复合微生物发酵法从黄姜中提取皂素研究

通过菌种复配研究了从黄姜中提取皂素的一种环境友好的生物方法。首先从生长黄姜的土壤和常见霉菌中筛选并驯化出三株菌,一株产纤维素酶活力较高的T.reesei,一株产β-糖苷酶活力较高的A.niger和一株产木聚糖酶活力较高的A.oryzae。其次研究了这三株菌四种复配模式发酵体系中酶活力和皂素得率的变化。与纯种发酵相比,A.niger与T.reesei复合发酵对提高体系中酶活和皂素得率有协同促进作用。最后在此基础上,进一步优化了这两株菌的发酵顺序。当T.reesei发酵第3d时投加A.niger继续发酵6d,皂素得率最高,可达到78.25%。

里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造

【目的】用分子改造的方法改造里氏木霉（Trichoderma reesei）的纤维二糖水解酶基因cbh1，提高其纤维素酶活力，为工业化生产纤维素酶提供参考。【方法】用DNase Ⅰ消化里氏木霉cbb1，回收100bp左右的片段后用T4DNA连接酶连接，以连接产物作为模板进行PCR扩增，将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体，使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组。通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株，在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列。【结果】经克隆测序获得基因片段大小为637bp，与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88％-98％，确定为里氏木霉cbh1的基因片段。经DNaseⅠ消化15min、T4DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因。将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体，得到cbh1基因突变体库。从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1．7518倍的突变菌株E2-1。序列比对分析发现，与出发菌株相比，突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变，其中5个碱基为置换突变，8个碱基为缺失突变，1个碱基为插入突变，分布于cbh1基因的9个位置。【结论】改造后的cbhI基因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组，进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力。

纤维素酶固态发酵过程中菌体生长量的测定

纤维素酶在植物再生资源的利用中占有重要地位,目前世界各地均在进行广泛而深入的研究。纤维素酶的生产有固态发酵和液体深层发酵两种方法,由于前者与后者相比具有许多优点,因此纤维素酶的生产主要采用固态发酵法。 根据Durand等给出的固态发酵定义,在固态发酵中微生物的菌丝体紧密地结合于固体基质上,这种情况给菌体生长量的测定带来了极大的困难。与液体深层发酵不同。

里氏木霉纤维二糖酶bglII基因的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

将里氏木霉总RNA反转录得到cDNA第一链,并以之为模板进行 RT-PCR合成约1.4kb的纤维二糖酶基因cDNA,将所得的cDNA经测序后克隆到温度敏感型表达载体pJW2中,经PCR和双酶切鉴定筛出阳性重组子,温度诱导后,经酶活测定,bgl II基因在大肠杆菌中得到了表达,酶活为0.75IU/mL。