新型结核病疫苗T-BioVax与Poly(I:C)和DDA配伍后的免疫效果初步评价

目的对新型结核病疫苗T-BioVax及其与聚肌胞苷酸Poly(I∶C)、二甲基三十六烷基铵(dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA)佐剂配伍后的免疫效果进行初步评价,并验证体外分枝杆菌生长抑制试验(mycobacteria growth inhibition assay,MGIA)评价结核病疫苗效力的可行性。方法将BALB/c小鼠随机分成4组,1组于腹股沟皮下免疫T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA 2针,间隔3周; 3组分别免疫T-BioVax、BCG(Danish 1331)或生理盐水(normal saline,NS)为对照,其中BCG(Danish 1331)组经皮内免疫一针,另2组免疫程序与T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组相同。分别在第4、6、7、9周通过ELISA检测小鼠血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平;在第4周通过ELISPOT检测脾脏淋巴细胞分泌的细胞因子IFN-γ和IL-17;在第6周和第9周通过MGIA来评价疫苗效力。结果抗体检测结果显示,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG和IgG1抗体水平均高于T-BioVax组和BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05); T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平高于T-BioVax组,差异有统计学意义(P<0.05); T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组T-BioVax特异性IgG2a抗体水平在第4周和第7周高于BCG(Danish 1331)组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISPOT检测结果显示,除了在2.5μg/孔的T-BioVax抗原刺激时,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ的斑点形成细胞(Spot forming cells,SFC)数量与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=0.632 8,P=0.969 4)外,T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组诱导产生的细胞因子IFN-γ和IL-17的SFC数量均高于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。MGIA结果显示,第6周T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组和BCG(Danish 1331)组共培养的CFU数均低于T-BioVax组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05),T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组共培养的CFU数与BCG(Danish 1331)组差异无统计学意义(q=2.067,P=0.478 9);第9周T-BioVax+Poly(I∶C)+DDA组共培养的CFU数低于T-BioVax组、BCG(Danish 1331)组和NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核病疫苗T-BioVax与Poly(I∶C)、DDA佐剂配伍后,免疫原性得到了增强,诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫应答都得到了提高,MGIA试验结果也显示疫苗对结核杆菌生长的抑制效果得到了提高,与体液免疫和细胞免疫结果相一致,初步表明该方法建立成功。