EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测

为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。

人类红细胞RhD抗原的T-B细胞联合表位的生物信息学预测

目的研究红细胞血型系统RhD抗原的蛋白质结构,预测该抗原的T-B细胞联合表位,准确定位T-B联合表位在抗原表面的分布情况。方法采用各种预测软件和在线预测工具,根据RhD抗原的理化性质预测其蛋白质二级结构以及T、B细胞表位,获得T-B联合表位所在的氨基酸残基的位置。结果红细胞RhD抗原有T-B联合表位2个,氨基酸残基所在的位置:36-54,66-82。结论经过生物信息学方法计算获得的2个表位可以作为确定人类红细胞RhD抗原潜在T-B联合优势表位的参考。

钩端螺旋体外膜蛋白 Loa22优势 T-B联合抗原表位及其免疫原性研究

目的：筛选并鉴定致病性问号钩端螺旋体（简称钩体）外膜蛋白Loa22优势T细胞和B细胞（ T／B）联合抗原表位及其免疫原性。方法采用PCR检测我国流行的8群8型株问号钩体loa22基因，T-A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株loa22基因原核表达系统。 Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rLoa22并制备其兔抗血清及其IgG。采用生物信息学软件预测Loa22的T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合Western blot法、ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白展示的T-B联合表位肽和人工合成T-B联合表位肽的免疫原性。采用MTS法和ELISA分别检测T-B联合表位肽诱导T细胞活化及其分泌IL-2、IL-4和IFN-γ情况。结果所有受检的致病性钩体株均能检出loa22基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性高达85．5％～99．8％和93．9％～99．5％。所构建的loa22基因原核表达系统能高效表达rLoa22。 Loa22-77、Loa22-90、Loa22-125和Loa22-157这4个T-B联合抗原表位中，仅有Loa22-90显示了很强的Western blot阳性条带。 Loa22-90能有效诱导CD4＋T细胞增殖及IL-2（Th1）和IL-4（Th2）水平显著升高（P＜0．05）。结论 Loa22是问号钩体序列保守的属特异性外膜蛋白抗原，其优势T-B联合抗原表位为Loa22-90，该表位可作为钩端螺旋体多抗原肽疫苗的候选表位。

幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL优势T—B联合抗原表位的鉴定

目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞（T．B）联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统，SDS—PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况。Ni—NTA亲和层析法提纯rGroEL。采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株中GroEL分布。TritonX-114法提取上述菌株外膜蛋白样本，采用Westernblot法检测外膜蛋白样本中的GroEL。采用专业生物信息学软件预测GroEL的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统。采用Westernblot法和ELISA分别检测含T—B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T—B联合表位肽的免疫反应性。结果幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株groEL基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97．68％-99．63％。所构建原核表达系统能有效表达可溶性rGroEL。GroEL定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜。GroEL168、GroEL258、GroEL288、GroEL365、GroEL396和GroEIA38六个主要的预测T—B联合抗原表位中，GroEL168显示了很强的阳性杂交信号。ELISA结果显示，GroEL168免疫反应性最强（P〈0．01），其次为GroEL258和GroEL288（P〈0．05）。结论GroEL是幽门螺杆菌外膜蛋白。GroEL168是GroEL的优势T-B联合抗原表位，可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗。