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旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增
被引量:
9
1
作者
阎玉河
朱元晓
+3 位作者
许威光
陈辉
马增全
王克领
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第3期262-267,共6页
用改进的AGPC法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总RNA。每0.1ml压积虫体可获得100μg的RNA,其A260与A280及A260与A230的比值均接近于2,变性琼脂糖凝胶电泳显示,旋毛虫肌幼虫总RNA缺少大部分真核生...
用改进的AGPC法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总RNA。每0.1ml压积虫体可获得100μg的RNA,其A260与A280及A260与A230的比值均接近于2,变性琼脂糖凝胶电泳显示,旋毛虫肌幼虫总RNA缺少大部分真核生物所具有的28SrRNA。通过比较研究,筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应(PCR)直接从总RNA中进行目的基因的扩增,得到一分子量为0.7kb的DNA。通过限制性内切酶对其消化鉴定,证明扩增片段中的酶切位点与已知序列中的完全一致。
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关键词
旋毛虫
rna
pcr
dna
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职称材料
抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建
2
作者
温儒民
张俊杰
+4 位作者
陈家存
薛松
胡书群
孙亚峰
裴冬生
《世界肿瘤杂志》
2005年第1期21-23,共3页
目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),...
目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体。
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关键词
重链可变区基因
原核表达载体
单克隆抗体
人膀胱癌
R
t
-
pcr
扩增
t
4
dna
连接酶
免疫球蛋白重链
c
dna
片段
重组质粒
BDI-1
杂交瘤细胞
pcr
产物
HindⅢ
总
rna
酶切鉴定
序列分析
克隆测序
鉴定结果
序列长度
H基因
氨基酸
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职称材料
题名
旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增
被引量:
9
1
作者
阎玉河
朱元晓
许威光
陈辉
马增全
王克领
机构
河南省农科院畜牧兽医研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第3期262-267,共6页
文摘
用改进的AGPC法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总RNA。每0.1ml压积虫体可获得100μg的RNA,其A260与A280及A260与A230的比值均接近于2,变性琼脂糖凝胶电泳显示,旋毛虫肌幼虫总RNA缺少大部分真核生物所具有的28SrRNA。通过比较研究,筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应(PCR)直接从总RNA中进行目的基因的扩增,得到一分子量为0.7kb的DNA。通过限制性内切酶对其消化鉴定,证明扩增片段中的酶切位点与已知序列中的完全一致。
关键词
旋毛虫
rna
pcr
dna
Keywords
t. spiralis
,
rna
,
pcr
,
dna
分类号
S852.731 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建
2
作者
温儒民
张俊杰
陈家存
薛松
胡书群
孙亚峰
裴冬生
机构
徐州医学院附属医院泌尿外科
徐州医学院分子生物学研究中心
出处
《世界肿瘤杂志》
2005年第1期21-23,共3页
文摘
目的 克隆抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因(VH),并构建其原核表达载体。方法从能分泌抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞BDI-1中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VHcDNA。用HindⅢ和XhoⅠ酶切纯化的RT-PCR产物和原核表达载体pET28a(+),在T4DNA连接酶作用下室温连接。重组质粒经酶切鉴定,阳性克隆测序并进行序列分析。结果扩增出VHcDNA片段,大小约为370bp,重组质粒的酶切鉴定结果与预期一致。VH基因序列长度为366bp,编码122个氨基酸。VH基因属于鼠免疫球蛋白重链11亚类。结论成功克隆出抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因,并成功构建其原核表达载体。
关键词
重链可变区基因
原核表达载体
单克隆抗体
人膀胱癌
R
t
-
pcr
扩增
t
4
dna
连接酶
免疫球蛋白重链
c
dna
片段
重组质粒
BDI-1
杂交瘤细胞
pcr
产物
HindⅢ
总
rna
酶切鉴定
序列分析
克隆测序
鉴定结果
序列长度
H基因
氨基酸
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增
阎玉河
朱元晓
许威光
陈辉
马增全
王克领
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994
9
下载PDF
职称材料
2
抗人膀胱癌单克隆抗体重链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建
温儒民
张俊杰
陈家存
薛松
胡书群
孙亚峰
裴冬生
《世界肿瘤杂志》
2005
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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