RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的 探讨RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号对促进人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial–mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。Western blot与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号相关分子,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合。结果 MTT检测显示,T0901317处理组较MGC803细胞增殖能力呈时间依赖性增加(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验显示,T0901317处理组细胞迁移与侵袭能力较MGC803细胞明显增强(P<0.05)。Western blot检测显示,T0901317处理后较未处理组RORα蛋白明显下调(P<0.05),并且可上调MGC803细胞β-catenin总蛋白与核内β-catenin(P<0.05)。T0901317处理后较对照组RORα蛋白与β-catenin蛋白结合分别明显减少(P<0.05)。T0901317处理的细胞较未处理MGC803细胞的长梭形细胞增加,异型性更为明显。T0901317可明显上调MGC803细胞Rac1、TGF-β1、Vimentin的表达(P<0.05),并抑制E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 T0901317可通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞增殖、迁移侵袭与EMT。

肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎性因子释放的影响及其机制

目的观察肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子释放的影响,并探讨其机制。方法 160 nmol/L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24 h后分为四组:对照组、脂多糖组、T0901317组和脂多糖+T0901317组,酶联免疫吸附法检测培养液中炎症因子含量。LipofectamineTM2000转染ATP结合盒转运子A1(ABCA1)siRNA,定量PCR检测细胞ABCA1、ABCG1和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达,Western blot检测AB-CA1、ABCG1、TLR4和核因子κB(NF-κB)p65的蛋白表达。结果 T0901317抑制脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)释放,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和ABCG1表达;转染ABCA1 siRNA后,ABCA1的蛋白表达明显下降,T0901317对炎症因子的抑制作用明显减弱;T0901317下调TLR4和核内NF-κB的表达。结论 T0901317抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其促进膜转运体ABCA1表达,抑制膜受体TLR4和转录因子NF-κB的表达有关。

肝X受体激动剂T0901317抑制TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-SMA的表达

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学鉴定。T0901317和/或TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用RT-PCR,Western blot和免疫荧光观察α-SMA mRNA和蛋白水平的表达。结果人肺成纤维细胞表达波形蛋白而不表达角蛋白。RT-PCR,Western blot,免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下组成性表达少量的α-SMA,TGF-β15ng/ml即可以诱导α-SMA mRNA和蛋白表达的明显上调,而T09013175μg/ml时可以明显抑制这种表达的上调。结论肝X受体激动剂T0901317可以在基因和蛋白水平抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞α-SMA表达的上调,可能具有潜在抗纤维化应用价值。

LXRα激活剂T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织MPO、TNF-α表达的影响

目的观察LXRα(liver X receptorα)激活剂T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 72只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为对照组、脂多糖致伤组、T0901317干预组,在1h、2h、4h、8h时相点采集大鼠肺组织测定肺组织中MPO活性、TNF-α含量,并观察肺组织病理学变化。结果与对照组比较,脂多糖致伤组各时间点MPO活性均显著升高(P<0.05),组织病理显示肺组织受损;肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α亦显著升高。T0901317干预组MPO活性及TNF-α表达下降,肺部炎症明显减轻。结论 T0901317能够显著降低急性肺损伤大鼠肺组织MPO活性、TNF-α水平,对急性肺损伤大鼠具有保护作用。

T0901317通过上调LXRα表达促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的:观察肝X受体(LXR)激动剂T0901317对人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的作用及其机制。方法:不同浓度(0、10、20、40μmol/L)T0901317处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞不同时间(0、12、24、48 h),用Hoechst 33342染色及流式Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot进一步检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved caspase-3和LXRα的表达,RT-q PCR检测Bcl-2和LXRα的mRNA表达。结果:随着T0901317处理浓度的增加和时间的延长,凋亡现象逐渐明显。进一步通过Western blot检测发现,T0901317可下调Bcl-2蛋白表达,cleaved caspase-3表达增多,而LXRα的表达上调;RT-q PCR检测结果也显示,T0901317可下调Bcl-2 mRNA表达,而上调LXRα表达。结论:T0901317能上调LXRα表达,从而促进MDA-MB-231细胞凋亡。

T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织LXRα表达的影响及其抗炎作用

目的探讨肝脏X受体α(LXRα)激活剂T0901317对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠动物模型的保护效应。方法 72只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为对照组、LPS组和T0901317干预组。观察各组大鼠PaO2、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中LXRα、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α蛋白变化;采用免疫组化染色观察肺组织LXRα蛋白变化。结果与对照组比较,LPS致伤后各时间点PaO2显著降低,肺组织干/湿重比值(W/D)、MPO活性均显著升高(P<0.05),组织病理显示肺组织受损;肺组织LXR-αmRNA表达下降,TNF-αmRNA升高(P<0.05),肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α显著升高。免疫组化显示LXRα蛋白在对照组肺组织中表达较高水平,在LPS致伤后可见该蛋白表达较对照组显著下降(P<0.05)。T0901317干预组LXRα在基因和蛋白水平表达上调,TNF-α表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),同时观察到肺部炎症明显减轻。结论在LPS诱发的大鼠ALI模型中,T0901317通过促进LXR-α表达,抑制TNF-α表达,减轻炎性细胞在肺组织的浸润和聚集,从而具有保护作用。

肝X受体激动剂T0901317对TGF-β_1诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响。方法组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫组织化学鉴定。T0901317及TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用Western blot和激光共聚焦显微镜观察FN的表达。结果成纤维细胞表达波形蛋白,不表达角蛋白。Western blot和免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下表达较多的FN,TGF-β1可以诱导FN表达的进一步上调,而T0901317在5μg/mL时即可抑制这种表达的上调。结论肝X受体激动剂T0901317可以抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞FN表达的上调,可能具有潜在抗纤维化治疗作用。

肝X受体激动剂T0901317对血糖波动下人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响

目的研究肝X受体(LXRs)激动剂T0901317对血糖波动条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力的影响及其作用机制。方法用不同浓度的葡萄糖和T0901317处理HUVEC,采用CCK8法检测HUVEC增殖情况;Western印迹法检测Akt蛋白、p-Akt(Ser473)蛋白表达。结果血糖波动抑制HUVEC的增殖及p-Akt(Ser473)蛋白的表达(P<0.05)。T0901317促进血糖波动损伤后HUVEC的增殖(P<0.05),上调p-Akt(Ser473)蛋白表达(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05)。此外,PI3K/Akt抑制剂LY294002(10μmol/L)可以阻断T0901317上调p-Akt(Ser473)蛋白表达的作用(P<0.05)。结论血糖波动通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HUVEC增殖能力,LXRs激动剂T0901317可通过激活PI3K/Akt信号通路增强血糖波动抑制下HUVEC的增殖能力。

肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组(对照组),T0901317干预组(T0901317组)。24h、48h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组。T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高。结论T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡。

肝X受体激动剂T0901317对肝癌血管生成的作用及机制

目的：探讨肝脏X受体激动剂T0901317对肝细胞癌血管生成的作用及机制。方法：采用实验研究方法。人肝癌细胞MHCC97-H、人肝癌细胞Huh7、人脐静脉内皮细胞HUVEC各自的空白组、低浓度组、高浓度组分别加入0 、1、3 μmol/L T0901317。采用CCK-8法检测各组细胞生长情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析各组细胞肝脏X受体靶基因脂肪酸合成酶（FAS）mRNA相对表达量。测量MHCC97-H裸鼠模型（MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组）皮下肿瘤体积和体质量。处死裸鼠后获取肿瘤组织。采用免疫组织化学染色检测裸鼠肿瘤组织中肿瘤血管生成标志物CD31相对表达量。采用Transwell法检测HUVEC各组细胞迁移能力和成血管能力。观察指标：（1）T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响。（2）T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用。（3）T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响。（4）T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响。（5）T0901317对HUVEC迁移能力的影响。（6）T0901317对HUVEC成血管能力的影响。正态分布的计量资料以±s表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验。结果：（1）T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响。CCK-8法细胞生长实验结果显示：MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±1.7%、101.0%±0.7%、104.6%±1.9%，3组比较，差异无统计学意义（F=2.632，P〉0.05）。Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±2.7%、97.6%±2.4%、103.7%±2.8%，3组比较，差异无统计学意义（F=1.404，P〉0.05）。HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组活细胞百分比分别为100.0%±0.7%、100.7%±1.2%、101.3%±0.8%，3组比较，差异无统计学意义（F=0.471，P〉0.05）。（2）T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用。实时荧光定量PCR结果显示：MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±2.2%、658.5%±7.7%、1 241.0%±106.8%，3组比较，差异有统计学意义（F=46.227，P〈0.05）。其中MHCC97-H空白组分别与MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组比较，差异均有统计学意义（t=70.025，8.274，P〈0.05）；MHCC97-H低浓度组与MHCC97-H高浓度组比较，差异有统计学意义（t=4.222，P〈0.05）。Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±15.8%、1 225.0%±26.7%、2 015.0%±215.1%，3组比较，差异有统计学意义（F=49.402，P〈0.05）。其中Huh7空白组分别与Huh7低浓度组、Huh7高浓度组比较，差异均有统计学意义（t=39.460，8.879，P〈0.05）；Huh7低浓度组与Huh7高浓度组比较，差异有统计学意义（t=2.836，P〈0.05）。HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0%±19.6%、790.8%±116.5%、1 756.0%±55.0%，3组比较，差异有统计学意义（F=185.395，P〈0.05）。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较，差异均有统计学意义（t=7.639，34.375，P〈0.05）；HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较，差异有统计学意义（t=7.488，P〈0.05）。（3）T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响。MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长实验结果显示：MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤体积分别为（935±72）mm3和（552±47）mm3，两组比较，差异有统计学意义（t=4.449，P〈0.05）。MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型体质量分别为（23.8±0.8）g和（21.7±1.7）g，两组比较，差异无统计学意义（t=1.059，P〉0.05）。（4）T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响。免疫组织化学染色检测结果显示：MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31相对表达量分别为100%±11%和35%±7%，两组比较，差异有统计学意义（t=4.919，P〈0.05）。（5）T0901317对HUVEC迁移能力的影响。Transwell法细胞迁移实验结果显示：HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组穿膜细胞百分比分别为100.0%±4.0%、57.3%±1.5%、32.7%±1.7%，3组比较，差异有统计学意义（F=163.944，P〈0.05）。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较，差异均有统计学意义（t=9.998，15.434，P〈0.05）；HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较，差异有统计学意义（t=10.801，P〈0.05）。（6）T0901317对HUVEC成血管能力的影响。细胞成血管实验结果显示：HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组成血管长度相对值分别为100.0%±3.4%、68.4%±3.5%、44.7%±0.5%，3组比较，差异有统计学意义（F=38.964，P〈0.05）。其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较，差异均有统计学意义（t=6.268，9.831，P〈0.05）；HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较，差异有统计学意义（t=3.460，P〈0.05）。结论：肝脏X受体激动剂T0901317可抑制肝细胞癌血管生成。

肝X受体在卵巢癌组织中的表达及T0901317在卵巢癌细胞系SKOV3中的作用

目的检测肝X受体蛋白在卵巢癌组织及正常卵巢组织中的表达,探讨肝X受体激动剂T0901317对卵巢癌细胞系SKOV3细胞活力及凋亡的影响。方法收集2015年8月至2016年8月行初次手术治疗的51例卵巢癌患者的组织标本,另选取32例因子宫肌瘤等良性病变切除的正常卵巢组织作对照。采用免疫组织化学方法检测肝X受体蛋白在卵巢癌组织及正常卵巢组织中的表达;CCK8检测T0901317对卵巢癌细胞系SKOV3增殖的影响;流式细胞术检测T0901317对卵巢癌细胞系SKOV3凋亡的影响。结果肝X受体蛋白在正常卵巢组织较卵巢癌组织表达量高,两组比较差异有统计学意义(P<0.001),T0901317抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖具有明显的剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05),T0901317促进SKOV3凋亡具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。结论肝X受体表达下调可能与卵巢癌的发生发展有关,激活肝X受体可能会成为卵巢癌潜在的治疗靶点。

T0901317通过法尼醇X受体调节人肠癌细胞载脂蛋白M表达

载脂蛋白M（ApoM）是一种脂质运载蛋白家族的血浆蛋白质，主要存在于HDL中。本研究旨在观察T0901317通过法尼醇x受体调节人肠癌细胞载脂蛋白M表达。

合成配体T0901317激活的肝X受体α可减轻失血性休克引起的肺部损伤及炎症

肝X受体α（LXRα）是动物体内一种调节脂类代谢的核转录因子。以往研究证明，由合成配体激活的LXRα在动脉粥样硬化和化学诱导型皮炎中具有抗炎作用。最近美国研究人员应用大鼠失血性休克模型对合成配体T0901317激活的LXRα的抗肺部炎症作用进行了研究。

Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷缓解肝X受体激动剂诱导的小鼠肝脏脂肪性变

目的探讨Niemann-Pick C1-Like 1在肝X受体激动剂诱导的肝脏脂肪性变中的作用。方法给C57BL/6小鼠和Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠喂食0.015%胆固醇饮食21天,胃饲溶剂或肝X受体激动剂T0901317一周后,收集小鼠肝脏,称重;抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏表达与脂肪合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1的mRNA水平。结果在胃饲T0901317一周后,C57BL/6小鼠肝脏由1.1±0.1g增大到2.8±0.3g,肝脏甘油三酯含量由34.2±18.1mg/g增至232.2±67.9mg/g,固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高;而Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏由0.9±0.1g增大到1.5±0.1g,肝脏甘油三酯含量由43.7±26.5mg/g增至104.9±62.1mg/g,脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1mRNA水平在肝脏的表达也显著增高。但在T0901317诱导下,Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏脂肪酸合成酶mRNA水平仍比C57BL/6小鼠低63%。结论Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷降低肝X受体激动剂诱导的肝脏固醇调节元件结合蛋白1c和脂肪酸合成酶的表达,缓解小鼠肝脏脂肪性变。

肝脏X受体α对高糖所致心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的观察肝脏X受体α(LXRα)对高糖所致心肌细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的H9c2大鼠心肌细胞随机分为5组,空白组、低T0组、中T0组、高T0组分别用二甲基亚砜及5、10、20μmol/L的LXRα激动剂T0901317预处理12 h,高糖对照组不处理;之后低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组用33mmol/L的高糖浸润24 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白相对表达量。结果空白组、低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组细胞凋亡率分别为10.67%±0.82%、29.53%±4.21%、19.76%±2.80%、15.15%±1.90%、34.09%±5.32%;多组间比较,P<0.05;低T0组、高糖对照组与空白组比较,P均<0.01;中T0组、高T0组与高糖对照组比较,P均<0.05。与空白组比较,低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组Bcl-2表达均降低,Bax和Caspase-3表达均增加,P均<0.05;与中T0组、高T0组比较,高糖对照组上述指标变化更明显,P均<0.05;低T0组与高糖对照组上述指标比较,P均>0.05。结论中、高浓度LXRα可抑制高糖所致的心肌细胞凋亡,其机制可能与降低Bax、Caspase-3表达和增加Bcl-2表达有关。

TO901317对百草枯致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的 研究肝X受体（liver X receptors, LXRs）激动剂TO901317在百草枯（paraquat,PQ）致小鼠急性肺损伤过程中的作用及可能的机制。方法 96只雄性c57小鼠随机分为4组,每组24只小鼠。对照组：给予小鼠0.1 mL生理盐水腹腔注射；PQ染毒组：给予小鼠PQ 28 mg/kg腹腔注射；TO901317低剂量处理组：小鼠PQ染毒30 min后给予TO901317 5 mg/kg腹腔注射；TO901317高剂量处理组：小鼠PQ染毒30 min后给予TO901317 20 mg/kg腹腔注射。分别在PQ染毒后6、12、24、72 h每组处死6只小鼠，收集小鼠肺组织及肺泡灌洗液（BALF）。肺组织切片HE染色后对比各组肺组织病理学改变，检测肺组织丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性，检测BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）含量，Western blot法检测肺组织核因子-κB（nuclear factor-kappa B, NF-κB）的表达情况。结果 与对照组比较，PQ染毒组小鼠肺组织病理损伤显著，肺组织MDA含量显著增高，SOD活性下降，BALF中TNF-α和IL-1β含量显著增高，NF-κB表达显著增加（P〈0.05）。与PQ染毒组比较，TO901317处理组小鼠肺组织损伤显著减轻，MDA、TNF-α和IL-1β含量下降，SOD活性上升，NF-κB表达显著下降（P〈0.05），且TO901317高剂量处理组效果更显著（P〈0.05）。结论 LXRs激动剂TO901317通过抑制NF-κB信号通路在小鼠肺组织的表达，显著减轻PQ诱导的小鼠急性肺损伤。

LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂对南脂饲养ApoE基因敲除小鼠(ApoE^(-/-))在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变形成的早期阶段斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响。方法:8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠12只,随机分入LXR激动剂T0901317干预组或二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组各6只。均高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予T0901317 20 mg·kg^(-1)·d^(-1)或相当剂量的DMSO腹腔注射。麻醉后处死小鼠,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片:以HE染色观察形态学变化,生化法检测小鼠血脂,免疫组化法检测主动脉壁斑块内组织因子(tissue factor,TF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达水平,苦味酸-天狼星红染色检测斑块内胶原含量,以Image Pro Plus 6.0软件进行图像分析。结果:T0901317干预组血浆总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组(P<0.01,P<0.01和P<0.05);T0901317干预组主动脉AS斑块面积明显小于对照组(P<0.05),分别为(4285±2133)μm^2和(8403±2535)μm^2;T0901317干预组主动脉AS斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);T0901317干预组动脉粥样硬化斑块内TF表达水平较对照组明显减低(P<0.05),平均吸光度值分别为(0.0309±0.0109)与(0.0764±0.0346);动脉粥样硬化斑块内MMP-9表达水平较对照组明显减少(P<0.01),平均吸光度值分别为(0.0293±0.0163)与(0.0671±0.0200);T0901317干预组动脉粥样硬化班块内胶原纤维的含量较对照组明显增加(P<0.01),平均吸光度分别为(0.0311±0.0101)与(0.0142±0.0054)。结论:LXR激动剂不仅可以抑制动脉粥样硬化的发展,而且可能通过减少动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9的产生,改变斑块内的胶原构成,而起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用。

肝脏X受体α对肝细胞HepG2胆固醇代谢基因表达的调控

目的:研究肝细胞X受体α(liver X receptorα,LXRα)基因对HepG2肝细胞胆固醇代谢相关基因表达的调控作用。方法:将特异性LXRα小片段干扰RNA(siRNA)经脂质体Lipofectamine 2000介导转染人HepG2肝细胞,同时行HepG2肝细胞LXRα的激动(T0901317)实验,采用实时定量PCR方法分别测定干扰和激动前后的LXRα以及胆固醇代谢相关基因ATP结合盒(ABC)G5、ABCG8、ABCA1 mRNA的表达。结果:LXRαsiRNA干扰24h后,HepG2实验组LXRα mRNA相对表达量显著低于阴性对照组(P<0.01),LXRα mRNA表达抑制率为86.06%。实验组ABCG5、ABCG8和ABCA1 mRNA表达水平均较阴性对照组有下降趋势(P>0.05)。HepG2加入激动剂(T0901317)48h后,实验组ABCG8和ABCA1基因表达均显著升高(P<0.05),但ABCG5基因表达仅有升高趋势(P>0.05)。结论:RNA干扰使HepG2肝细胞LXRα表达受抑制,继而有使靶基因ABCG5、ABCG8、ABCA1表达降低趋势;人工合成配体T0901317与LXRα结合,使其活性增加,上调了ABCG8、ABCA1和ABCG5 mRNA的表达。提示LXRα可调控HepG2肝细胞的胆固醇代谢基因。

肝X受体对急性肺损伤保护机制的探讨

目的 探讨肝X受体对急性肺损伤的保护机制,观察凋亡抑制因子Api6、Caspase-3、Bcl-2的表达情况.方法 将54只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（CL组）、内毒素处理组（LP组）、T0901317预处理组（TP组）.TP组预处理后,脂多糖造模,于1h、4h、8h时处死大鼠采取肺组织,免疫组化染色测定凋亡因子Caspase-3、Bcl-2,蛋白定量检测Api6表达水平,同时测定动脉血气,观察电子显微镜下肺组织病理学改变.结果 与CL组相比,LP组动脉血氧分压均显著降低;病理形态学示：与LP组相比,TP组损伤明显减轻.通过Western blot检测肺Api6蛋白表达获知：TP组明显比LP组表达有所增加.结论 Api6在ALI大鼠肺组织中表达明显减少.Api6高表达对肺组织起到一定的保护作用.肝X受体激动剂预处理可以减轻脂多糖所致肺组织的损伤,其机制可能与其抑制促凋亡因子、增加抗凋亡因子表达有关.

LXR激动剂和ERK1/2抑制剂诱导PKCε表达的研究

单独使用LXR激动剂T0901317喂食小鼠能减缓动脉粥样硬化发展,但会造成严重的脂肪肝.与ERK1/2抑制剂组合使用治疗能有效防止动脉粥样硬化发展,同时降低了两种药物剂量减轻了副作用.为研究组合药物对身体免疫系统的影响,从蛋白激酶C入手开展实验.在小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中,PKCε被T0901317诱导,并呈现一定时间和浓度依赖性,并且用ERK1/2抑制剂U0126处理腹膜巨噬细胞能够上调PKCε.用T0901317和U0126喂食小鼠10 d,研磨心肌后上样,PKCε均未被两种药物上调,因而可见两种药物对PKCε的诱导表达呈现组织和细胞差异性.