血小板T细胞活化抗原1与移植肾急性排斥反应的相关性

目的 :观察肾移植术后血清可溶性血小板T细胞活化抗原 1 (sPTA1 )水平及细胞膜性血小板T细胞活化抗原 1 (mPTA1 )的表达与排斥反应 (AR)的相关性。 方法 :选取 1 7例围手术期同种尸体肾移植患者以及 2例术后超过 1年的AR的患者 ,根据患者的不同病况每周采取血样 ,采用夹心ELISA法测定血清sPTA1水平 ,流式细胞术检测淋巴细胞mPTA1表达 ,对明确有排斥反应、可疑有排斥反应以及不能区分排斥反应的患者在B超引导下行移植肾活检穿刺病理检查。 结果 :术前sPTA1水平及mPTA1表达与对照无显著差异 (P >0 0 5)。术后第 1天sPTA1即有高水平的表达 ,与对照组差异显著 (P <0 0 5)。 1 9例尸体肾移植患者中经病理证实的 5例排斥反应患者sPTA1显著升高 ,mPTA1表达增强 ,与对照组差异非常显著 (P <0 0 1 )。经激素冲击治疗后 ,血清sPTA1下降 ,mPTA1表达下降。而且sPTA1水平变化早于AR的临床表现 ,持续时间较长。 结论 :PTA1可以作为移植物AR的预警和监测指标 ,与病理检查的结果有较好的一致性 ;

地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定

目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针。结果经斑点杂交证实 ,该探针敏感性高、特异性强。结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备 ,为进一步研究PTA1mR NA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。

血小板/T细胞活化抗原1融合蛋白对内皮细胞表达的阻断作用

目的探讨用血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/Ig,亦简称CD226)融合蛋白预作用血小板后观察其对内皮细胞的黏附的阻断作用。方法妊娠高血压综合征患者血清与血管内皮细胞进行共培养,再与血小板进行粘附试验阻断实验,用间接免疫荧光法进行标记,用流式细胞仪检测受刺激后血管内皮细胞上血小板/T细胞活化抗原1的表达。结果妊娠高血压综合征患者和正常孕妇血清刺激的血管内皮细胞表达CD226的百分率分别为15.51%和7.15%,妊娠高血压综合征患者组显著高于对照组(P<0.001)。PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化血小板后可明显地阻断其与内皮细胞的黏附,阻断率为48.9%,明显高于PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化内皮细胞后对两者的阻断作用(阻断率为13.6%)。结论妊娠高血压综合征患者血清具有刺激血管内皮细胞表达CD226的作用,内皮细胞与血小板的黏附过程中以血小板表面的T细胞活化抗原1(PTA1)配体与内皮细胞表面的PTA1分子相互作用为主。

血小板T细胞活化抗原1分子在NK细胞上的作用研究

目的 研究血小板T细胞活化抗原 1(PTA1)分子在NK细胞杀伤过程中的作用。方法 应用重导向细胞毒实验 ,探讨了PTA1分子对混合淋巴细胞反应中活化的NK细胞杀伤作用的影响。结果 在重导向细胞毒实验中 ,PTA1McAb能明显上调NK细胞及CTL的杀伤活性。结论 PTA1分子在NK细胞上具有刺激性受体的功能。

银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1的检测

目的检测银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1(sCD226/PTA1)的水平,初步探讨该抗原与银屑病的关系。方法银屑病患者包括疗前30例,其中活动期17例、静止期13例,疗后10例,正常人对照15例。应用双抗体夹心ELISA法测定血清中sCD226/PTA1的浓度。结果银屑病组血清中sCD226/PTA1水平(823.88±569.93pg/mL)显著高于正常人(120.45±58.41pg/mL),t= 4.41,P<0.001。活动期(1036.07±598.97pg/mL)更高,依次高于静止期(546.39±399.28pg/mL)和正常人。疗后组(263.16±207.3pg/mL)显著低于相应的疗前组(751.51±648.07pg/mL),t= 3.42,P<0.005。与正常人比较,疗后组值仍偏高,但差异无显著性,t=2.02,P>0.05。结论银屑病患者血清中存在高水平的sCD226/PTA1,并在活动期、静止期及疗后呈现出不同的变化。提示CD226/PTA1可能参与银屑病的病理过程。

支气管哮喘患者T淋巴细胞PTA1的表达

目的:研究特异性血小板/T细胞活化抗原1（PTA1）在支气管哮喘患者外周血T淋巴细胞的表达,探索T细胞在支气管哮喘发病中的作用。方法:应用双色直接荧光标记,流式细胞仪分析支气管哮喘患者在急性期及缓解期时体内CD3,CD4,CD8淋巴细胞在PHA刺激下PTA1（CD226）表达。结果:支气管哮喘患者组CD3淋巴细胞上PTA1表达率高于正常对照组（P<0.01）;急性期组CD3,CD8细胞上PTA1表达比正常对照组及缓解期组均显著增高（P<0.01）,CD4细胞上PTA1表达也存在差异（P<0.05）;PTA1在缓解期组 CD4,CD8细胞上的表达与正常对照组差异无显著意义（P>0.05）。结论:支气管哮喘患者体内存在T细胞亚群异常活化,PTA1表达增高;CD4,CD8细胞活化程度与支气管哮喘疾病严重程度有关;PTA1可能参与了支气管哮喘的免疫发病机制。

小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。

血小板/T 细胞活化抗原1(PTA1)胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

目的 克隆血小板／ Ｔ 细胞活化抗原１ （ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｎｄ Ｔｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ １ ， Ｐ Ｔ Ａ１）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区与 Ｉｇ Ｇ Ｆｃ 融合蛋白，用于 Ｐ Ｔ Ａ１ 配体鉴定的研究。方法 针对人 Ｐ Ｔ Ａ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 设计引物，通过反转录、半套式 Ｐ Ｃ Ｒ 从 Ｔ Ｐ Ａ 活化的 Ｊｕｒｋａｔ 细胞中扩增 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，并进行序列测定，而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体ｐ Ｉ Ｇ 中，构建重组表达载体ｐ Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ ，经 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｄｅｘｔｒａｎ 法转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞后通过亲和层析纯化，融合蛋白经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定。结果 获得７９３ｂｐ Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，构建成功 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 融合蛋白表达载体，制备了可用于纯化 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 的亲和层析柱，建立了检测融合蛋白的夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法。经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 证实融合蛋白在 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞中获得表达，相对分子质量为８３ ×１０３ ，表达效率约为１ ．３ ｍｇ／ ?

CD226分子参与脐静脉内皮细胞的功能

目的 :观察人血小板T细胞活化抗原 1 (CD2 2 6 )分子所参与的内皮细胞的功能 .方法 :采用3 H TdR掺入、51 Cr黏附实验、PI染色结合流式细胞仪技术观测CD2 2 6分子对体外培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖、粘附、细胞周期及凋亡的影响 .结果 :CD2 2 6分子参与HUVEC的粘附功能 ,但CD2 2 6mAb(LeoA1 )对HUVEC的增殖、细胞周期及细胞凋亡均无显著影响 .结论 :CD2 2 6分子是活化HUVEC表面一种新的粘附分子 。

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞PTA1表达的研究

目的 研究血小板和T细胞活化抗原 1(PTA1)在系统性红斑狼疮 (SLE)外周血T淋巴细胞的表达及其与SLE活动相关性 ,探索活化T细胞在SLE发病中的作用。方法 应用双色直接荧光标记 ,流式细胞仪分析 2 7例 (其中活动期 13例、非活动期 14例 )SLE患者和 30名健康志愿者的CD3、CD4、CD8淋巴细胞 ,在植物血凝素 (PHA)刺激下PTA1(CD2 2 6 )表达 ,同时检测SLE患者抗dsDNA抗体、C3和C4补体 ,疾病活动度用SLEDAI记分。结果 SLE患者组CD3、CD4、CD8淋巴细胞上PTA1表达率均高于正常对照组 ,CD3上PTA1表达两组差异有显著性 (P <0 0 1) ;活动期SLE组CD3、CD4、CD8细胞上PTA1表达均高于正常对照组和非活动期SLE组 (P <0 0 1) ,而非活动期SLE组与正常对照组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;SLE患者CD3、CD8细胞PTA1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体之间呈正相关 ,与C3、C4补体水平呈负相关 ,CD8细胞PTA1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3、C4补体水平呈直线相关 (P <0 0 5 )。结论 SLE患者存在T细胞亚群异常活化 ;活动期SLE淋巴细胞PTA1表达增高 ;SLE患者CD8细胞PTA1表达异常与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3和C4补体之间有明显相关 ,CD8细胞活化程度与SLE疾病程度有关 。