长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用

目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。

原子荧光法测定并比较4种金枪鱼背部肉中硒的含量

目的:建立金枪鱼背部肉中硒含量的原子荧光光度测定方法,测定并比较4种金枪鱼背部肉中硒含量。方法:样品加酸经过微波消化后,用硼氢化钠作还原剂,还原成硒化氢(H2Se),由载气带入原子化器中进行原子化,在硒特制空心阴极灯照射下,基态硒原子被激发至高能态,在去活化回到基态时,发射出特征波长的荧光,其荧光强度与硒含量成正比。选择体系:硒灯电流60 m A;负高压300 V;硼氢化钠浓度1.5%;载气流量400 mL·min^(-1);屏蔽气流速600 mL·min^(-1)。结果:硒的浓度在3.0~30.0 ng·mL^(-1)之间线性关系良好(r=0.999 7),检出限为0.16μg·L-1,回收率在92.6%~101.8%之间。蓝鳍金枪鱼,长鳍金枪鱼,黄鳍金枪鱼和大眼金枪鱼背部肉中硒的含量分别为1.48、0.904、0.909和1.23 mg·kg-1。结论:该方法能准确检测金枪鱼背部肉中硒的含量,为人们选择富硒食品提供了参考。