猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。

广东等五省区猴场实验猴血清T淋巴细胞趋向性病毒1型抗体检测分析

为调查广东等地实验猴养殖场猴T淋巴细胞趋向性病毒1型(Simian T-lymphotropic virus 1,STLV-1)的流行情况,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对采集自广东、广西、云南、海南以及河南境内主要猴场的752份实验猴血清样本进行STLV-1抗体检测。结果显示,不同猴场实验猴STLV-1感染率差异较大,其中,云南猴场的感染率最高,达到25%,其次是广东境内的猴场,感染率为5%~13.5%,海南与河南境内猴场的检出率较低,分别为5%和3.13%,广西猴场未检出。按照动物种属划分,恒河猴感染率高于食蟹猴且差异显著(P<0.05)。调查结果可为实验猴生产繁育、质量控制和生物净化提供参考。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

蕈样肉芽肿皮损及外周血人类疱疹病毒1、2、4、5型DNA的检测

目的 探讨蕈样肉芽肿与人类疱疹病毒 1型 (单纯疱疹病毒 1型 )、2型 (单纯疱疹病毒 2型 )、4型 (ep stein barr病毒 )、5型 (人类巨细胞病毒 )间有无相关性。方法 酚 氯仿法提取皮肤组织 (蕈样肉芽肿 3 2份、正常皮肤 2 9份、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓 2 4份 )及外周血白细胞 (蕈样肉芽肿 15份、健康献血员 40份、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓 11份 )中基因组DNA。采用聚合酶链反应技术检测病毒DNA ,扩增产物回收后以限制性内切酶BamHⅠ、SmaⅠ酶切鉴定。结果 蕈样肉芽肿皮损及外周血中 ,各有 2份检测到人类疱疹病毒 1型DNA ;蕈样肉芽肿皮损中有 5份存在人类疱疹病毒 4型DNA ;健康献血员外周血以及正常皮肤、慢性湿疹与慢性单纯性苔藓患者皮损组织及外周血中未检测到此4种病毒DNA。结论 蕈样肉芽肿与人类疱疹病毒 1、2、4、5型间可能不具有相关性。

重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒中国株B’亚型Gag蛋白及免疫效果观察

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。结果显示 :重组病毒能很好地表达Gag蛋白 ,它具有与 7株单克隆抗体结合的抗体表位 ;电镜下可观察到Gag蛋白形成的颗粒。rVV -RL4 2 gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL ,抗体具一定的中和活性 ,且检测到与C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。这些结果表明 ,rVV -RL4 2 gag具有良好的免疫原性 ,可进一步构建表达HIVB′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗。

人T—淋巴营性病毒1型携带者中成人T—细胞白血病的性别死亡专率

据《N Engl J Med》2001年344卷第7期报道 避免气管插管是处理呼吸衰竭、特别是免疫抑制病人的一个主要目的,然而对这些高危病人使用非侵入性通气治疗作用的有关资料则很有限。法国波尔多大学医院Gilles Hilbert医生等,对52例免疫抑制伴肺浸润。

猴STLV1抗体免疫梳检测方法的建立及应用

以基因工程技术制备猴嗜T淋巴细胞病毒I型(STLV1)的STLV1-30蛋白作为诊断抗原,建立用于特异性检测实验猴血清中抗STLV1抗体的免疫梳方法。应用原核表达载体pGEX-4T-1构建STLV1 STLV1-30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果显示,最佳抗原包被量为0.02 mg/mL;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的STLV1阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;该方法能够敏感地检测到1∶400倍稀释的STLV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果显示,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对11份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。表明该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特性,可用于猴T淋巴细胞趋向性病毒I型抗体的检测。

重症患者巨细胞病毒活动性感染与Th1/Th2型细胞因子的研究进展

重症患者巨细胞病毒(CMV)感染率极高,并且CMV感染后多呈潜伏性感染,同时感染CMV的重症患者往往缺乏典型的临床表现。但是当CMV再激活,即CMV活动性感染,此时可严重影响重症患者病情转归,导致多种不良预后的发生。究其机制为,CMV可通过影响辅助性T淋巴细胞1型和2型细胞(Th1/Th2)的功能,即通过调控Th1/Th2产生的细胞因子的数量及比例,来改变机体免疫状态,使CMV难以清除及易于再激活。因此Th1/Th2细胞因子的表达对CMV的再激活、复制和散播有着极其重要的作用及意义。本文就重症患者CMV活动性感染与Th1/Th2型细胞因子相互作用机制的研究进展作一综述。

河南省部分艾滋病患者抗病毒治疗的临床效果以及基因型耐药性分析

目的 了解河南省部分地区HIV 1感染者抗病毒治疗临床效果 ,分析服药依从性与治疗效果关系 ;与未进行抗病毒治疗的患者相比较 ,分析治疗后病毒耐药性突变发生和流行情况。方法通过问卷调查、CD4 +细胞测定评价抗病毒治疗的临床效果 ;用RT PCR方法扩增HIV 1 pol区基因 ,进行基因型耐药性分析。结果 接受抗病毒治疗的人群中 ,坚持服药的病人 55.0 8%病情明显好转 ,而未坚持服药的病人仅有 6 .78%病情明显好转 ,服药依从性对病情趋势变化具有显著影响 (P <0 .0 5) ;接受抗病毒治疗的病人CD4 +淋巴细胞均值为 ( 4 2 9.38± 7.89)个 /μl,未治疗的病人CD4 +淋巴细胞均值为( 2 0 1 .4 3± 8.72 )个 /μl,治疗后患者CD4 +淋巴细胞计数显著高于未治疗的患者 (P <0 .0 5) ;基因型耐药性检测结果表明 ,相对于未经治疗的患者 ,经过抗病毒治疗的患者对逆转录酶抑制剂的耐药性突变显著高于未治疗的患者 ( χ2 =1 9.4 2 85,P <0 .0 5) ;治疗人群与未治疗人群对蛋白酶抑制剂的耐药突变差异无统计学意义 ( χ2 =0 .3478,P <0 .50 ) ;耐药性突变主要发生在CD4 +淋巴细胞 <2 0 0个 /μl病人中。结论 用国产抗病毒药物治疗可取得较好的临床效果 ,服药依从性对治疗效果有重要影响 ,治疗后耐药性突变发生率显著升高 。