基于转录组学分析T-2毒素诱导细胞凋亡作用机制

T-2毒素是一种强毒性单端孢霉烯族毒素,具有多器官效应毒性。为了解T-2毒素对不同细胞系毒性的影响及作用机制,作者分析了T-2毒素暴露对4种细胞系氧化应激、Ca^(2+)水平和凋亡的影响,采用细胞转录组学等技术分析了T-2毒素作用于敏感细胞的关键基因和信号通路。结果表明,相同诱导剂量下,BV2小胶质细胞和HepG2肝癌细胞对T-2毒素敏感,细胞内活性氧(ROS)和Ca^(2+)水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡程度高。转录组学和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)结果显示,T-2毒素可通过MAPK/AP-1、TNF-NF-κB信号通路并上调AP-1、白细胞介素-6(IL-6)等因子水平引起BV2细胞炎症反应。而与氧化应激和凋亡相关的PI3K/AKT、PERK/P53/Casp3信号通路,通过下调Akt、SIRT1等促凋亡因子并上调超氧化物歧化酶促进了HepG2细胞的凋亡。T-2毒素分别通过促炎和氧化应激相关信号通路诱导BV2细胞和HepG2细胞凋亡,说明T-2毒素可通过不同的分子机制对不同器官产生特异性毒性效应。

氧化锌纳米颗粒光催化降解T-2毒素性能分析

为了利用光催化技术实现T-2毒素的高效、绿色降解,本研究采用绿色温和的溶剂水热法制备出结晶度高、分散性良好的0D ZnO纳米颗粒光催化材料,并通过高分辨透射电子显微镜、瞬态光电流响应等表征手段对其性质以及光催化降解T-2毒素性能、影响因素和机理进行探究。结果表明:成功制备得到平均粒径约为43.23 nm的ZnO纳米颗粒,经条件优化后可以在240 min内通过光催化降解去除超过95%初始质量浓度为5μg/mL的T-2毒素,降解动力学常数达0.0299μg/(mL·min),催化剂最佳质量浓度为0.5 mg/mL,最佳适用体系的pH值为5~9。光电表征结果确定了ZnO具有良好的光吸收和响应性能以及电荷分离性能,并确定羟自由基在T-2毒素降解中起主导作用。本实验结果可为相关领域绿色高效降解、转化和去除T-2毒素提供有效理论参考和技术支持。

辉光放电等离子体降解啤酒中T-2毒素

目的:探讨辉光放电等离子体(GDP)降解啤酒中T-2毒素的最佳工艺及对啤酒理化指标的影响。方法:通过Box-Behnken方法进行四因素三水平的响应面优化试验,确定啤酒中T-2毒素的最佳降解条件。结果:当放电电压为570 V,作用时间为18 min,放电电流为99 mA,T-2毒素初始质量浓度为8.5μg/mL时,T-2毒素降解效率最高(89.21%);经GDP处理后,啤酒泡持性显著降低(P<0.05),其他指标无明显变化。结论:通过响应面优化模型获得的GDP最佳降解条件可以用于啤酒中T-2毒素的降解;GDP处理能够影响啤酒泡持性,但对其他指标无明显影响。

碳化钒免疫层析法检测玉米中T-2毒素

旨在构建一种碳化钒免疫层析试纸条,用于现场灵敏检测玉米中T-2毒素。通过超声辅助-液相剥离法合成碳化钒纳米片(vanadium carbide nanosheets,VCNSs),与T-2单克隆抗体(T-2 monoclonal antibody,T-2-mAb)偶联标记,作为信号探针。基于竞争原理,样品中的T-2毒素与检测线(T线)上T-2抗原竞争结合黑色的VCNSs-mAb探针,试纸条T线读值与T-2毒素质量浓度呈反比。以空白试纸条T线显色情况(信号读值>800,MD-600金标读数仪检测)和0.5、1.5 ng/mL T-2毒素的抑制率为优化指标,获得最佳实验条件,建立标准曲线。结果表明:该方法检测T-2毒素的线性范围在0.14~0.78 ng/mL之间、视觉检出限为0.25 ng/mL、消线值为1.5 ng/mL、半抑制浓度为0.344 ng/mL,灵敏度较传统胶体金试纸条提高了5.6倍。此外,该方法与其他5种常见真菌毒素均无交叉反应。针对玉米样品进行真实检测,回收率在92.8%~117.2%之间、变异系数均小于9.13%、检出限为5.06μg/kg。综上所述,该方法具有操作简便、快速灵敏和成本低等优点,为谷物中T-2的检测提供一定的现场快速检测技术。

T-2毒素毒性分子作用机制与脱毒的研究进展

T-2毒素是一种A类单端孢霉烯族毒素,具有高度致毒作用、毒性较难降解等特点,严重威胁人类和动物安全。目前,用于T-2毒素脱毒的方法有物理吸附法、化学试剂中和法、微生物分解法等。但T-2毒素导致的中毒反应的分子机制还尚未明确,可能涉及多个方面,如线粒体损伤、细胞自噬、免疫逃逸、细胞凋亡等。因此,文章主要探讨了T-2毒素毒性作用分子机制以及T-2毒素脱毒的研究进展,为T-2毒素的深入研究提供参考。

我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A和伏马毒素的污染研究

本试验旨在研究我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)和伏马毒素(FUM)的单独及联合污染情况。分别对从我国不同地区采集474、385和1905份饲料原料和配合饲料样品,进行T-2毒素、OTA和FUM含量检测。结果显示:饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM总污染率分别为26.8%、61.8%和59.3%,其含量平均值分别为0~45.8μg/kg、0.3~11.1μg/kg和0~16.3 mg/kg。值得注意的是,分别有0.4%、0.3%和0.5%的饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM含量超过了我国《饲料卫生标准》,并且,60%以上的饲料原料中霉菌毒素的联合污染率达30.3%~88.9%。由此可见,我国饲料原料和配合饲料中T-2毒素、OTA和FUM的污染较严重,生产中加强监测我国饲料原料和配合饲料中上述霉菌毒素的污染情况和实施相关防控措施尤为重要。

荧光免疫层析定量检测卡在快速检测T-2毒素中的应用

对T-2毒素荧光免疫层析定量检测卡在快速检测中的应用进行了评价,确定T-2毒素荧光免疫层析定量检测卡在不同样本基质中的检出限和定量限,同时对检测卡的准确度、重复性、特异性、与大型仪器确证法检测结果的一致性进行了评测。结果显示,检测卡检测玉米、小麦、配合饲料中T-2毒素的检出限分别为9.63、10.96、13.25μg/kg,定量限分别为11.61、14.32、16.19μg/kg;批内回收率在80.0%~98.2%,批内变异系数为4.9%~10.5%,批间回收率在84.0%~97.4%,批间变异系数为4.3%~8.6%;与黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素交叉反应率分别为0.09%、0.04%、0.08%、0.11%;与免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测结果相对偏差≤0.15。结果表明,T-2毒素荧光免疫层析定量检测卡具有灵敏、准确、定量、快速检测等特点,为谷物等农产品和饲料样本的T-2毒素检测提供了一种操作简单、省时省力、能满足市场快速检测需求的荧光免疫层析定量检测产品。

免疫亲和柱净化-液相色谱质谱法对粮谷中T-2与HT-2毒素的测定

建立了免疫亲和柱净化-液相色谱质谱法同时检测粮谷中T-2和HT-2毒素的方法。样品经乙腈-水(体积比80∶20)混合溶剂提取,免疫亲和柱(Bond Elut(Mycotoxin)净化后,采用液相色谱质谱(HPLC-MS)测定。T-2和HT-2毒素在0.005～0.5mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9990;在0.01、0.05、0.10、0.2mg/kg的加标水平下,2种毒素的平均回收率为76%～90%,相对标准偏差为2.8%～7.6%;T-2和HT-2毒素的检出限(S/N=3)分别为0.001、0.002mg/kg。

T-2毒素的毒性效应及致毒机制研究进展

T-2毒素是由多种镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物中毒性较强的一种毒素,广泛存在于谷物和谷类食品中。经食物连续摄入T-2毒素会对人类和动物的健康造成潜在危害。目前,T-2毒素对人和动物健康的影响受到了社会的广泛关注,已成为毒理学领域研究的热点课题之一。在综述了T-2毒素的生物转化、代谢途径及其毒理学效应与机制基础上,对现有研究的不足和今后的研究方向进行了讨论,特别是在T-2毒素的精确分析检测和毒理学研究系统化等方面展开探讨。

高效液相色谱-串联质谱法测定3种水产品中的T-2毒素与HT-2毒素

建立高效液相色谱-串联质谱定量快速检测罗非鱼、南美白对虾和黄金贝中的T-2毒素与HT-2毒素方法。以10 mL乙酸乙酯作为提取溶剂,振荡提取,无水硫酸钠除水,定量移取5 mL提取液氮气吹干后用1 mL含有0.1%甲酸的甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液（3∶7,V/V）复溶,正己烷脱脂净化,基质匹配法外标定量。3种水产品中T-2毒素和HT-2毒素的检出限分别为2μg/kg和4μg/kg。T-2毒素质量浓度为2～100 ng/mL,HT-2毒素质量浓度为4～200 ng/mL,范围内线性良好。在3种样本中进行3个水平添加实验（n=6）,T-2毒素回收率为84.3%～109.9%,HT-2毒素的回收率为90.9%～103.2%。T-2毒素的相对标准偏差为2.0%～8.7%,HT-2毒素的相对标准偏差为2.6%～10.6%。本方法简便快速、准确度好、精密度高,适用于3种代表性水产品中T-2与HT-2毒素的同时检测。

QuEChERS-质谱联用仪法测定发酵茶中T-2毒素含量

本文建立QuEChERS-液相质谱联用法测定发酵茶中T-2毒素的含量。茶叶样品粉碎后,样品经乙腈超声均质提取,HC-C18去除大部分杂质,采用增强型碳氢键的非极性化合物PSA净化后,使用高性能液相色谱-串联质谱法多反应监测扫描模式进行定性定量分析。T-2毒素在5~100 ng·mL^(-1)浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数为0.999,检出限为5μg·kg^(-1),在5、20、80μL三个不同加标水平下,T-2毒素回收率在85.01%~87.80%内,相对标准偏差(RSD)为1.05%。该方法灵敏度高、回收率稳定、检测快速、定量准确。适用于检测发酵茶叶中的T-2毒素。

T-2毒素和HT-2毒素检测方法的研究进展

T-2毒素和HT-2毒素属于单端孢霉烯族毒素。T-2毒素是A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种真菌毒素,HT-2毒素为T-2毒素在体内与体外最为主要的代谢产物,二者在自然界中分布广泛。对T-2毒素和HT-2毒素检测方法的研究进展进行综述,对二者常见检测方法的优点和缺点进行分析,以期为T-2毒素和HT-2毒素检测方法的科学选择提供参考。

T-2四醇的研制

目的旨在合成Ｔ－２四醇，为进一步研究Ｔ－２毒素的代谢机制奠定基础。方法运用水解、提取、纯化等化学手段将Ｔ－２转化为Ｔ－２四醇，使用气谱法检测Ｔ－２四醇。结果按Ｂａｍｂｕｒｇ的方法合成Ｔ－２四醇，１０ｍｇＴ－２毒素生成０．８３６４ｍｇＴ－２四醇。用气谱法检测表明，合成物与标准品一致。结论方法简便、易行。

T-2毒素对软骨Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成的影响以及硒的保护作用

目的探讨T-2毒素对软骨细胞主要间质成分Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成的影响和硒的保护作用。方法采用 MTT法检测T-2毒素对软骨细胞存活率的影响;用TB染色法检测人软骨细胞蛋白聚糖表达;免疫组织化学检测人软骨细胞胶原蛋白Ⅱ表达;RT-PCR检测人软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖mRNA表达。结果 T-2毒素在浓度为 0．001-2 mg／L的范围内,对软骨细胞的作用呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系,而且随着作用时间的延长,浓度依赖关系更加明显。T-2毒素(10～20μg／L)可以抑制软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖的合成及其mRNA表达。而加硒能较明显刺激软骨细胞蛋白聚糖mRNA表达,部分减弱T-2毒素的这种抑制,有一定的保护作用,但不显示对T-2 毒素引起的Ⅱ型胶原蛋白及其mRNA表达的保护作用。结论 T-2毒素对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖合成有明显的抑制作用,微量元素硒对T-2毒素引起的软骨细胞蛋白聚糖改变有一定保护作用。

大骨节病和克山病老病区粮食中T-2毒素和黄绿青霉素污染状况调查

目的观察大骨节病与克山病老病区丰田村和林茂村地产粮食中T鄄2毒素和黄绿青霉素(CIT)的污染状况。方法选40岁以上自愿者作右手X线拍片检查,评估大骨节病历史患病情况;收集文献数据评估克山病历史病情;用ELISA法和高效液相色谱(HPLC)法检测病区地产粮食T鄄2毒素和CIT。结果丰田村和林茂村成人大骨节病患病率很高,是历史上的严重病区。地产面粉中T鄄2毒素阳性检出率为77.78%,T鄄2毒素平均水平为120.64 μg/kg;地产玉米面中CIT阳性检出率为42.31%,CIT毒素平均水平为12.33 μg/kg,均明显地高出本省市场同类粮食。结论丰田村和林茂村是大骨节病、克山病历史上的严重病区,地产粮食中T鄄2毒素、CIT 水平仍然相当高,如果不是当地粮食占居民主食中的比例已经很小(< 20%),这两种病的当前检出率也许达不到现在程度的低水平。

免疫亲和柱净化/柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测法测定粮谷中的T-2毒素

建立了免疫亲和柱净化／柱前衍生化-高效液相色谱荧光检测器测定粮谷中T-2毒素含量的方法。样品经甲醇-水（体积比为80：20）混合溶剂提取，通过免疫亲和柱（IAC）净化，以氰酸蒽（1-AN）为衍生化试剂、4-二甲基氨基吡啶（DMAP）为催化剂进行衍生，以ZORBAX Eclipse XDB-C18柱为分离柱，乙腈-水（体积比为80：20）为流动相进行高效液相色谱分离及荧光检测，荧光检测的激发波长为381nm，发射波长为470nm。T-2毒素的质量浓度为0．01～1．5mg／L时与峰高呈良好的线性，相关系数为0．9985。在0．01～1．5μg／g添加水平下，回收率为79．7％～94．5％，相对标准偏差小于7％；检出限（S/N=3）为0．01μg／g。该方法净化效果好，灵敏度高，操作简便快速。

T-2毒素对胎儿软骨细胞凋亡、Bcl-2和Bax表达的影响及硒的保护作用

目的探讨T-2毒素对软骨细胞凋亡的作用,和对凋亡调控蛋白Bcl-2与Bax表达的影响,以及微量元素硒对软骨细胞的保护作用.方法采用电镜,Annexin V/PI法检测T-2毒素致人软骨细胞凋亡的情况,采用流式细胞仪检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变;不同浓度(1～20μg/L)的T-2毒素均可以引起软骨细胞早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加,且在一定范围内呈浓度依赖性,T-2毒素浓度为20μg/L时早期凋亡率最高达5.60%,晚期凋亡率最高达8.61%.生理浓度的微量元素硒可部分减弱T-2毒素引起的凋亡;不同浓度(1～20μg/L)的 T-2毒素都能引起Bcl-2和Bax表达水平提高,浓度为10～20μg/L时,Bax/Bcl-2比值升高;硒能部分对抗T-2毒素引起的Bcl-2和Bax 表达的提高,使Bax/Bcl-2比值下降,以降低凋亡率.结论 T-2毒素在浓度为1～20μg/L时,可以引起软骨细胞凋亡;T-2毒素引起的软骨细胞凋亡与软骨细胞内Bax/Bcl-2比值升高有关,硒对T-2毒素引起的软骨细胞凋亡有一定保护作用.

硫酸软骨素纳米硒可抑制T-2毒素诱导的大骨节病软骨细胞凋亡

目的确定硫酸软骨素纳米硒对T-2毒素干预体外大骨节病软骨细胞生长的影响。方法合成并表征硫酸软骨素纳米硒粒子,依据《大骨节病临床诊断标准》(WS/T 207-2010),选择Ⅱ/Ⅲ度KBD患者6例关节软骨进行体外分离、培养。分别给予硫酸软骨素纳米硒联合T-2毒素进行干预,采用MTT、HE染色和流式细胞仪观察细胞生长和凋亡的变化。结果合成的硫酸软骨素纳米硒中硒的含量为10.1%,可在蒸馏水中自组装成粒径为30-200 nm纳米粒子,红外图谱提示纳米硒与硫酸软骨素可能以共价键的方式结合;硫酸软骨素纳米硒在浓度为50-200 ng/ml可有效抑制20 ng/ml T-2毒素诱导大骨节病软骨细胞的凋亡作用,降低T-2毒素诱导软骨细胞的早期凋亡率[(8.64±1.57)%,P<0.05]。结论硫酸软骨素纳米硒具有抗T-2毒素诱导软骨细胞凋亡的作用,可作为一种潜在的治疗大骨节病的药物制剂。

一氧化氮和Fas在T-2毒素诱导的软骨细胞凋亡中的作用研究

目的探讨T-2毒素致软骨细胞凋亡与一氧化氮（NO）和Fas凋亡途径的关系。方法采用MTT法检测T-2毒素对软骨细胞存活率的影响；Annexin V／PI法和电镜观察研究T-2毒素致人软骨细胞凋亡的作用；用Griess重氮化法，测定T-2毒素作用于软骨细胞培养上清液中NO含量；Western Blotting检测T-2毒素对人软骨细胞表达一氧化氮合酶（iNOS）和Fas蛋白的影响。统计分析T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡与其分泌NO、iNOS和Fas蛋白的相关性。结果T-2毒素在浓度为1～2000ng／mL的范围内，对软骨细胞存活率的作用呈较典型的浓度依赖关系和时间依赖关系，而且随着作用时间的延长，浓度依赖关系更为明显；T-2毒素可引起软骨细胞发生凋亡的典型电镜形态改变，并使早期凋亡率和晚期凋亡率明显增加，在一定范围内呈浓度依赖性；T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白；T-2毒素使凋亡相关蛋白Fas表达增多；软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白和Fas蛋白量与T-2毒素诱导人软骨细胞凋亡率均有正相关性。结论T-2毒索引起的软骨细胞凋亡与T-2毒素刺激软骨细胞分泌NO和表达iNOS蛋白增多有关，并与凋亡相关蛋白Fas表达增多有关。

T-2毒素致大鼠心肌损伤的实验研究

目的 对低硒条件下 ,T- 2毒素损伤大鼠心肌的机制进行实验研究 ,探讨克山病的发病原因。方法 采用低硒饲料喂养大鼠 ,用 T- 2毒素亚急性损伤心肌的动物模型 ,应用原位末端标记法和免疫组化技术检测大鼠心肌细胞凋亡和检测心肌中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活性。结果 低硒加 T- 2毒素组大鼠心肌损伤较重 ,凋亡细胞检出较多 ,常硒饲料加 T- 2毒素与低硒饲料加 T- 2毒素组均可见心肌坏死 ;这 2个组心肌组织GSH- Px活性降低 ,心肌中可检出凋亡细胞 ;而后者损伤严重。结论 T- 2毒素可使大鼠心肌损伤 ,在低硒条件下 ,这种损伤加重。低硒条件下 ,T- 2毒素损伤大鼠心肌的机制与脂质过氧化和细胞凋亡有关。