雷公藤属3种植物不同群体和个体中雷公藤甲素的研究

目的测定雷公藤属3种植物(雷公藤、昆明山海棠和黑蔓)不同群体和个体中雷公藤甲素(tripto lide),为评价雷公藤药材质量和寻找雷公藤的优质种质奠定基础。方法建立雷公藤甲素HPLC测定方法,并测定了全国主要分布区25个群体91个个体的木质部和韧皮部中的雷公藤甲素。结果黑蔓的雷公藤甲素质量分数很低;雷公藤和昆明山海棠种间的雷公藤甲素差异不明显,个体质量分数木质部为1.0×10-6~5.83×10-5;韧皮部为2.3×10-6~1.030×1-0 4。结论雷公藤和昆明山海棠不同个体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差约50倍,不同居群雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10多倍,不同来源的药材质量差异极大,严重影响用药的安全性;雷公藤甲素质量分数高的居群位于浙江西南部和中部、湖南新宁、贵州雷山和安徽黄山;湖南新宁、贵州雷山和浙江江山居群中有雷公藤甲素质量分数极高的个体,值得进一步研究,以寻找质量分数高的优良单株。

雷公藤与昆明山海棠采样调查报告

目的:通过采样调查,获取雷公藤与昆明山海棠野生资源现状、种植、商品流通等方面的资料。方法:在全国13个样地采集样品,比较雷公藤和昆明山海棠的形态特征与生长习性的差异;调查雷公藤与昆明山海棠的野生资源现状、种植信息、民间混淆种及不同市售药材的商品特征。结果:(1)雷公藤和昆明山海棠主要采集于林下或林地边缘,光照和水分对雷公藤属植物的分布有一定的影响;(2)雷公藤与昆明山海棠的野生资源量正在萎缩,两种植物种植历史较短,种植技术水平较低;(3)雷公藤的采收加工尚缺乏规范,市售药材将雷公藤属植物的根、根茎、茎均作商品药材销售,饮片规格多样。结论:雷公藤与昆明山海棠的野生资源正在萎缩,人工种植、采收加工及市售药材的管理等方面的研究尚需规范深入的开展。

昆明山海棠对实验性肾炎的干预作用及机制

目的探讨昆明山海棠治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型的有效性及作用机制。方法应用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS)复制大鼠MsPGN模型,将实验大鼠分为对照组(A组)、模型组(B组)、昆明山海棠治疗组(C组)、泼尼松治疗组(D组)、昆明山海棠与泼尼松联合治疗组(E组),分别于第1、2及4周测定肝肾功能,并采用免疫组织化学、RT-PCR技术及计算机图像分析系统,观察各组肝肾功能变化、系膜区TGF-β1蛋白及肾皮质mRNA表达以及Smad3mRNA表达的变化。结果各组在观察期间均无明显肝肾功能不良。模型组系膜区TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1,Smad3mRNA表达增高,3个治疗组TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1和Smad3mRNA表达均较模型组显著降低(均P<0.01),以联合治疗组降低最明显。结论昆明山海棠可能是通过抑制TGF-β1的表达,改善肾小球系膜的增殖,达到减少蛋白尿,延缓肾功能的进展。其作用机制可能通过TGF-β1/Smads通路。昆明山海棠与泼尼松有协同作用,两种药物合用治疗效果更明显,且不增加肝肾损害的发生。

不同地区不同药用部位雷公藤和昆明山海棠的总生物碱含量测定

本文用重量法测定了不同地区的雷公藤和昆明山海棠的不同药用部位的总生物碱含量。其根含总生物碱在１％左右。实验结果，可供临床抗生育研究需要参考。

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻及瘤细胞超微结构改变的研究

目的 检测昆明山海棠碱 (THH碱 )诱导JurkatT淋巴瘤细胞的凋亡效应。方法 THH碱多剂量多时间点诱导JurkatT淋巴瘤细胞细胞后 ,采用Annexin V Fluorescence标记膜外翻磷脂酰丝氨酸 (Phosphatidylserine ,PS)的凋亡细胞 ,同时荧光素PI标记坏死细胞 ,流式细胞术检测分别检测其阳性细胞率。同时采用判断凋亡发生的“金标准”———形态学观察方法观察其超微结构的改变。结果 THH碱诱导后磷脂酰丝氨酸外翻的细胞显著增加 ,有明显的时间和剂量相关性 ,超微结构观察可见大量细胞明显发生细胞体积缩小、核固缩、胞浆浓缩、凋亡小体形成等凋亡典型的形态特征。

昆明山海棠碱对Jurkat淋巴瘤细胞株的细胞周期和凋亡时相的影响

目的 探讨昆明山海棠 (THH)碱对JurkatT淋巴瘤细胞的细胞毒性、细胞周期和凋亡时相特异性的影响 ,以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测细胞生长和细胞活力 ;DNA染色法、TUNEL标记结合流式细胞术检测细胞周期和凋亡时相特异性。结果 THH碱能有效抑制Jurkat细胞增殖、细胞活力下降 ,细胞在增殖周期中被阻滞于G1 期。THH碱首先能诱导S、G2 M期细胞凋亡 ,同时能诱导G1 期细胞凋亡。结论 提示THH碱能抑制Jurkat细胞的DNA合成 ,抑制细胞增增殖 ,并可显著诱导各期相细胞发生凋亡。

昆明山海棠内生真菌ThF-11化学成分抗菌杀线虫作用的研究

目的研究昆明山海棠[Tripterygium hypoglaucum(Levl.)Hutch]内生真菌化学成分及其抗菌杀线虫活性。方法分离、纯化内生真菌Th F-11,利用基因测序对分离的昆明山海棠内生真菌进行鉴定。应用层析法和波谱法对其代谢产物进行分离纯化、结构鉴定。分别采用生物活性测定法、抑菌圈法和试管法测定杀线虫和抑菌活性。结果经ITS鉴定昆明山海棠内生真菌Th F-11为简青霉(Penicillium simplicissimum),波谱法鉴定化合物结构为Penicillic acid[1]、2,4-dimethoxy-6-methylphenol[2]和5(6)-dihydropenicillic acid[3]。杀线虫活性显示化合物[1]随着时间、浓度增加活性逐渐增强,且对大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均具有较强的抑菌活性。结论首次从内生真菌Th F-11获得3个化合物,且化合物[1]具有较强的抑菌、杀线虫的生物活性,值得进一步开发应用。

昆明山海棠水提液的急性毒性研究

目的 探明昆明山海棠的急性毒性及半数致死剂量 (LD50 ) ,为临床的安全使用提供依据和资料。方法 THH水提液多剂量小鼠口服 ,观察小鼠的死亡率和脏器的感官病理改变。结果 雄性的LD50 ( 95 %可信限 )为 79g kg( 69～ 89g kg) ,雌性的LD50 ( 95 %可信限 )为 10 0g kg ( 90～ 112g kg) ;肉眼未见脏器明显的病理改变。结论 按化学物质的急性毒性分级标准 ,THH水提液属中等毒级别 ,临床使用比较安全 。

昆明山海棠根部水提液诱导HL-60细胞凋亡及对c-Myc基因表达的调控(英文)

目的 研究昆明山海棠 Tripterygium hypoglaucum(Celastraceae) (THH)根部水提液对早幼粒白血病HL- 6 0细胞凋亡的诱导作用及机制。方法 通过特征性的形态学观察 ,Annexin- V标记 ,以及流式细胞仪检测中次G1 峰的形成确定 THH的诱导细胞凋亡作用 ;应用 Western Blotting研究 THH对 c- Myc蛋白表达的影响。结果THH根部水提液可诱导早幼粒白血病 HL - 6 0细胞凋亡。在浓度高于 18μg/ m L时 ,THH对 HL - 6 0细胞的诱导凋亡作用呈现浓度与时间的相关性。在 THH处理 2～ 4 h后 ,癌基因蛋白 c- Myc表达降低 99%以上。结论 THH抑制了 c- Myc蛋白的翻译或后翻译过程 ,从而降低了 c- Myc在细胞周期运转中的作用 。

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞核DNA链断裂和DNA片段化

目的 探讨昆明山海棠碱对淋巴瘤细胞核DNA的影响 ,以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 THH碱诱导Jurkat细胞后 ,TUNEL荧光标记DNA链断裂 ,细胞DNA含量分析方法分析DNA片段化 ,均以流式细胞术检测。结果 THH碱能诱导Jurkat淋巴瘤细胞DNA链断裂 ,之后DNA发生片段化。结论 提示在THH碱诱导Jurkat凋亡过程中 。

昆明山海棠碱通过Fas受体介导途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨Fas、caspase 8在昆明山海棠碱 (THH碱 )对Jurkat淋巴瘤细胞的凋亡诱导中的变化 ,以进一步研究THH碱诱导凋亡的分子机制。方法 采用Annexin V标记和流式细胞术检测细胞的凋亡发生率 ,采用westernblotting分析FasL、caspase 7、caspase 8、Bid等蛋白表达的变化。结果 THH碱能有效诱导Jurkat细胞凋亡 ;在其凋亡过程中 ,FasL逐渐表达增强、caspase 7、caspase 8、Bid剪切激活 ,并呈时间依赖性。结论 THH碱通过Fas受体 配体介导激活caspase 8,caspase 8再激活caspase 7和Bid等网络途径诱导Jurkat细胞凋亡。

昆明山海棠茎中化合物的分离及其抗炎活性

从昆明山海棠茎的氯仿提取物中分离得到6个化合物,经鉴定为雷公藤内酯甲(Ⅰ)、昆明山海棠二萜内酯(Ⅱ)、雷公藤内酯乙(Ⅲ)、雷酚二萜酸(Ⅳ)、雷公藤碱(Ⅴ)及3-epikatonic acid(Ⅵ)。其中,化合物Ⅲ及Ⅵ为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅴ为首次从该植物茎中分离得到。药理实验显示化合物Ⅰ和Ⅱ对大鼠足跖部角叉菜胶炎症模型具有明显的抑制作用。

昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导Jurkat淋巴瘤细胞株细胞凋亡

目的 研究昆明山海棠碱通过线粒体途径诱导细胞凋亡的作用。方法 THH碱多剂量多时间点诱导Jurkat细胞后 ,采用Westernblotting检测细胞内Bcl 2表达的含量、采用JC 1原位染色方法、细胞免疫化学和流式细胞术等手段在单细胞水平分析细胞线粒体膜Apo2 .7分子以及线粒体膜电位 (ΔΨm)的变化。结果 THH碱诱导后Bcl 2蛋白表达下调 ,线粒体膜电位明显下降 ,线粒体膜Apo2 .7蛋白分子表达显著增加。结论 THH碱可通过线粒体途径诱导JurkatT淋巴瘤细胞株发生凋亡 ,并且Bcl

昆明山海棠提取物对大、小白鼠的抗生育作用及机理初探

昆明山海棠提取物灌胃,对小白鼠抗着床、抗早孕有非常显著或显著的作用。正交L4（23）实验优选的抗早早孕方案对大白鼠效果非常显著（P【0.001）,且量效相关重现性好;仅用口服剂量的1/19～1/15弱。宫内注入效果亦显著。组织细胞形态学观察证实:给药第1天即能抑制桑椹胚的发育或致坏死,妊第6天可见坏死解体的胚或部分已被吸收。解体胚周围蜕膜化差,黄体却无异样,该提取物无雌激素、抗雌激素、孕激素及抗孕激素活性,流产的始动机理也不依赖前列腺素,不干扰母体的内分泌。

昆明山海棠治疗32例无菌性脓疱性皮肤病的疗效观察

用昆明山海棠治疗32例无菌性脓疱性皮肤病,其中疤疹样脓疤病1例,连续性肢端皮炎4例,脓疱性银屑病19例,掌跖脓疤病8例。治愈22例,治愈率为68.7％,显效5例,好转4例,无效1例,总有效率为96.8％。一般服药一周开始生效,水煎剂比片剂疗效好。停药后复发者,再用此药仍有效。此药副作用小。其疗效可能与该药之良好抗炎及免疫抑制作用有关。

HPLC法测定昆明山海棠中雷公藤酯甲含量

目的建立高效液相色谱法测定昆明山海棠药材中雷公藤酯甲含量的方法.方法采用反相C18柱,以乙腈-水(80:20)为流动相,205nm为检测波长,测定雷公藤酯甲的含量.结果雷公藤酯甲在0.42～10.5μg/mL范围内线性良好,r=0.9995,平均回收率94.3%,RSD为2.87%.结论本方法灵敏、准确、重现性好.

THH碱不通过钙离子信号通道诱导Jurkat淋巴瘤细胞株凋亡

目的 探讨昆明山海棠碱在凋亡中对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法 THH碱诱导Jurkat细胞后 ,采用Indo 1AM及PI进行细胞染色、流式细胞术等手段在单细胞水平上检测细胞内钙离子浓度的变化。结果 THH碱诱导后细胞内钙离子浓度未见明显变化。结论 THH碱不通过钙离子信号通道诱导Jurkat细胞凋亡。

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞株的PARP酶剪切和caspase-3激活

目的 探讨昆明山海棠碱诱导淋巴瘤细胞凋亡过程中caspase 3和PARP酶的作用 ,以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 THH碱诱导JurkatT淋巴瘤细胞后 ,FAM DEVD FMK荧光标记活化的caspase 3 ,免疫细胞化学方法荧光标记PARP酶剪切后的 89× 10 3片段 ,均以流式细胞术检测。结果 THH碱能有效诱导caspase 3激活和PARP酶剪切。结论 提示在THH碱能诱导JurkatT淋巴瘤细胞凋亡过程中caspase 3和PARP酶参与调控 ,它们可能抑制了受损伤DNA的修复 。

雷公藤和昆明山海棠植物根中卫茅醇的提取方法及鉴别研究

目的从雷公藤和昆明山海棠植物根中提取卫茅醇并鉴别比较,寻找雷公藤和昆明山海棠植物在临床疗效上具有相似性的原因。方法采用95%乙醇为溶剂,对雷公藤和昆明山海棠植物根中进行热提取。其提取液经浓缩后的相对应部位进行薄层层析检查对照、化学成分的预测、熔点的测定及红外吸收光谱的测定来判别两种植物的差异。结果两种植物均含有相同的卫茅醇。结论雷公藤和昆明山海棠在临床疗效上具有相似性,主要原因是这两种植物具有相同的化学成分。

昆明山海棠诱发小鼠精子非整倍体的研究

应用荧光原位杂交 (FISH)技术评价了昆明山海棠水抽提物 (THH)在雄性小鼠生殖细胞形成过程中的非整倍体诱发效应。以THH(1 2 0mg/kg,2 4 0mg/kg ,4 80mg/kg)腹腔注射昆明种雄性小白鼠 ,根据小鼠精子发育周期 ,于处理后 2 2天后取小鼠附睾精子涂片 ,以生物素标记的 8号染色体着丝粒重复顺序探针进行FISH ,荧光显微镜下分析受试物处理动物后精子特异染色体分离情况。结果发现 ,THH在中间剂量组 (2 4 0mg/kg)和高剂量组 (4 80mg/kg)诱发精子非整倍体频率均显著高于溶剂对照 (P<0 .0 0 1 ) ,低剂量组 (1 2 0mg/kg)的异常精子频率与溶剂对照无显著差异 (P >0 .0 5)。研究证明 。