4和CD8上的比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,研究组记忆性B细胞比例明显升高(P<0.05),两组患者间浆母细胞占比比较,差异无统计学意义(P>0.05)。GBS患者外周血CD4^(+)TEM及CD8^(+)TEM占比与Hughes残疾评分、脑脊液蛋白、脑脊液免疫球蛋白G及记忆性B细胞占比均呈正相关(P<0.05)。结论GBS患者存在记忆性T细胞和记忆性B细胞亚群免疫紊乱,CD4^(+)TEM细胞、CD8^(+)TEM细胞及记忆性B细胞占比升高,这很可能是GBS发病过程中重要的外周免疫机制。

肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响

目的:研究肿瘤坏死因子-β(TNF-β)对重型再生障碍性贫血(SAA)患者效应T细胞(CD8+HLA-DR+T细胞)损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用。方法:以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β(终浓度分别为0、15、25、50 ng/ml)为实验组,并设空白对照组,孵育72小时后,通过流式细胞术以Annexin V检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN-γ水平。结果:空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为(49.85±20.33)%、(51.65±20.34)%、(55.94±20.19)%、(57.72±19.45)%,TNF-β终浓度为50 ng/ml组及25 ng/ml组均明显高于空白组和15 ng/ml组细胞凋亡比例(P<0.05),但空白组与15 ng/ml组,25 ng/ml组与50 ng/ml组细胞凋亡比例无显著差异(P>0.05)。空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47)ng/ml、(216.47±29.00)ng/ml、(212.15±13.19)ng/ml、(218.01±28.61)ng/ml,各组差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-β终浓度50 ng/ml组培养上清IFN-γ水平[(593.50±48.18)ng/ml]明显高于空白对照组[(544.85±69.77)ng/ml],15 ng/ml组[(567.38±74.51)ng/ml]、25 ng/ml组[(544.05±79.69)ng/ml](P<0.05)。结论:TNF-β能增强SAA患者效应T细胞诱导骨髓造血细胞凋亡,并呈浓度依赖性;高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用。

结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数鉴别儿童活动性结核病与潜伏结核感染的价值

目的通过γ干扰素释放试验探讨结核分枝杆菌特异性效应T细胞斑点数(简称T细胞斑点数)鉴别儿童活动性结核病(TB)与潜伏结核感染(LTBI)的价值。方法纳入T细胞斑点试验(T.SPOT.TB)阳性且未经过抗结核治疗的93例活动性TB(重症TB27例,非重症TB66例)和47例LTBI儿童,根据T.SPOT.TB结果对T细胞斑点数进行比较分析。结果活动性TB组T细胞斑点数中位数84(6～710)显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;非重症TB患儿的T细胞斑点数中位数为99(6～710),显著高于重症TB的44(6～268),P=0.011,也显著高于LTBI组17(6～316),P=0.000;重症TB儿童T细胞斑点数中位数高于LTBI组儿童(44vs17),但差异无统计学意义(P=0.084),T细胞斑点数分布在活动性TB、重症TB、非重症TB和LTBI之间均有较大范围重叠。受试者工作特征曲线分析显示以T细胞斑点数43.5作为区分活动性TB与LTBI的最佳界值,其敏感度与特异度分别为69.9%和70.2%。结论 T细胞斑点数在活动性TB尤其是非重症TB患儿显著高于LTBI儿童;T细胞斑点数的数量可反映体内的结核分枝杆菌负荷,但不能用于区分儿童活动性TB与LTBI。

KDEL修饰的HSV-2CD8^+T细胞表位促进CTL效应的研究

目的:研究赖氨酸天冬氨酸谷氨酸亮氨酸(Lys-Asp-GluLeu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype2,HSV2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte,CTL)效应。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,用各抗原肽免疫C57BL/6小鼠,采用3HTdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应、标准4h51Cr释放试验检测CD8+T细胞特异性CTL效应,观察HSV2CD8+T细胞表位(SSIEFARL,S1)、KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL-KDEL,S1-KDEL)、4拷贝串联的CTL表位[(SSIEFARL)4,S4]及KDEL修饰的串联CTL表位[(SSIEFARL)4KDEL,S4-KDEL]的特异性细胞免疫应答。结果:3HTdR掺入试验中,S4组和S4KDEL组cpm值显著高于对照组和S1组、S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组的cpm值显著高于S4组(P<0.05);S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,cmp值亦无显著性差异(P>0.05)。以S1致敏的EL4细胞为靶细胞的杀伤实验中,S4和S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于对照组、S1组及S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于S4组(P<0.05),S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,差异亦无显著性(P>0.05);以EL4细胞为靶细胞的实验中,实验组的杀伤率均在10%以下,与对照组?

槲皮素调节T淋巴细胞效应对肺纤维化大鼠气道反应的作用及机制

目的:探讨槲皮素调节T淋巴细胞效应对肺纤维化大鼠气道反应的作用机制。方法:将大鼠分为对照组、模型组、槲皮素组,放射免疫测定法检测大鼠肺纤维化指标羟脯氨酸(HYP)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)含量,ELISA检测血清中白介素17(IL-17)、白介素4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化,观察气道反应及肺组织病理学变化。结果:与对照组比较,模型组HYP、HA、LN均显著增加,肺出现组织纤维化;与模型组比较,槲皮素组大鼠HYP、HA、LN含量明显下降。模型组中IL-17、IL-4表达较对照组升高,IFN-γ表达较对照组降低;槲皮素组血清中IL-17、IL-4较模型组明显下降,IFN-γ表达较模型组明显升高。与对照组比较,模型组大鼠CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平明显降低,CD8~+水平升高;槲皮素组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平较模型组升高,且CD8~+水平较模型组明显下降。在同等剂量mACh激发的气道反应性检测中,模型组大鼠的压力峰值-时间指数(APTI)值显著高于对照组;与模型组比较,槲皮素组APTI值明显降低。模型组肺泡结构紊乱,多数肺泡出现闭锁、裂隙、萎陷,部分融合成大肺泡,肺泡腔及间质内有炎性细胞渗出,肺泡间隔明显增宽增厚。槲皮素组较模型组肺泡腔炎症细胞浸润减轻,肺间隔略微增宽,部分肺泡融合,结构紊乱。结论:槲皮素可通过调节T淋巴细胞效应改善肺纤维化大鼠的高气道反应,进而对肺纤维化气道具有很好的治疗效果。

吡格列酮对尿毒症 ApoE－／－小鼠调节性和效应T 细胞平衡的影响

目的:观察吡格列酮对体外培养的有或无斑块特异性抗原氧化低密度脂蛋白(ox LDL)刺激的尿毒症Apo E-/-小鼠调节性和效应T细胞(Treg/Teff)水平和功能相关因子的影响及可能机制。方法:通过两步外科手术法建立尿毒症Apo E-/-小鼠的动物模型,以不同浓度吡格列酮(2μmol/L和20μmol/L)及PPARγ拮抗剂GW9662(5μmol/L)对有或无ox LDL(2 mg/L)刺激的尿毒症模型鼠脾细胞作用12 h后,流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg及IFN-γ+CD4+Teff细胞水平,实时荧光定量PCR检测Foxp3及IFNγ的mRNA表达。结果:ox LDL体外诱导尿毒症Apo E-/-小鼠脾细胞Treg/Teff失衡。吡格列酮上调ox LDL抑制下的Treg及Foxp3的表达,此作用不能被GW9662拮抗;下调有或无ox LDL刺激下Teff及IFNγ的表达,此作用可被GW9662拮抗。结论:oxLDL体外诱导尿毒症模型鼠Treg/Teff失衡,吡格列酮通过PPARγ非依赖/依赖机制调整Treg/Teff失衡。

Tregs调节小鼠肝癌局部引流淋巴结内免疫效应细胞的功能

目的:探讨肿瘤引流淋巴结(TDLNs)内调节性T细胞(Tregs)对局部免疫效应细胞的调节作用。方法:建立小鼠肝癌TDLNs模型,通过免疫组织化学染色和流式细胞仪检测TDLNs内Foxp3+Tregs和CD4+及CD8+T细胞的数量。实时定量PCR测定Foxp3mRNA表达水平。应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测TDLNs内CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能。结果:TDLNs内Tregs和效应性T细胞均明显扩增,Tregs弥散分布于CD8+T细胞聚居区。TDLNs内Foxp3mRNA表达水平显著高于同一接种肿瘤小鼠腹股沟淋巴结(P<0.01)和脾脏(P<0.01)。Tregs趋向于在TDLNs内聚集,而非其它外周淋巴结位点。荷瘤小鼠的脾脏Foxp3mRNA表达明显高于注射LPS小鼠脾脏。Tregs抑制TDLNs内已初始化的CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能,经anti-CD3刺激激活后,CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能可恢复。结论:TDLNs内Tregs通过调控CD8+T细胞功能而发挥重要作用,清除Tregs是发挥特异性肿瘤免疫治疗的关键。

雷帕霉素对诱导nave小鼠效应性T细胞转化为调节性T细胞的影响

目的研究雷帕霉素对诱导naive小鼠效应性T细胞（Teff）体外转化为调节性T细胞（Treg）的影响。方法取6-8周龄C57BL/6小鼠的脾及淋巴结,分离提纯叉头蛋白3（FoxP3）阴性的Teff,分为与成熟树突状细胞（mDC）、B细胞和抗CD3抗体（Anti-CD3）共培养3组,前两组6 d后收获细胞,Anti-CD3组4 d后收获细胞。每组设对照组与实验组,对照组未加入雷帕霉素,实验组加入雷帕霉素,使其浓度分别为1、10、50、100 nmol/L,流式细胞仪检测收获细胞中FoxP3阳性的Treg比率。结果FoxP3阳性的Treg细胞比率：在mDC组中对照组为0.01%,实验组分别为0.39%、0.47%、0.34%、0.26%;在B细胞组中对照组为0.01%,实验组分别为5.56%、5.89%、7.15%、4.72%;在Anti-CD3组中对照组为0.93%,实验组分别为1.35%、1.07%、1.02%、1.19%。mDC组及Anti-CD3组各实验组与对照组相比差异无显著性,B细胞组中各实验组与对照组相比差异具有显著性（P〈0.01）。结论在体外以B细胞作为抗原呈递细胞,雷帕霉素能够诱导naive小鼠Teff转化为FoxP3阳性的Treg。

肺泡灌洗液效应T细胞斑点试验与RNA恒温扩增实时荧光检测对涂阴肺结核的诊断价值比较

目的比较肺泡灌洗液效应T细胞斑点试验(T-SPOT)与RNA恒温扩增实时荧光检测(SAT-TB)对涂阴肺结核的诊断价值。方法选取2019年1月至12月江西省胸科医院收治的80例疑似肺结核患者作为研究对象,按照痰涂片检验结果将其分为涂阳组(35例)与涂阴组(45例)。对涂阴组进行分子生物学检查,诊断为肺结核35例,诊断为非结核感染10例。使用结核感染T-SPOT检测涂阳组、涂阴组患者的肺泡灌洗液内效应T细胞,分析阳性率;收集涂阴组患者肺泡灌洗液,使用结核分枝杆菌SAT-TB检测肺泡灌洗液,与T-SPOT检测结果比较,分析肺泡灌洗液效应T细胞检测的诊断价值。结果T-SPOT检测下,涂阳组的阳性率(97.14%)高于涂阴组(75.56%),差异有统计学意义(P<0.05)。对涂阴组检测时,T-SPOT检测涂阴肺结核的阳性率(94.29%)高于SAT-TB检测(77.14%),差异有统计学意义(P<0.05)。T-SPOT检测的灵敏度(94.29%)、阴性预测值(NPV)(81.82%)均高于SAT-TB检测(77.14%、52.94%),差异有统计学意义(P<0.05)。两种检测方式的特异度均为90.00%。结论在对涂阴肺结核快速检测时,肺泡灌洗液T-SPOT的灵敏度较高,应用价值显著。

TF3-H4对CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD4^+CD25^-效应性T细胞早期活化的影响

目的观察1',2',3',7'-四氢茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(TF3-H4)对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的影响,分析TF3-H4对两群功能相反的CD4+T细胞的作用。方法免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞,加入ConA或PDB,和TF3-H4共同孵育12 h后收集细胞,流式细胞仪分析细胞表面早期活化标志CD69的表达。结果在ConA和PDB的作用下,两群细胞早期活化标志CD69的表达均升高。TF3-H4(20 mg.L-1)不能抑制PKC激动剂PDB激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,却能抑制ConA激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69表达;同时,TF3-H4也能明显抑制ConA激活的CD4+CD25+调节性T细胞的CD69表达。结论茶黄素衍生物TF3-H4可能经由TCR活化途径的上游抑制CD4+CD25-效应性T细胞活化;TF3-H4对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的抑制作用,可能是该类化合物发挥抗炎、抗肿瘤作用的机制之一。

活动期强直性脊柱炎患者外周血效应性T细胞的比例增加且程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)水平降低

目的分析强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+CD25-效应性T细胞(Teff)和CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的比例以及两群细胞表面程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达情况。方法流式细胞术检测49例AS患者和31例健康对照者外周血中Teff和Treg的比例以及PD-L1在这两种细胞表面的表达水平。结果与健康对照组相比,活动期AS患者外周血中Teff的比例显著增加,Treg比例无明显变化;活动期AS患者外周血PD-L1+Teff的比例显著降低,且低于稳定期AS患者;活动期AS患者外周血Teff膜表面PD-L1的相对表达量也显著低于稳定期AS患者和健康对照组;AS患者外周血PD-L1+Treg的比例和Treg膜表面PD-L1的相对水平均显著低于健康对照组。结论活动期AS患者外周血中Teff比例增加,PD-L1水平降低。

调节性T细胞通过膜结合转化生长因子β1影响效应性T细胞凋亡

目的观察CD4＋CD25＋T细胞（效应性T细胞，Teff）凋亡情况，进-步探讨调节性T细胞（Treg）对Teff凋亡的影响及其作用机制。方法免疫磁珠法分选Balb／c小鼠脾脏的Tregs与Teff，流式细胞仪检测Tregs与抗CD3／CD28抗体刺激的Treg膜表面转化生长因子（TGF）-β1的表达、PCR技术检测其基因表达水平。将Treg与Teff共培养，然后采用抗TGF—β抗体拮抗，观察Tefr的凋亡率、线粒体膜电位变化以及胞内Smad2、磷酸化Smad2（P—Smad2）、Bim、Bcl-2蛋白表达水平。结果抗CD3／CD28抗体刺激后TregTGF—β1＋及其基因表达均明显上调（P均〈0．01）；与Treg共培养的Teff凋亡率升高（P〈0．01）、线粒体膜电位降低（P〈0．01）；胞内P—Smad2（P〈0．01）、Bim（P〈0．05）蛋白表达量增加、Bcl-2蛋白表达量降低（P〈0．01）。加入抗TGF—β1抗体后Teff凋亡率显著降低（P〈0．01）、线粒体膜电位升高（P〈0．01）、胞内P-Smad2（P〈0．01）、Bim（P〈0．05）蛋白表达水平降低、Bcl-2蛋白表达量则升高（P〈0．01），Smad2蛋白表达水平在三组之间均未见明显差异（P〉0．05）。结论调节性T细胞可通过膜结合型TGF-β1促进效应性T细胞的凋亡。

胸水γ干扰素特异性效应T细胞检测对结核性胸膜炎诊断的价值评估

目的探讨胸水中γ-干扰素特异性效应T细胞检测(T-SPOT.TB)对结核性胸膜炎的诊断价值。方法实验组:结核性胸膜炎患者35例,对照组:非结核性胸膜炎患者40例,分别检测其外周血及胸水特异性效应T细胞释放的γ干扰素,通过绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),比较其特异度、敏感度。结果胸水T-SPOT.TB试验对于结核性胸膜炎的诊断效果明显高于外周血,特异性,敏感性达90%以上。其ROC曲线下面积大于90%。结论胸水γ-干扰素特异性效应T细胞检测对于结核性胸膜炎的诊断有着较高的敏感性和特异性,有助于结核性胸膜炎的早期诊断和鉴别诊断。

效应性T细胞促进MN9D细胞的凋亡

目的:利用多巴胺合成细胞系MN9D,观察活化的效应性T(effector T,Teff)细胞对MN9D细胞活力和凋亡的影响,探讨Teff细胞对MN9D细胞的损伤作用。方法:免疫磁珠分选获得Teff细胞,经体外活化后,与MN9D细胞株共培养,然后用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测MN9D细胞的活性;TUNEL和Hoechst染色观察MN9D细胞的凋亡及细胞数目的变化;Western Blot法检测MN9D细胞中活化的caspase-3和caspase-9的表达。结果 :经体外活化的Teff细胞与MN9D细胞共培养后,MN9D细胞的活性明显降低,MN9D细胞的数目显著降低、凋亡率明显增加;且MN9D细胞中促凋亡酶caspase-3和caspase-9的活化水平升高。结论:活化的Teff细胞促进了MN9D细胞的凋亡,具有损伤作用。

经kinectin融合蛋白刺激的人B细胞诱导效应T细胞对肝癌细胞的杀伤

目的:探讨经人动力素(kinectin)融合蛋白刺激的人外周血B细胞诱导效应T细胞杀伤肝癌细胞的效果.方法:取健康人外周血,分离出单个核细胞,加B细胞刺激因子及kinectin麦芽糖融合蛋白进行体外培养,尔后用尼龙毛柱分离T细胞,将其与肝癌细胞株7404混合培养.用乳酸脱氢酶法检测杀伤肝癌细胞的活性.结果:T细胞对肝癌细胞的杀伤率:空白对照组:3.40%±0.27%;实验组:38.48%±2.64%;阴性对照组:13.03%±2.38%.经统计软件分析,实验组杀伤率与其他组有明显差异.结论:经kinectin融合蛋白刺激的人外周血B细胞诱导的效应T细胞在体外对肝癌细胞株7404有杀伤的作用.

HPV感染对口咽癌患者癌组织免疫微环境及T细胞效应分子表达水平和存活时间的影响

目的 分析人乳头瘤病毒(HPV)感染对口咽癌患者癌组织免疫微环境、T细胞效应分子表达水平和存活时间的影响。方法 选择2007年1月-2017年1月淄博市第一医院收治的98例口咽癌患者为研究对象,检测患者HPV感染情况,比较HPV阳性和HPV阴性口咽癌患者癌组织免疫微环境、T细胞效应分子表达水平,并分析影响口咽癌患者生存预后的危险因素。结果 98例口咽癌患者肿瘤标本检测结果显示,HPV阳性26例,感染率为26.53%,HPV阳性组癌组织CD_(8)^(+) T细胞亚群占比高于HPV阴性组(P<0.05),HPV阳性组患者T细胞效应分子干扰素-γ(IFN-γ)、颗粒酶B(Granzyme B)、白细胞介素-2(IL-2)相对表达量高于HPV阴性组患者(P<0.05),多因素Cox风险回归模型分析结果,HPV感染是影响口咽癌患者生存预后的因素,HPV阴性患者死亡风险增加17.110倍。结论 HPV感染是影响口咽癌患者生存预后的重要因素,HPV阴性患者死亡风险较HPV阳性患者显著提高,其机制可能与HPV阳性患者CD_(8)^(+) T细胞及效应分子IFN-γ、Granzyme B表达水平上升有关,提高免疫细胞浸润可能有利于口咽癌患者治疗效果。

大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应

目的:建立分离、纯化和培养大鼠肝脏Kupffer细胞(KC)的方法,并观察KC对同种反应性T细胞增殖的影响。方法:采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度离心技术,进行肝移植受体大鼠肝脏KC分离、纯化和培养。在体外实验中进一步观察KC在MLR(混合淋巴细胞反应)体系中对同种反应性T细胞增殖程度的影响。结果:KC得率为(1.1±0.2)×107/肝,平均存活率为(93.5±1.8)%,纯度≥90%,ED-2(+)。培养24h可见大量细胞伸展生长,呈现典型的星形或多边形。在MLR体系中加入未经辐照的KC后,反映T细胞增殖程度的每分钟脉冲数值明显降低,且接受联合免疫治疗并长期存活的D、E两组所获得的KC对T细胞增殖有着更为明显的抑制作用。结论:本实验成功建立了分离、纯化和培养大鼠KC的方法。KC对同种反应性T细胞增殖具有抑制作用,尤其从接受联合免疫治疗后长期存活受体大鼠所获得的KC抑制作用更为明显。

效应性T细胞分化异质性及调控

初始型CD4+T细胞和CD8+T细胞在宿主体内经过抗原刺激后,出现克隆扩增,形成高频率的抗原特异性T细胞,并迅速拥有效应功能.这种T细胞数目和功能的质、量的变化,伴随抗体反应,形成了免疫记忆,构成了针对感染性疾病及其它有关疾病的基本保护性免疫.疫苗对减少感染引起的发病率和死亡率起了非常重要的作用,其终极目标是发展长效的保护性免疫.

结核分枝杆菌效应T细胞斑点试验在临床快速诊断结核病中的应用研究

目的探讨结核分枝杆菌效应T细胞斑点试验(ELISPOT-TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值。方法利用ELISPOT-TB方法检测外周血中结核分枝杆菌效应T细胞的频率,同时与涂片抗酸染色及BACT/ALERT3D结核菌培养做比对。结果 200例结核病患者中,165例ELISPOT-TB阳性,提示方法敏感度为82.5%(165/200),显著高于其他方法。70例非结核其他呼吸道疾病组中有10例阳性,80名健康对照组中有10例阳性,方法的特异度为86.7%(130/150)。结论 ELISPOT-TB方法的敏感度和特异度均很高,在结核病的快速诊断中,尤其是菌阴患者的诊断中,有重要的临床价值。