桧木醇通过TGF-β1/Foxp3/RORγt通路抑制乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 研究桧木醇对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 用0、5、10和20μmol/L桧木醇处理人乳腺癌MCF-7细胞,采用划痕法检测细胞的迁移、Transwell法检测细胞侵袭能力、流式细胞技术检测细胞凋亡情况、采用蛋白免疫印迹法检测TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,5、10和20μmol/L桧木醇组细胞细胞划痕愈合率、侵袭能力均显著降低(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞划痕愈合率和侵袭能力逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率显著升高(P<0.01或P<0.05),且随着桧木醇浓度的升高,细胞凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白显著降低(P<0.05),随着桧木醇浓度的升高,TGF-β1、Foxp3、RORγt蛋白表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 桧木醇可以通过抑制乳腺癌细胞中TGF-β1/Foxp3/RORγt信号通路来调节乳腺癌细胞的侵袭、迁移和凋亡,具有成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点。

阻断Cn/NFAT通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE_2的影响

目的:观察阻断钙调磷酸酶(Cn)/活化T细胞核因子(NFAT)通路对钛颗粒诱导成骨细胞分泌IL-6和PGE2的影响。方法:取新生大鼠头颅骨,经消化法获取成骨细胞,根据培养条件,分为钛颗粒组、钛颗粒/VIVIT肽组、VIVIT肽组和对照组。细胞培养96 h后行Western blot检测NFATc1蛋白表达,于6、24、96 h离心后取细胞培养上清,用ELISA法检测各组IL-6和PGE_2的含量。结果:钛颗粒组NFATc1表达高于对照组(P<0.01),钛颗粒/VIVIT肽组NFATc1表达显著低于钛颗粒组(P<0.01),钛颗粒组培养上清IL-6和PGE_2含量各时间点均显著高于对照组(P<0.05),钛颗粒/VIVIT肽组较钛颗粒组各时间点均显著降低(P<0.05)。结论:11R-VIVIT肽特异性阻断Cn/NFAT通路可显著抑制钛颗粒诱导的成骨细胞IL-6和PGE_2的分泌。

Wnt通路调控记忆性T细胞的增殖活化

目的探讨Wnt通路在记忆性T细胞(TM)增殖活化中发挥的调控作用。方法建立同种异体(BALB/c-C57BL/6)小鼠皮肤移植模型,采用免疫磁珠方法分选培养C57BL/6小鼠未成熟树突状细胞(imDC)、成熟树突状细胞(mDC)和TM,流式细胞术鉴定。在96孔板或TranswellTM中用imDC和负载BALB/c小鼠抗原的mDC与TM进行混合淋巴细胞反应(MLR)。氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)检测TM的增殖情况。ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、IL-10、γ干扰素(IFN-γ)的水平。实时定量PCR检测imDC和mDC中Wnt基因的表达情况。双荧光素酶报告基因检测MLR中TM的β联蛋白/T细胞因子(β-catenin/TCF)信号通路转录活性。结果与对照组相比,在96孔板中负载BALB/c小鼠抗原的mDC显著诱导TM的增殖,上调IL-2和IFN-γ,下调IL-10的表达。mDC中Wnt3a和Wnt5a的mRNA表达水平显著高于imDC。mDC与TM共培养可显著增强TM的β-catenin/TCF信号通路转录活性。而在TranswellTM中培养的细胞基本未见细胞增殖。结论负载供者抗原的受者小鼠mDC可通过直接接触的方式有效激活受者效应型TM的增殖,Wnt通路的β-catenin/TCF转录激活可能是介导TM活化增殖的重要信号通路。

基于Notch信号通路探讨芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2免疫平衡的调节机制

目的探讨果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)辅助性T细胞1(Helper T cells 1,Th1)和辅助性T细胞2(Helper T cells 2,Th2)失衡中的作用及芪蛭皱肺颗粒的干预机制。方法70只Wistar大鼠随机挑选10只作为空白对照组,其余大鼠均采用香烟烟雾(CS)联合气管滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)法建立COPD模型,空白对照组及造模组各随机挑选3只大鼠验证造模是否成功。造模结束进行灌胃给药干预,造模组大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组(67.5μg·kg^(-1))及芪蛭皱肺颗粒高中低剂量组(3.24、1.62、0.81 g·kg^(-1)),分别给予生理盐水、醋酸地塞米松混悬液、芪蛭皱肺高、中、低剂量混悬液进行灌胃干预,空白对照组同模型对照组,灌胃等体积生理盐水。经28天造模及28天治疗后,采用动物肺功能测试系统检测吸气峰流速(Peak Inspiratory Flow,PIF)和呼气峰流速(Peak Expiratory Flow,PEF),处死大鼠提取肺脏、脾脏、血清及支气管肺泡灌洗液(BALF),苏木素-伊红(HE)染色评价肺组织病理变化,酶联免疫吸附实验法(ELISA)测定血清及BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,流式细胞仪检测脾脏Th1/Th2细胞水平,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Notch1、Hes家族发状分裂相关增强子1(Hes1)、Hey家族发状分裂相关增强子1(Hey1)蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测肺组织Notch1、Hes1、Hey1基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺功能显著降低(P<0.05),肺组织出现炎性细胞浸润、支气管结构破坏等病变,血清及BALF中TNF-α含量显著升高(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著降低(P<0.05),Th2细胞百分比显著升高(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05),差异均具有统计学意义;与模型对照组比较,各给药组大鼠肺功能显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤均有所减轻,血清及BALF中TNF-α含量显著降低(P<0.05),脾Th1细胞百分比显著升高(P<0.05),Th2细胞百分比显著降低(P<0.05),肺组织Notch1、Hes1、Hey1蛋白及mRNA表达显著降低(P<0.05),差异均具有统计学意义。结论芪蛭皱肺颗粒通过抑制Notch信号通路调节Th1/Th2平衡,从而改善COPD大鼠肺功能及病理损伤,影响其免疫功能。

基于Notch/Treg/Th17通路探究活血消瘿方对桥本甲状腺炎大鼠甲状腺功能和病理形态的影响

目的:探讨活血消瘿方(HXXYF)调控Notch/调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)通路对桥本甲状腺炎(HT)大鼠甲状腺功能和病理形态的影响。方法:将84只大鼠随机分为对照组(NC组)、模型组(Model组)、低剂量HXXYF组(HXXYF-L组,0.5 g/kg)、高剂量HXXYF组(HXXYF-H组,2 g/kg)、左旋甲状腺素钠组(LTSD组,0.1 mg/kg)、Jagged1(Notch激活剂)组(0.67 mg/kg Jagged1)、HXXYF-H+Jagged1组(2 g/kg+0.67 mg/kg),每组12只。除NC组外,其他组大鼠均构建HT模型。全部造模成功后,进行给药处理,1次/d,持续4周。ELISA法检测大鼠血清中游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、白细胞介素(IL)-17、IL-10水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Treg、Th17比例;HE染色检测大鼠甲状腺组织病理变化;Western blotting检测甲状腺组织中叉头框蛋白P3(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、Notch1蛋白表达。结果:与NC组比较,Model组大鼠甲状腺组织病理损伤严重,FT_(3)、FT_(4)、IL-10水平,Treg比例,Foxp3蛋白表达均降低(P<0.05),TSH、TPOAb、TGAb、IL-17水平,Th17比例,RORγt、Notch1蛋白表达均升高(P<0.05);与Model组比较,HXXYF-L组、HXXYF-H组、LTSD组大鼠甲状腺组织病理损伤均减轻,FT_(3)、FT_(4)、IL-10水平,Treg比例,Foxp3蛋白表达均升高(P<0.05),TSH、TPOAb、TGAb、IL-17水平,Th17比例,RORγt、Notch1蛋白表达均降低(P<0.05),Jagged1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);Jagged1减弱了高剂量HXXYF对HT大鼠甲状腺功能和病理形态的改善作用。结论:HXXYF可能通过抑制Notch通路来调节Treg/Th17平衡进而改善HT大鼠甲状腺功能和病理形态。

基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路探讨芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用

目的基于TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路观察芦荟多糖对小鼠自身免疫性甲状腺炎的保护作用。方法选用2月龄雌性小鼠30只,随机分为正常组、模型组和芦荟多糖组,每组10只。通过皮下多点注射猪甲状腺球蛋白(PTg)+高碘水法建立小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,其中芦荟多糖组灌胃给药300 mg/(kg·d),其余两组灌胃给予等量生理盐水。药物干预4周后分别HE染色观察各组小鼠甲状腺组织病理形态学变化;ELISA法检测各组小鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_(3))、游离四碘甲状腺原氨酸(free thyroxine,FT_(4))、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白介素10(interleukin 10,IL-10)、白介素17(interleukin 17,IL-17)和甲状腺信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT_(3))、维甲酸相关核孤儿受体γt(retinoic acid-related orphan receptorγt,RORγt)、叉头状转录因子P3(forkhead box P3,FOXP3)、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)、IL-10和IL-17水平;免疫荧光法检测FOXP3和IL-17A水平;Western blot法检测TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路关键蛋白表达水平。结果与模型组比较,芦荟多糖明显改善甲状腺组织病理学变化,降低血清TSH、TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和IL-17的水平(P<0.05),升高血清FT3、FT4和IL-10的水平(P<0.01),下调甲状腺组织STAT3、RORγt和IL-17水平(P<0.01),上调甲状腺FOXP3、TGF-β和IL-10水平(P<0.01)。结论芦荟多糖可能通过TGF-β1/FOXP3/RORγt信号通路对小鼠自身免疫性甲状腺炎具有较好的保护作用。

基于胸腺基质淋巴细胞生成素/蛋白酶激活受体2/瞬时电位受体香草酸受体1/活化T细胞的核因子信号通路探讨麻荆止咳颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制

目的:通过麻荆止咳颗粒调控胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic Stromal Lymphopoietin,TSLP)/蛋白酶激活受体2(Proteinase Activated Receptor-2,PAR2)/瞬时电位感受器香草酸受体1(Transient Receptor Potential Vanilloid 1,TRPV1)/活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T cells,NFAT)信号通路的动物实验,探讨其治疗咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)的疗效机制。方法:将豚鼠随机分为空白对照组、模型组、中药组和地塞米松组,构建CVA豚鼠模型,药物干预10天,采用辣椒素激发各组豚鼠,观察咳嗽情况;苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法观察各组肺组织病理学变化;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Method,ELISA)法检测各组血清TSLP含量;免疫组化染色及实时定量聚合酶链反应(quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)法检测肺组织PAR2、TRPV1、NFAT的表达。结果:与模型组对比,中药组和地塞米松组药物干预后咳嗽次数明显减少;血清TSLP含量显著降低;且肺组织病理变化较模型组明显减轻;PAR2、TRPV1和NFAT的蛋白与mRNA表达均下调。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制CVA模型豚鼠TSLP/PAR2/TRPV1/NFAT信号通路表达,降低气道敏感性及改善气道炎症,达到止咳效果。

机械牵拉诱导人RPE细胞IL-8分泌及其对PI3K/AKT通路的影响

目的:视网膜脱离发生机制尚不明确,本文旨在研究机械应力牵拉后视网膜色素上皮细胞上清中IL-8分泌量的变化以及人其对RPE细胞PI3K/AKT通路变化影响。方法:培养人RPE细胞,应用Flex-cell细胞应力加载系统牵拉人RPE细胞不同时间(0h、1 h、3 h、6 h、9 h)建立不同牵拉时间的模型。分别标记为对照组、牵拉1 h组、牵拉3 h组、牵拉6 h组、牵拉9 h组。随后用ELISA方法检测人RPE细胞不同实验组上清中IL-8分泌量的变化。细胞免疫荧光和Western blot方法观察PI3K、PPI3K、T-AKT、P-AKT的表达。结果:随着牵拉时间的延长,ELISA方法检测人RPE细胞不同实验组上清中IL-8分泌量逐渐增加[924.79±5.92 pg/m L、947.73±5.34 pg/m L、974.53±5.74 pg/m L、979.57±1.12 pg/m L、1019.22±4.25 pg/m L],差异有统计学意义(F=166,p<0.01),各牵拉组与对照组分别对比,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞中P-AKT蛋白表达增加[0.61±0.02、0.97±0.05、0.99±0.04、1.21±0.11、1.20±0.07],差异有统计学意义(F=41.24,p<0.01),各牵拉组与对照组分别对比,差异有统计学意义(P<0.05),AKT表达未见明显变化。结论:机械应力牵拉人RPE细胞时,细胞上清中IL-8分泌量逐渐增加同时RPE细胞内PI3K/AKT通路明显激活,并与牵拉时间有关,为探究EMT原因和对防治PVR提供了理论基础。

基于转录组学研究高原低氧对小鼠T、B淋巴细胞信号通路的影响

目的 基于转录组学测序技术探究高原低氧(HST)胁迫下T、B淋巴细胞信号通路中枢纽基因和关键调控通路响应的分子机制。方法 分别在海拔400 m[平原常氧组(PSC组)]和4 200 m(HST组)处饲养C57BL/6小鼠30 d后取脾脏组织,采用RNA-Seq进行转录组测序,得到差异基因进行基因本体(GO)功能注释和京都基因和基因组数据库(KEGG)通路分析,使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)验证。结果 相比于PSC组,HST组中1 947个差异基因表达上调,2 266个差异基因表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05),且KEGG富集分析发现,HST胁迫下主要通过T、B细胞受体、磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子κB(NF-κB)等信号通路调控异常引起免疫炎症的发生发展。结论 HST胁迫可能通过激活PI3K-Akt通路,抑制p38 MAPK和NF-κB通路,诱导T、B细胞受体信号通路响应HST胁迫的转录调控分子机制,引起免疫调节和炎症反应的发生。

消渴方基于CN/NFAT信号通路对2型糖尿病大鼠的干预效果研究

目的探讨消渴方对2型糖尿病模型大鼠钙调磷酸酶(CN)/活化T细胞因子(NFAT)信号通路的影响。方法选取45只清洁级Wistar大鼠,随机分为正常组、模型组、消渴方组各15只,模型组、消渴方组建立2型糖尿病模型。建模成功后,消渴方组大鼠给予消渴方灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,均连续15 d。灌胃结束后,取血检测血清糖脂代谢指标[空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]、胰岛功能指标[空腹胰岛素(FINS)、胰岛β细胞功能指数(HBCI)、胰岛β细胞分泌功能指数(FBCI)];取胰腺组织,采用HE染色法进行病理组织观察,采用免疫组化SP法进行胰岛β细胞胰岛素分泌情况观察,采用酶联免疫法检测胰腺组织中氧化应激损伤指标[丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],体外检测胰岛β细胞生长活力、存活率、凋亡率,采用Western blot法检测胰腺组织中CN/NFAT信号通路蛋白表达量。结果与正常组比较,模型组大鼠血清FPG、TC、TG、LDL-C水平及胰腺组织中MDA、TNF-α均明显升高(P均<0.05),血清HDL-C、FINS、HBCI、FBCI及胰腺组织中T-SOD均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,消渴方组大鼠血清FPG、TC、TG、LDL-C水平及胰腺组织中MDA、TNF-α均明显降低(P均<0.05),血清HDL-C、FINS、HBCI、FBCI及胰腺组织中T-SOD均明显升高(P均<0.05)。模型组大鼠胰岛组织出现萎缩,胰岛素分泌量显著减少;消渴方组大鼠胰岛组织形态与正常组相似,胰岛素分泌量增加。与正常组比较,模型组大鼠胰岛β细胞生长活力、存活率及胰腺组织中PDX-1、Bcl-2蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),胰岛β细胞凋亡率及胰腺组织中CN、NFATc1、Bax蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,消渴方组大鼠胰岛β细胞生长活力、存活率及胰腺组织中PDX-1、Bcl-2蛋白表达量均明显升高(P均<0.05),胰岛β细胞凋亡率及胰腺组织中CN、NFATc1、Bax蛋白表达量均明显降低(P均<0.05)。结论消渴方可改善2型糖尿病大鼠胰岛功能,减轻胰腺氧化应激反应,促进胰岛β细胞再生分化成熟,抑制胰岛β细胞凋亡,其机制可能与阻断CN/NFAT信号通路相关。

lncRNA-CCAT1通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录因子1(CCAT1)对宫颈癌HeLa细胞自噬的影响及其可能作用机制。方法:培养宫颈癌HeLa细胞,将CCAT1过表达质粒pcDNA3.1-CCAT1转染至HeLa细胞中,采用qRT-PCR检测转染后细胞中CCAT1的表达水平;CCK8法检测细胞增殖活性;单丹磺酰戊二酸(MDC)染色观察细胞自噬囊泡的聚集情况;Western blot分析CCAT1过表达和PI3K特异性抑制剂LY294002对HeLa细胞自噬以及PI3K/Ak/t mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果:过表达CCAT1可显著增加HeLa细胞中CCAT1表达水平并促进细胞增殖,抑制细胞自噬囊泡聚集,降低LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ以及下调Beclin1蛋白表达水平,同时上调p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达。然而,采用LY294002干预可逆转CCAT1过表达对HeLa细胞增殖的促进作用以及自噬的抑制作用。结论:CCAT1过表达可能通过激活PI3K/Ak/t mTOR信号通路抑制宫颈癌HeLa细胞自噬。

miR-541-3p靶向SPOCD1基因通过Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-541-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:将miR-con、miR-541-3p、anti-miR-con、anti-miR-541-3p、si-con、si-SPOCD1分别转染至MCF-7细胞中,分别记为miR-con组、miR-541-3p组、anti-miRcon组、anti-miR-541-3p组、si-con组、si-SPOCD1组;将miR-541-3p质粒分别与pcDNA-con、pcDNA-SPOCD1共转染至MCF-7细胞中,分别记为miR-541-3p+pcDNA-con组、miR-541-3p+pcDNA-SPOCD1组;转染均采用脂质体法。RT-qPCR检测miR-541-3p和SPOCD1 mRNA表达水平;Western blot法检测包含1个基因的SPOC结构域(SPOCD1)、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达;MTT检测细胞存活率;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR-541-3p和SPOCD1的靶向关系。结果:与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MCF-7、T47D、Bcap-37中miR-541-3p表达水平显著降低,SPOCD1表达水平显著升高。miR-541-3p过表达和敲减SPOCD1可降低细胞存活率和细胞迁移、侵袭数量,降低CyclinD1、MMP2、MMP9表达水平。miR-541-3p靶向调控SPOCD1并且SPOCD1高表达能部分逆转miR-541-3p高表达对细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭的抑制作用。miR-541-3p过表达抑制Wn/tβ-catenin信号通路激活,SPOCD1高表达能部分逆转miR-541-3p高表达对Wn/tβ-catenin信号通路的抑制作用。结论:miR-541-3p过表达可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与SPOCD1和Wn/tβ-catenin信号通路相关,并为乳腺癌的治疗提供新思路和新靶点。

HBx上调TGF-β/TβR-Ⅱ通路对肝细胞癌索拉菲尼耐药的影响

目的探讨HBx上调TGF-β/TβR-Ⅱ通路对肝细胞癌索拉菲尼耐药的影响。方法选择稳定转染HBX蛋白的HepG2-HBx细胞与转染pcDNA3.1质粒的HepG2-3.1细胞,采用索拉菲尼进行药物处理,运用MTT法来检测索拉菲尼对细胞生长的抑制率,接着流式实验对细胞凋亡率加以检测。采用免疫印迹方法检测TGF-β/TβR-Ⅱ通路中TβR-Ⅱ的蛋白水平。结果 HepG2-HBx细胞的HBX蛋白表达明显高于普通的HepG2-3.1细胞(P<0.05)。MTT检测结果显示索拉菲尼对HepG2-HBx细胞的IC_(50)值为HepG2-3.1细胞的4.65倍。流式检测结果显示索拉菲尼作用24 h后,HepG2-HBx细胞的凋亡率要明显低于HepG2-3.1细胞的凋亡率(P<0.05)。免疫印迹检测显示HepG2-HBx细胞较HepG2-3.1细胞的多药耐药蛋白TGF-β表达量明显增高(P<0.05)。结论 HBx可通过上调TGF-β/TβR-Ⅱ通路的表达,从而提高索拉菲尼对肝癌细胞的耐药性,降低细胞凋亡率,HBx是引起肝癌细胞耐药的重要因素之一。

基于Notch1/ROR-γt信号通路研究芹菜素对自身免疫性甲状腺炎小鼠的保护作用

目的探讨芹菜素对自身免疫性甲状腺炎小鼠的保护作用及机制。方法50只雌性BALB/c小鼠采用皮下多点注射猪甲状腺球蛋白联合高碘水的方法构建小鼠自身免疫性甲状腺炎模型,随后将模型小鼠随机均分为模型组(0.9%NaCl溶液)、雷公藤多苷片组[5 mg/(kg·d)]、芹菜素低剂量组[15 mg/(kg·d)]、芹菜素中剂量组[30 mg/(kg·d)]和芹菜素高剂量组[60 mg/(kg·d)],另设空白对照组10只,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水,药物干预14 d。检测各组小鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、TNF-α和IL-1β的水平、SOD活性和MDA含量,HE染色法观察甲状腺组织病理学变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Notch1和ROR-γt蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组的血清TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和MDA的含量明显升高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),甲状腺组织可见大量的炎症细胞浸润。甲状腺组织Bax、Notch1和R O R-γt蛋白表达水平明显上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。与模型组比较,芹菜素给药组的血清TGAb、TPOAb、TNF-α、IL-1β和MDA的含量明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05),甲状腺组织炎症细胞浸润减少。甲状腺组织Bax、Notch1和ROR-γt蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显上调(P<0.05),呈浓度依赖性。结论芹菜素通过抑制炎症、降低氧化应激水平和抑制甲状腺细胞的凋亡,对自身免疫性甲状腺炎小鼠具有一定的保护作用。

沉默TRIM31基因表达通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制膀胱癌细胞的迁移与侵袭

目的:观察沉默TRIM31基因表达对膀胱癌细胞迁移与侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:将膀胱癌T24和5637细胞分为对照组、siRNA-NC组和siRNA-TRIM31组。采用siRNA技术沉默细胞中TRIM31基因表达,qRT-PCR和Western blot检测细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验观察细胞迁移与侵袭能力的变化,免疫荧光染色观察细胞中β-catenin核转位情况;Western blot检测细胞中β-catenin、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin及Snail1的表达水平。结果:成功获得TRIM31基因沉默的T24和5637细胞株。与对照组相比,siRNA-TRIM31组T24和5637细胞的迁移与侵袭能力减弱,β-catenin蛋白核转位水平降低,细胞中β-catenin、Snail1、MMP-2、MMP-9和Vimentin蛋白表达水平均降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:沉默TRIM31基因表达可抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wn/tβ-catenin信号通路活化有关。

钙调磷酸酶/活化T细胞因子信号通路在有氧运动诱导高血压大鼠血管平滑肌细胞K_V2.1通道表达上调中的作用

目的探讨钙调磷酸酶/活化T细胞因子（CaN/NFAT）信号通路在有氧运动诱导原发性高血压大鼠（SHR）肠系膜动脉血管平滑肌细胞电压依赖性钾通道（KV2.1）表达上调中的作用。方法选用3月龄雄性WKY和SHR大鼠各24只,随机分为WKY安静组和运动组（WKY-SED组、WKY-EX组）、SHR安静组和运动组（SHRSED组、SHR-EX组）。运动干预前和12周运动结束后分别测量大鼠安静状态下的心率和血压。分别采用免疫组化和Western blot检测KV2.1、CaN在肠系膜动脉的分布以及KV2.1、CaN、p-NFATc3、A型激酶锚定蛋白（AKAP150）和钙调蛋白（CaM）的蛋白表达。结果 （1）12周有氧运动后,与SHR-SED组相比,SHR-EX组心率、收缩压和平均动脉压均显著降低（P〈0.01）;与WKY-SED组相比,WKY-EX组收缩压显著降低（P〈0.05）。（2）与WKY-SED组相比,SHR-SED组KV2.1在肠系膜动脉的蛋白表达显著减少（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组KV2.1的蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（3）与WKY-SED组相比,SHR-SED组CaN在肠系膜动脉的蛋白表达显著增加（P〈0.01）,p-NFATc3的蛋白表达显著减少（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组CaN的蛋白表达显著减少（P〈0.01）,p-NFATc3的蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（4）与WKY-SED组相比,SHR-SED组的AKAP150蛋白表达显著增加（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组的AKAP150蛋白表达显著减少（P〈0.01）。（5）与WKY-SED组相比,SHR-SED组的CaM蛋白表达显著增加（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组的CaM蛋白表达显著减少（P〈0.01）;相比WKY-SED组,WKY-EX组CaM的蛋白表达量显著升高（P〈0.05）。结论钙调磷酸酶/活化T细胞核因子信号通路表达上调是高血压引起KV2.1通道功能下降的重要原因,有氧运动可以有效抑制这种作用,这可能是有氧运动缓解高血压及重塑血管功能的机制之一。

黄芩素通过Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响

目的探讨黄芩素通过核因子E2相关因子(Nrf2)/核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)信号通路对牙周病大鼠破骨细胞形成和牙槽骨吸收的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组,各10只。除对照组外,其他组制备牙周病大鼠模型。造模1周后,于黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组大鼠创伤处分别注射2.5 mg/(kg·d)、5.0 mg/(kg·d)的黄芩素,于模型组和对照组大鼠相同部位注射等量生理盐水。连续给药7 d后,检测大鼠牙槽骨吸收情况,观察大鼠牙周组织病理变化,计数大鼠牙周组织的破骨细胞数量,并检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧活性、谷胱甘肽和丙二醛水平,以及牙周组织Nrf2、NF-κB、NFATc1蛋白表达水平。结果与对照组相比,其他组大鼠牙周组织上皮增生,胶原纤维排列紊乱,有大量炎症细胞浸润,牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、TNF-α水平以及活性氧活性升高,血清谷胱甘肽水平及SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平降低,模型组和黄芩素低剂量组大鼠血清IL-6、丙二醛水平升高(均P<0.05)。模型组、黄芩素低剂量组、黄芩素高剂量组牙槽骨吸收度、牙周组织破骨细胞数、牙周组织NF-κB和NFATc1蛋白表达水平、血清IL-1β、IL-6、TNF-α、丙二醛水平及活性氧活性依次降低,血清SOD活性、牙周组织Nrf2蛋白表达水平依次升高,且黄芩素低剂量组与黄芩素高剂量组的血清谷胱甘肽水平均高于模型组(均P<0.05)。结论黄芩素可能通过调节Nrf2/NF-κB/NFATc1信号通路抑制机体炎症和氧化应激反应,从而减少破骨细胞形成,进而减少牙槽骨吸收。

透骨血竭散外敷对类风湿性关节炎大鼠T细胞抗原受体通路中Lck、Fyn蛋白表达及滑膜细胞凋亡的影响

【目的】探讨透骨血竭散外敷对类风湿性关节炎(RA)大鼠的治疗作用及机制。【方法】将44只大鼠随机分为假手术组、模型组、透骨血竭散组及扶他林组,每组11只。除假手术组外,其余各组大鼠构建RA模型。建模成功后,次日透骨血竭散组大鼠于左后足足跖部及踝关节外敷透骨血竭散,扶他林组相同部位外敷扶他林软膏,模型组及假手术组相同部位外敷空白凝胶膏剂。采用足容积测量仪测量大鼠左后足的肿胀体积;苏木素-伊红(HE)染色法观察踝关节病理形态并进行炎症细胞浸润评分;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法测定滑膜细胞凋亡;蛋白免疫印迹法检测踝关节组织T细胞抗原受体(TCR)通路中Lck、Fyn蛋白表达;免疫组织化学法检测踝关节滑膜组织Bax、Bcl-2阳性表达。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠足爪肿胀度升高,踝关节组织呈现明显RA病理改变,且炎症细胞浸润评分升高,踝关节组织Lck、Fyn蛋白表达水平升高,滑膜组织Bcl-2阳性细胞比率升高、Bax阳性细胞比率降低(均P<0.05);与模型组比较,透骨血竭散组及扶他林组的足爪肿胀度降低,踝关节组织病理损伤改善,且炎症细胞浸润评分降低,踝关节组织Lck、Fyn蛋白表达水平降低,滑膜组织Bcl-2阳性细胞比率降低、Bax阳性细胞比率升高(均P<0.05);透骨血竭散组各指标的改善效果优于扶他林组(均P<0.05)。【结论】透骨血竭散外敷可改善RA大鼠踝关节的肿胀,其机制可能与抑制TCR信号通路Lck、Fyn蛋白表达,抑制炎症细胞浸润,促滑膜细胞凋亡有关。

消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路及腹水微环境的影响

目的 研究消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)协同刺激通路及腹水微环境的影响。方法 2019年4月至2020年5月,在湖南省中医药研究院动物中心实验室,采用腹腔注射人胃癌细胞MGC803建立人胃癌小鼠腹膜移植模型,共分为模型组、消水散低、中、高剂量组,另取正常小鼠为对照组,每组10只。通过行为学观察及测定血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量评估模型质量,影像学方法评估恶性腹水情况,流式细胞仪及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测B7-1、B7-2、CD28及CTLA-4表达量及其mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果 正常小鼠的阳虚症状积分为(0.00±0.00)分,血清ACTH水平为(103.46±10.13)ng/L、CORT水平为(81.34±9.21)μg/L、T3含量为(178.52±15.86)ng/L、T4含量为(213.59±16.97)μg/L和TSH含量为(10.84±1.15)mIU/mL。与对照组相比,模型小鼠阳虚症状积分[(7.84±1.59)分]显著增加(P<0.05),血清ACTH[(71.09±6.42)ng/L]、CORT[(43.42±7.14)μg/L]、T3[(103.77±13.24)ng/L]、T4[(127.64±13.25)μg/L]、TSH含量[(8.14±1.02)mIU/mL]显著降低(P<0.05)。模型组小鼠的腹水量为(5.18±0.46)mL、瘤体积为(1.23±0.12)cm3、瘤重为(1.73±0.15)g、B7-1 mRNA水平为(1.06±0.10)、B7-2 mRNA水平为(1.04±0.11)、CD28 mRNA水平为(0.97±0.08)、CTLA-4 mRNA水平为(1.03±0.09)、TGF-β1含量为[(181.73±15.26)pg/g]和IL-10水平为[(68.74±6.03)pg/g]。与模型组相比,消水散低、中、高剂量组小鼠的腹水量[(4.03±0.41)、(3.24±0.25)、(2.33±0.27)mL]、瘤体积[(0.93±0.09)、(0.49±0.05)、(0.16±0.02)cm3]、瘤重[(1.42±0.13)、(0.79±0.11)、(0.27±0.08)g]、CTLA-4 mRNA水平[(0.83±0.07)、(0.42±0.05)、(0.16±0.02)]、TGF-β1[(152.69±12.39)、(131.45±11.68)、(107.26±10.52)pg/g]、IL-10[(51.65±5.38)、(34.28±2.73)、(27.13±2.64)pg/g]表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05),B7-1[(2.13±0.22)、(4.56±0.51)、(7.29±0.68)]、B7-2[(1.95±0.14)、(4.32±0.41)、(6.83±0.63)]、CD28[(2.02±0.15)、(3.94±0.28)、(7.11±0.84)]mRNA水平逐渐增加(P<0.05)。结论 消水散可抗人胃癌移植瘤恶性腹水作用,可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

基于分子对接技术研究铁线透骨草提取物通过Ca2+/NFATc1信号通路对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的影响

目的基于分子对接技术研究铁线透骨草提取物通过Ca2+/活化T细胞核因子(NFAT)c1信号通路对骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的影响。方法40只SPF级SD雌性大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组各10只,除对照组外均构建骨质疏松大鼠模型,对所有大鼠行骨折造模,造模结束后低、高剂量组分别给予不同剂量铁线透骨草提取液灌胃(100、400 mg/kg),对照组及模型组均给予生理盐水溶液灌胃(5 ml/kg)。给药结束后,观察大鼠骨折端愈合情况并进行评分;检测骨密度水平;苏木素-伊红(HE)染色观察骨痂组织病理结构;采用酶联免疫吸附试验试剂盒检测血清Ca、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;取骨折部位肌肉组织采用Western印迹检测磷酸化(p)-NFATc1蛋白表达。对铁线透骨草提取物中所含活性成分收集与筛选,并对有效成分-靶点进行分子对接。结果相较于对照组,模型组骨质疏松骨折愈合评分、骨密度明显降低,Ca、TNF-α、IL-6水平及p-NFATc1蛋白表达均明显升高(P<0.05);而经不同剂量铁线透骨草提取物给药后,骨折愈合评分、骨密度均明显提高,Ca、TNF-α、IL-6水平及p-NFATc1蛋白表达明显降低(P<0.05)。铁线透骨草提取物中主要活性成分为谷甾醇(sitosterol)、山奈酚(kaempferol)、槲皮素(quercetin),分子对接结果显示与Ca2+靶点对接较好的成分是sitosterol,结合能为-6.24,与NFATc1靶点对接较好的成分是sitosterol,结合能为-6.81。结论铁线透骨草提取物能够显著改善骨质疏松大鼠骨折的愈合情况,并且可能通过调节Ca2+/NFATc1通路,进一步影响炎症反应。