T细胞活化核因子5与胸腺瘤合并重症肌无力的相关性研究

目的 T细胞活化核因子5(NFAT5)具有促进T细胞发育和激活T细胞作用,通过诱导不同靶基因实现免疫调节功能。该研究旨在探讨NFAT5与胸腺瘤合并重症肌无力(MG)的相关性及其作用机制。方法免疫组织化学(IHC)检测NFAT5在胸腺瘤中蛋白表达与是否合并MG有关。通过生物信息网站预测NFAT5的微小RNA(miRNA)及下游靶基因,应用RT-q PCR与IHC在临床病理样本中对miRNA和靶基因进行验证。结果应用IHC在56例胸腺瘤石蜡标本中检测NFAT5,NFAT5在单一胸腺瘤组(T组,32例)阳性率高于伴MG胸腺瘤组(MT组,24例),差异具有统计学意义(P=0.006)。通过生物信息网站预测NFAT5的microRNA和下游基因,得出NFAT5的下游基因为CD4,miRNA-17-5p靶向调控NFAT5。在10例胸腺瘤石蜡标本中(T组5例;MT组5例),通过RT-q PCR检测miRNA-17-5p,结果显示miRNA-17-5p在T组表达低于MT组,差异有统计学意义(P=0.033)。在56例胸腺瘤石蜡标本中,应用IHC检测到CD4在T组阳性率高于MT组,差异有统计学意义(P=0.034)。在T组和MT组中,NFAT5与CD4表达均呈正相关(P<0.05)。结论 NFAT5在T组中的表达高于MT组,说明NFAT5在胸腺瘤中对MG发病起到一定抑制作用。miRNA-17-5p可能在胸腺瘤微环境中靶向抑制NFAT5,从而抑制CD4+T细胞表面的CD4,减少CD4+T细胞反应,促进MG的发生。

杨梅黄酮通过激活miR-361-3p/NFAT5通路改善大鼠急性肺损伤

目的:探讨杨梅黄酮对大鼠急性肺损伤的保护作用及机制。方法:采用脂多糖腹腔注射建立大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型,雄性SD大鼠50只随机分为5组(n=10):正常对照组、ALI模型组、低剂量杨梅黄酮组、中剂量杨梅黄酮组和高剂量杨梅黄酮组。检测肺损伤指标:肺泡灌洗液(BALF)总蛋白浓度、肺湿/干重比值、苏木素伊红染色;检测肺部炎性反应指标:BALF中炎性因子白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及细胞计数;检测信号机制分子:肺组织miR-361-3p和活化性T淋巴细胞核因子5(NFAT5)表达量。另培养的A549细胞随机分为8组:对照组、脂多糖组、低剂量杨梅黄酮组、中剂量杨梅黄酮组、高剂量杨梅黄酮组、miR转染空白对照(miR-NC)组、miR-361-3p拟似物(miR-361-3p mimic)组和KRN2(NFAT5抑制剂)组。TUNEL免疫荧光技术检测A549细胞凋亡率;检测A549细胞中凋亡相关蛋白Bax表达量及培养液中IL-6和TNF-α含量。结果:与正常对照组比较,ALI模型组肺湿/干重比值增大,BALF中总蛋白浓度升高,细胞计数增大,IL-6和TNF-α含量升高,肺组织MPO活性升高,NFAT5表达量增多,而肺组织miR-361-3p表达量减少。与ALI模型组比较,中、高剂量杨梅黄酮治疗明显降低肺湿/干重比值,降低BALF中总蛋白浓度,减小细胞计数,减少IL-6和TNF-α含量,降低肺组织MPO活性,减少NFAT5表达量,升高肺组织miR-361-3p表达量。机制上,应用miR-361-3p拟似物预处理可降低A549细胞中NFAT5表达量;中、高剂量杨梅黄酮、miR-361-3p拟似物和NFAT5抑制剂KRN2均明显减轻A549细胞凋亡和减少炎性因子释放。结论:杨梅黄酮通过调控炎症相关miR-361-3p/NFAT5信号轴而改善急性肺损伤,为杨梅黄酮在急性肺损伤临床治疗中的应用提供实验依据。