单核细胞趋化蛋白-1和调节活化正常T细胞表达分泌因子与实验性变态反应性神经炎的关系

目的研究趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达分泌因子(RANTES)与实验性变态反应性神经炎(EAN)发病的关系,探讨EAN的免疫发病机制.方法给Wistar大鼠足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆建立EAN模型,用免疫组化技术检测EAN大鼠发病不同时间坐骨神经MCP-1和RANTES的表达.结果EAN组的MCP-1表达第9 d达高峰,随后逐渐下降,第15 d、21 d、28 dMCP-1的表达与前一时间点比较差异均有显著性(均P＜0.01);第9 d、15 d、21 d MCP-1表达均显著高于对照组(均P＜0.001).EAN组第9 d、15 d、21d RANTES表达均显著高于对照组(P＜0.01～0.001),第15 d表达最高.结论MCP-1和RANTES在EAN的发病过程中发挥了重要作用,MCP-1可能起始动作用,RANTES可能与EAN的病情进展有关.

血清自分泌运动因子、甲壳质酶蛋白40与妊娠期肝内胆汁淤积症患者辅助性T细胞17/调节性T细胞失衡和妊娠结局的关系研究

目的探讨血清自分泌运动因子(ATX)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)失衡和妊娠结局的关系。方法选取2017年8月至2022年8月宝鸡市妇幼保健院收治的ICP患者178例作为观察组,根据患者病情严重程度分为轻度组(n=126)和重度组(n=52);且患者根据妊娠结局分为正常妊娠组(n=128)和不良妊娠组(n=50)。另选同期健康孕妇80例作为对照组。检测血清ATX、YKL-40水平并计算Th17/Treg比值。采用Pearson相关性分析血清ATX、YKL-40与Th17/Treg的关系。采用多因素Logistic回归分析ICP患者不良妊娠结局的危险因素。结果重度组ATX、YKL-40、Th17、Th17/Treg高于对照组和轻度组,且轻度组高于对照组(P<0.05);重度组Treg水平低于对照组和轻度组,且轻度组低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,ATX、YKL-40与Th17/Treg均呈现显著正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,高Th17/Treg、高YKL40、高ATX、高TBA、高TBil为ICP患者不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。结论血清ATX、YKL-40与ICP患者Th17/Treg失衡相关,高TBil、高TBA、高ATX、高YKL40、高Th17/Treg为ICP患者不良妊娠结局的独立危险因素。

调节激活正常T细胞表达及分泌因子和单核细胞趋化蛋白-1在急性冠状动脉综合征中的作用及诊断价值

目的探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP1)、调节激活正常T细胞表达及分泌因子(RANTES)在急性冠状动脉综合征(ACS)中的作用及诊断价值。方法对临床确诊的48例ACS患者及32名正常对照采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清MCP1和RANTES的含量。结果ACS患者组血清RANTES的含量[(37.97±24.89)ng/ml]明显高于正常对照组[(29.28±15.68)ng/ml,P<0.05]。ACS患者血清MCP1含量为(175.28±144.82)pg/ml,正常对照组为(199.08±112.66)pg/ml,两组间差异无显著性(P>0.05)。结论MCP1及RANTES都不是理想的心肌损伤标志物。

颅脑外伤患者血清调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子、神经元特异性烯醇化酶和硫氧还蛋白1的变化及意义

目的 观察颅脑外伤(TBI)患者血清调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、硫氧还蛋白1(Trx1)变化并分析其意义。方法 2018年2月至2020年2月我院收治的重型TBI患者162例(观察组),记录其入院格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分,住院期间主要不良事件发生情况,患者30 d存活情况。另选择同期体检健康者56例作为对照组。测定两组血清RANTES、NSE、Trx1水平,Pearson相关性分析法分析血清RANTES、NSE、Trx1与GCS评分的关系;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清RANTES、NSE、Trx1对TBI预后的预测效能。结果 观察组血清RANTES、NSE高于对照组,Trx1水平低于对照组(P<0.05);观察组入院GCS评分为(5.07±1.23)分,与血清RANTES、NSE呈负相关(r=-0.306、-0.344,P<0.05),与Trx1水平呈正相关(r=0.359,P<0.05)。发生不良事件的患者血清RANTES、NSE高于未发生者,Trx1低于未发生者(P<0.05);三者联合对TBI患者预后预测的曲线下面积为0.906,敏感度为86.25%,特异度为81.74%。结论 TBI患者早期血清RANTES、NSE水平增加,Trx1水平明显减少。血清RANTES、NSE、Trx1水平与TBI病情有关。三者联合检测能较好的预测TBI患者短期预后。

人血小板/T细胞活化抗原PTA1/Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

目的：获得人血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区与人ＩｇＧ１Ｆｃ段融合蛋白，为ＰＴＡ１配体的鉴定及其功能的研究提供有力的工具。方法：针对人ＰＴＡ１ｃＤＮＡ序列设计３段引物，通过反转录、半套式ＰＣＲ方法从活化Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出ＰＴＡ１胞膜外区基因片段，并将其克隆入融合蛋白表达载体ｐＩＧ中，通过酶切、ＰＣＲ及序列测定鉴定重组表达载体。重组载体通过ＤＥＡＥｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，经夹心ＥＬＩＳＡ及亲和层析、ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定融合蛋白的表达及免疫学活性。结果：经序列测定后证实重组表达载体含有正确的ＰＴＡ１胞膜外区序列及剪接供体序列，转染ＣＯＳ７细胞后，通过亲和层析纯化证实融合蛋白的Ｍｒ为８３０００，并能被抗ＰＴＡ１胞膜外区单抗及抗人ＩｇＧＦｃ的单抗同时识别。结论：ｐＰＴＡ１／Ｉｇ融合表达载体的构建及表达成功，为ＰＴＡ１的功能及配体（ＰＴＡ１Ｌ）的研究打下了良好的基础。

白血病抑制因子及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子对血流感染脓毒症患者的诊断及预后评估价值

目的研究血清白血病抑制因子(LIF)及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)对血流感染(BSI)脓毒症患者的诊断及预后评估价值。方法选择2021年1月~2022年7月期间我科收治的脓毒症患者,检测抗生素治疗前的血清LIF、RANTES水平;根据血培养结果分为BSI组和非BSI组,BSI组包括革兰阳性(G^(+))菌感染和革兰阴性(G^(-))菌感染患者,评估患者的28 d预后。结果BSI组血清LIF和RANTES水平高于非BSI组(P<0.05);BSI组中G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于G^(+)患者(P<0.05);BSI组中死亡的G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于存活的G^(-)患者(P<0.05),BSI组中死亡的G^(+)患者血清LIF和RANTES水平与存活的G^(+)患者比较差异无统计学意义(P>0.05);血清LIF和RANTES对脓毒症患者BSI、BSI脓毒症患者G^(-)菌感染具有诊断价值,对G^(-)菌感染导致BSI脓毒症的预后具有评估价值。结论血清LIF和RANTES是诊断BSI脓毒症、评估细菌感染类型以及G^(-)菌感染导致BSI脓毒症预后的潜在标志物。

伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白类似基因的原核表达和抗体制备

目的克隆伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白(PbTIP)类似基因,原核表达PbTIP重组蛋白,并制备其抗血清。方法在GenBank中检索PbTIP类似基因序列,设计特异性引物,从伯氏疟原虫ANKA株扩增获得该基因cDNA片段,克隆入原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)鉴定重组蛋白。用重组蛋白GST-PbTIP包涵体免疫BALB/c小鼠,以间接荧光抗体试验(IFAT)和Western blotting鉴定产生的抗体。结果获得了纯化的重组蛋白GST-PbTIP及其相应抗体,该抗体可以识别相对分子质量(Mr)约为60000的伯氏疟原虫感染红细胞内的PbTIP蛋白。结论获得PbTIP重组蛋白及其相应抗体。

丙种球蛋白对神经系统副肿瘤综合征患者外周血淋巴细胞亚群、调节性及活化T细胞分布的影响

目的探讨丙种球蛋白对神经系统副肿瘤综合征(PNS)的治疗作用及其对外周血淋巴细胞亚群,调节性T细胞和活化T细胞分布的影响。方法选择2013年1月—2017年10月本院收治的PNS患者11例作为研究对象,观察治疗后疗效以及治疗前后外周血淋巴细胞亚群,调节性T细胞和活化T细胞的分布情况。结果总有效率为81.8%。相比较对照组,PNS组治疗前,CD3^+、CD4^+T细胞亚群比例明显降低;CD3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞明显降低;总CD3^+HLA-DR^+以及CD3^+CD4^+HLA-DR^+活化T细胞明显升高(均P<0.05)。治疗后,PNS组CD4^+T细胞亚群比例明显升高;CD3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞明显升高;总CD3^+HLA-DR^+以及CD3^+CD4^+HLA-DR^+活化T细胞明显降低(均P<0.05)。结论 PNS患者外周血CD4^+T细胞和调节性T细胞减少,同时活化T细胞增多可减少体内免疫系统负向调节,促进免疫细胞活化,参与PNS的发生。丙种球蛋白治疗治疗可以显著纠正这种免疫紊乱,是一种有效的治疗方法。

受激活调节正常T细胞表达和分泌因子及其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾的表达与定位

目的：观察受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTEs）与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾中的表达和定位。方法：采用免疫组织化学法检测成年大鼠附睾上皮RANTES及其受体的细胞定位，免疫荧光双标染色分别显示RANTES与CCR1、CCR5的细胞共定位情况。RT-PCR检测RANTES及其受体mRNA表达水平，免疫印迹检测RAN—TES及其受体的蛋白量。结果：RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾各段呈特异性表达。免疫印迹在大鼠附睾各段检测到RANTES及其受体CCR1、CCR5特异性蛋白条带。RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾上皮主要表达于基细胞。双重免疫荧光显示RANTES与CCR1、CCR5在附睾管基细胞共存。结论：RANTES可能通过自分泌或（和）旁分泌方式在大鼠附睾基细胞功能活动方面起重要作用。

小鼠感染大肠杆菌O127∶H6肠炎模型的建立及受激活调节正常T细胞表达和分泌活性因子的表达

目的 探讨大肠杆菌O127∶H6 （Escherichia coli O127∶H6）感染BALB/c小鼠建立肠炎模型及其受激活调节正常T细胞表达和分泌活性因子（RANTES）与炎症反应的相关性.方法 通过不同剂量大肠杆菌O127∶H6灌胃的方式,建立肠炎小鼠模型（实验组）,灌胃生理盐水为对照组.取小鼠空肠标本,石蜡包埋,HE染色,观察病理变化;采用荧光定量PCR的方法,测定不同剂量组感染小鼠空肠组织的RANTES表达情况.结果 成功建立了肠炎性小鼠模型,实验组与对照组比较,空肠有明显的炎性病理变化;荧光定量PCR结果表明实验组RANTES表达量明显高于对照组.结论 通过灌胃大肠杆菌O127∶H6的方式可以建立肠炎小鼠模型,其空肠部位具有明显的病理变化;RANTES表达量的变化可以作为评价小鼠肠炎的指标之一.

NF-κB及调节活化正常T细胞表达和趋化因子在升主动脉瘤形成中的表达

目的探讨激活的NF-κB及调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)的表达及其在升主动脉瘤形成中的作用。方法4周龄雌性Wistar大鼠40只,随机分成升主动脉瘤组(20只)和正常对照组(20只)。制作升主动脉瘤动物模型,术后3个月取材,免疫组织化学方法分析NF-κB、RANTES的蛋白表达,RT-PCR方法检测其mRNA的表达。结果模型组动脉壁NF-κB和RANTES表达明显升高,而正常动脉壁中未见或极少见NF-κB和RANTES表达。RT-PCR显示,模型组的动脉瘤内NF-κB和RANTES mRNA表达增强,两者呈显著性正相关。结论NF-κB和RANTES在动脉瘤中表达强于对照组,NF-κB和RANTES在升主动脉瘤病变的发生发展过程中可能起重要作用。

老年2型糖尿病周围神经病变与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子、C-X-C基序趋化因子配体12、C-C基序趋化因子配体2水平的相关性

目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)、C-C基序趋化因子配体2(CCL2)的关系。方法选取2019年3月~2021年10月河北省邯郸市人民医院确诊的老年T2DM患者181例,根据是否并发DPN将其分为单纯T2DM组(89例)和DPN组(92例)。收集所有患者一般临床资料、实验室检查指标、血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平及感觉神经传导速度和运动神经传导速度并分组进行比较。采用Pearson相关分析评估DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与一般临床指标及神经传导速度的相关性;采用多因素logistic回归分析评估DPN发病的影响因素。结果DPN组血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)水平及T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变患者比例均显著高于单纯T2DM组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均显著低于单纯T2DM组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变、HbA1c、TC均呈正相关,与HDL-C、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,RANTES、CXCL12、CCL2水平高、T2DM病程长是T2DM患者并发DPN的独立危险因素(P<0.05)。结论DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平升高,且与神经传导速度呈负相关。

调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子与肾脏疾病

调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)是β-趋化性细胞因子家族,在肾脏炎症发展过程中可趋化炎症细胞浸润,还可激活淋巴细胞,扩大炎症。在肾小球肾病、移植后肾病、糖尿病肾病中均发现RANTES表达增高,且其及其受体基因多态性也与肾脏疾病发生有密切关系。阻断RANTES信号途径为治疗肾脏疾病提供了一个新的前景。

正常T细胞表达和分泌增强调节因子在体外培养的人子宫内膜上皮细胞中的表达

目的：研究Th1型和Th2型细胞因子在体外培养的人子宫内膜上皮细胞中对正常T细胞表达和分泌增强调节因子(RANTES)产生的调节影响。方法:用Th1型细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ]以及Th2型细胞因子[白细胞介素(IL)-4和IL-13]刺激体外培养的人子宫内膜上皮细胞24h后,用酶联免疫测定法检测上清液中RANTES的浓度。结果：IFN-γ诱导的人子宫内膜上皮细胞产生RANTES,而TNF-α则无此影响。IL-4和IL-13也都同样诱导RANTES的产生。结论：Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4和IL-13都诱导RANTES的产生,提示不论是细胞免疫还是体液免疫反应RAN-TES都参与,可进一步推测在以细胞免疫反应为主的妇女月经、盆腔感染、受精卵着床,以及以体液免疫反应为主的妊娠、妊娠维持过程中,RANTES是必不可少的一种化学因子。

结核分枝杆菌38kD蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的分泌性表达

目的:构建含结核分枝杆菌38kD蛋白基因的真核表达载体并转染HEK293T细胞,高效表达分泌性38kD蛋白。方法:设计合成的结核分枝杆菌38kD基因被克隆到T载体,然后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0,经酶切鉴定正确后,PEI转染法导入293T细胞,换不含血清的DMEM培养基培养3 d后收集细胞及上清,采用Western印迹检测38kD蛋白的表达。结果:酶切结果显示,获得正确的含38kD基因的重组表达载体;Western印迹结果显示表达载体导入293T细胞中后能在细胞及上清中检测到38kD蛋白表达。结论:构建了含重组结核分枝杆菌38kD蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.0-38kD,该载体可在哺乳动物细胞HEK293T中高效分泌性表达38kD蛋白,为结核病诊断试剂盒研发奠定了基础。

外源性p38调节活化蛋白激酶细胞内定位研究

目的研究外源性调节活化蛋白激酶(PRAK)在细胞内的定位。方法将克隆在pET-14b上的PRAK亚克隆到绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,随后转染Hela细胞,并通过荧光显微镜观察外源性PRAK导入真核细胞后在细胞内的分布。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在Hela细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明EGFP-PRAK主要分布在细胞核中。结论成功构建了PRAK绿色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,通过荧光显微镜观察外源性PRAK主要分布在细胞核内。

促Treg细胞生成及活化重组分子的构建与表达

本研究旨在构建促Treg细胞生成及活化的重组分子的原核表达载体,并鉴定其表达。应用RT-PCR获得人TGF-β1及HIV被膜蛋白gp120的C2-C4区基因并将其克隆至pCR2.1 T载体,酶切制备人TGF-β1及C2-C4区DNA片段,通过PCR定向连接两目的片段至原核表达载体pET-28a,生成pET-28a/C2-C4-Linker-hTGF-β1,转染E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用0.1 mmol/L的IPTG诱导蛋白表达,以Western blot方法鉴定表达结果。结果表明,成功扩增人TGF-β1及C2-C4区基因并分别克隆入pCR2.1-T载体,经亚克隆构建了重组蛋白的原核表达质粒pET-28a/C2-C4-Linker-hTGF-β1,并转染E.coli BL21(DE3)感受态细胞获得工程菌株,通过IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式获得表达。结论:本研究成功构建促Treg细胞生成及活化的重组分子的原核表达载体,并获得原核表达。

静脉应用人血丙种球蛋白对重症感染患儿淋巴细胞亚群免疫调节作用

目的研究静脉应用人血丙种球蛋白(IVIG)对重症感染患儿淋巴细胞亚群的免疫调节作用,在重症感染时使用IVIG的安全性。方法采用单克隆抗体直接免疫荧光法,流式细胞术测定28例重症感染患儿外周血淋巴细胞亚群在应用浓度为0.2%和2.0%IVIG前后的变化。结果低浓度IVIG应用前后CD3、CD25、CD3CD25、CD4、CD28、CD4CD28、CD95、CD152计数均无明显差异(P>0.05);高浓度IVIG应用后仅CD152计数增高(P<0.05),其他CD亚群均无明显差异(P均>0.05)。结论低浓度IVIG对严重全身感染患儿外周血淋巴细胞亚群的影响不明显,高浓度IVIG通过抑制细胞毒性T细胞(Tc)扩增的机制,下调严重全身感染患儿外周血T细胞活化,抑制免疫功能。

益心泰对心肌梗死大鼠心室重构及CaN、NFAT_3蛋白表达的影响

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)、T细胞活化因子3(NFAT3)蛋白表达对心肌梗死后大鼠心室重构的影响及益心泰对其干预作用。方法制备心肌梗死大鼠模型。随机分成模型组、益心泰组、开博通组、复方丹参滴丸组和假手术组。模型组和假手术组以蒸馏水等量灌胃,其余各组分别给予相应药物灌胃,用药8周后分别检测心室质量指数及CaN、NFAT3蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组左、右心室质量指数均增加(P<0.01);与模型组比较,益心泰组、复方丹参滴丸组和开博通组左、右心室质量指数均降低(P<0.01)。与假手术组比较,模型组CaN、NFAT3蛋白明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,益心泰组、复方丹参滴丸组和开博通组CaN、NFAT3蛋白均降低,差异有统计学意义(P<0.01);益心泰组与复方丹参滴丸组和开博通组各项指标组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益心泰可能通过抑制CaN、NFAT3蛋白表达,从而在一定程度上干预心肌梗死后心室重构。