β-catenin基因克隆及pcDNA3.1(-)myc/hisA载体的构建

目的:通过RT-PCR技术获得β-catenin基因,构建重组的克隆载体,再进行亚克隆构建重组pcD-NA3.1(-)myc/hisA表达载体,为进一步研究细胞增殖的信号传导提供基础。方法:应用TRIZO试剂盒从胰岛瘤NIT细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得β-catenin目的基因,胶回收后的PCR产物与pGEM-T克隆载体相连,酶切鉴定后再亚克隆至pcDNA3.1(-)myc/hisA表达载体,重组的表达载体转化E.coli工程菌JM109,获得大量的含目的基因pcDNA3.1(-)myc/hisA表达载体。结果:经过氨苄青霉素的筛选、重组质粒的单酶切和双酶切鉴定表明,β-catenin成功连入载体pcDNA3.1(-)表达载体中,同时得到了大量含目的基因的克隆子。结论:成功构建pcDNA3.1(-)myc/hisA-βcatenin的重组质粒,为进一步研究β-catenin功能和Wnt细胞信号传导通路奠定了基础。