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旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增 被引量:9
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作者 阎玉河 朱元晓 +3 位作者 许威光 陈辉 马增全 王克领 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期262-267,共6页
用改进的AGPC法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总RNA。每0.1ml压积虫体可获得100μg的RNA,其A260与A280及A260与A230的比值均接近于2,变性琼脂糖凝胶电泳显示,旋毛虫肌幼虫总RNA缺少大部分真核生... 用改进的AGPC法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总RNA。每0.1ml压积虫体可获得100μg的RNA,其A260与A280及A260与A230的比值均接近于2,变性琼脂糖凝胶电泳显示,旋毛虫肌幼虫总RNA缺少大部分真核生物所具有的28SrRNA。通过比较研究,筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应(PCR)直接从总RNA中进行目的基因的扩增,得到一分子量为0.7kb的DNA。通过限制性内切酶对其消化鉴定,证明扩增片段中的酶切位点与已知序列中的完全一致。 展开更多
关键词 旋毛虫 rna pcr dna
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抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建
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作者 温儒民 张俊杰 +4 位作者 陈家存 薛松 胡书群 孙亚峰 裴冬生 《世界肿瘤杂志》 2005年第1期21-23,共3页
目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),... 目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体。 展开更多
关键词 重链可变区基因 原核表达载体 单克隆抗体 人膀胱癌 Rt-pcr扩增 t4dna连接酶 免疫球蛋白重链 cdna片段 重组质粒 BDI-1 杂交瘤细胞 pcr产物 HindⅢ rna 酶切鉴定 序列分析 克隆测序 鉴定结果 序列长度 H基因 氨基酸
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