利用Inverse PCR快速筛选单个T-DNA拷贝转基因水稻植株的方法

为了获得单个T-DNA插入拷贝的植株, 我们建立了一套利用Inverse PCR(IPCR)快速检测转基因水稻中T-DNA拷贝数的方法。用IPCR的方法可以扩增出与已知T-DNA序列相邻的水稻基因组DNA未知序列,由此推测转基因水稻植株中T-DNA的拷贝数。我们共对15个转化株系20棵不同植株的DNA进行了IPCR检测。其中12株表现为T-DNA单拷贝插入,3株为双拷贝插入,1株为三拷贝插入。另外4株未检测到T-DNA插入拷贝。IPCR分析结果经过Southern杂交和测序的验证。

提高水稻插入突变体库利用效率的尝试

T-DNA标签法是一种以农杆菌介导的遗传转化为基础来创造插入突变体库,从而高通量地分离和克隆植物功能基因的方法。但由于种种原因,水稻插入突变体库的利用效率较低。为了提高水稻插入突变体库的利用效率,结合水稻一个双拷贝T-DNA插入突变体的发现和鉴定研究,通过特异PCR检测、侧翼序列与目标性状的共分离分析,在1个双插入位点均为杂合的植株的后代株系中分拆了2个插入事件,分离出目标性状存在遗传分离且只带有1个插入事件的后代株系,为后续的共分离检测和基因克隆研究打下了重要的基础。由此产生了对插入突变体库中的非串联多拷贝插入标签系进行研究的一些思路和方法,提出来与同行商榷。