转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3及CD4~＋CD25~＋调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

本研究旨在探讨转录因子T-bet、GATA-3和CD4+CD25+调节性T细胞及其转录因子FoxP3在儿童过敏性紫癜(HSP)发病机制中的作用。2009年2月-2010年2月在本院收治的46例急性期HSP患儿(HSP组)及30例健康对照儿童(对照组)纳入研究。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA-3及FoxP3 mRNA的表达。运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群CD4+CD25+的表达。结果表明,HSP组患儿GATA-3 mRNA相对表达水平(964.30±655.18)显著高于对照组儿童GATA-3 mRNA相对表达水平(78.09±57.20,P<0.01)。HSP组患儿T-bet mRNA(53.98±35.79)、FoxP3 mRNA(32.17±23.04)和CD4+CD25+(5.34±2.51)相对表达水平低于对照组儿童T-bet mRNA(181.56±96.90)、FoxP3 mRNA(147.91±99.15)和CD4+CD25+(7.85±1.97)相对表达水平(P<0.01)。结论:HSP患儿急性期存在Th1特异性转录因子T-betmRNA表达下调,Th2特异性转录因子GATA-3 mRNA表达上调。HSP患儿急性期存在CD4+CD25+调节性T细胞及其特异性转录因子FoxP3 mRNA表达下调,调节性T细胞的减少及由此引发的免疫抑制效应不足可能是HSP急性期免疫失衡的重要原因之一。本研究为从调节性T细胞及其调控的分子机制角度进一步阐明儿童HSP的发病机制提供了实验依据。

T-bet、GATA-3、FoxP3及CD_4^+CD_(25)^+调节性T细胞在AA发病机制中的作用

目的探讨转录因子T-bet、GATA-3和CD+4CD+25调节性T细胞及其转录因子FoxP3在再生障碍性贫血(AA)发病机制中的作用。方法选择AA患者27例(AA组)、体检健康者25例(对照组),采用RT-PCR技术检测两组外周血单个核细胞(PBMCs)中Th1、Th2细胞及CD4+CD2+5调节性T细胞特异性转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3 mR-NA的表达,运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群,ELISA法检测血浆中Th1和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4水平。结果与对照组相比,AA组的血浆T-bet mRNA相对表达量升高(P<0.01),GATA-3与FoxP3 mRNA相对表达量降低(P<0.05,P<0.01);AA组外周血中CD+3、CD+3CD+8T细胞占淋巴细胞的百分比较对照组升高(P均<0.05),CD+3CD+4、CD+4CD+25T细胞占淋巴细胞的百分比和CD+4/CD+8值较对照组降低(P<0.05或P<0.01);AA组血浆中IFN-γ水平及IFN-γ/IL-4高于对照组(P均<0.01)。结论 AA患者存在CD+4CD+25调节性T细胞及其特异性转录因子FoxP3 mRNA表达下调,调节性T细胞的减少及由此引起免疫抑制效应不足可能是AA发生的重要原因之一。

急慢性MCMV感染对小鼠脾细胞Foxp3/T-bet/GATA-3蛋白表达水平的影响

目的:在整体水平研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠辅助性T细胞亚群Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)分化特异性转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平的影响。方法:建立MCMV播散型感染模型,依据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28天为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种MCMV Smith株后第1、3、7、14、28、45天和60天各处死6只,分离脾细胞;另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。Western blot法检测脾细胞中特异转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平。结果:MCMV感染后第3天T-bet蛋白表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较有显著差异(P<0.01),随后下降,第28天后降至模拟感染对照组相当水平;而GATA-3蛋白表达在感染后第3天开始升高,第7天达峰值(P<0.01),第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于模拟感染对照组(P<0.05);Foxp3蛋白表达在感染后7天明显低于模拟感染对照组,第28天降至最低(P<0.01),第45天和60天表达明显上调,并显著高于模拟感染对照组水平(P<0.05)。结论:感染急性期,MCMV上调Th1/Th2特异性转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期,MCMV诱导Treg特异性转录因子Foxp3蛋白表达上调,同时显著抑制T-bet和GATA-3蛋白表达,提示CMV诱导Foxp3表达增加可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因。

人脂肪间充质干细胞对再生障碍性贫血T淋巴细胞的免疫调节作用

目的研究人脂肪间充质干细胞(haMSCs)对再生障碍性贫血(AA)T淋巴细胞(TLCs)的作用,初步探讨其治疗AA的机制。方法从人脂肪中提取并培养haMSCs;从AA患者外周血中分离T淋巴细胞(AA-TLCs);将两者共培养后,MTT法检测细胞增殖;real-time RCR和Western blot测定T-bet和GATA-3的表达,ELISA法检测上清IL-2、IL-4、IL-10和INF-γ的水平。结果 HaMSC呈时间依赖性的抑制AA-TLCs的增殖,AA-TLCs与haMSCs共培养3、5和7 d后的抑制率分别为34.94%±10.11%、53.44%±6.16%和68.13%±15.24%(P<0.05);haMSC能够下调AA-TLCs转录因子T-bet的表达,同时上调GATA-3的表达(P<0.05);haMSCs能够升高Th2类细胞因子IL-4、IL-10的水平,降低Th1类细胞因子INF-γ、IL-2的水平。[MSCs+AA-TLCs组:IL-4(88.6±15.2)ng/L、INF-γ(8.7±2.7)ng/L;AA-TLCs组:IL-4(1.4±0.6)ng/L、INF-γ(41.5±3.7)ng/L(P<0.05)]。结论 HaMSCs在体外对AA患者TLCs具有免疫调节作用,其机制可能是通过调节转录因子T-bet和GATA-3的表达从而抑制Th细胞向Th1细胞方向分化。

儿童性哮喘与CC16及T-bet/GATA-3失衡的研究进展

TH1/TH2失衡是儿童性哮喘发病的主要机制,T-bet和GATA-3分别作为促Th1细胞分化和促TH2细胞分化的关键转录因子,其比值(T-bet/GATA-3)可以用来衡量Th1/Th2平衡。由远端细支气管上的非纤毛上皮细胞Clara细胞分泌的CC16,具有抗炎、抗氧化、抗纤维化、免疫调节等生物学活性,与儿童性哮喘的发生发展密切相关。那么,CC16是否是通过作用于T-bet/GATA-3而恢复Th1/Th2平衡,从而缓解儿童性哮喘?本文就儿童性哮喘、CC16、T-bet/GATA-3失衡三者之间的联系作一综述.

泡球蚴原头蚴抗原和卡介苗对Th1/Th2转录因子和细胞因子的影响

目的探讨泡球蚴原头蚴抗原和卡介苗免疫小鼠对泡球蚴攻击感染的调节机制。方法用实时定量聚合酶链反应检测鼠脾组织中GATA-3及T-bet的mRNA表达水平;酶联免疫吸附法检测鼠血清中白介素4和γ干扰素的含量。结果卡介苗免疫攻击组与PBS对照组的转录因子(T-bet mRNA)和其标志性细胞因子(INF-γ)的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验证明卡介苗(BCG)有上调Th1型免疫反应的作用,用BCG可以干预或治疗由泡球蚴抗原诱导的晚期泡球蚴(AE)动物的免疫抑制状态。

T-bet基因传递对支气管哮喘模型小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节作用

目的应用携带T-bet基因的重组腺相关病毒载体（rAAV-T-bet）经鼻干预支气管哮喘（哮喘）小鼠模型，探讨T-bet基因传递对哮喘小鼠T淋巴细胞亚群的免疫调节及改善炎症的作用。方法采用随机数字表法将40只健康的6～8周龄SPF级Balb／c小鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、rAAV介导的增强型绿色荧光蛋白（rAAV．eGFP）干预对照组（C组）及rAAV-T-bet干预组（D组），每组10只。B、c、D组以卵清蛋白（OVA）致敏和激发，建立哮喘小鼠模型，其中C、D组在第18、19天分别经鼻滴入等剂量rAAV-eGFP、rAAV．T-bet进行干预；B组处理方法同上，以等剂量的9g／L盐水干预。于最后-次激发24h后处死小鼠并取材。应用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织中转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3水平；计数BALF中细胞总数并分析其细胞类型；ELISA法测定BALF中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5表达水平。结果1．B组、C组中T-bet表达细胞的阳性率均明显低于A组（P均〈0．05），GATA-3表达细胞的阳性率明显高于A组（P均〈0．05），D组中T-bet表达明显增强，GATA-3表达则显著下降（P均〈0．05），Foxp3的表达阳性率在各组间的差异与T-bet的表达类似。2．D组BALF中细胞总数为（0．35±0．11）×10^9／L，其中EOS比例为0．04±0．02，虽高于A组，但明显低于B、C组（P均〈0．05）；IL-4和IL-5分别为（158±55）ng／L、（68±22）ng／L，显著低于B、C组（P均〈0．05），高于A组但差异无统计学意义（P均〉0．05），而IFL-γ水平[（113±35）ng／L]明显低于B、C组（P均〈0．05），与A组比较水平相近（P〉0．05）。结论在建立小鼠哮喘模型的基础上，经鼻应用rAAV-T-bet干预可使T-bet基因顺利定向插入到受转染细胞的基因组中，成功编码T-bet蛋白，并进-步对哮喘小鼠模型发挥相应的免疫调节作用。