基于Wnt/β-连环蛋白通路探究金天格对肿瘤坏死因子-α诱导的小鼠MC3T3E1细胞生物学功能的影响实验研究

目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-6) g/L金天格)、M-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10-5 g/L金天格)、H-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格)、Dickkopf-1(DKK-1)组(50 ng/ml TNF-α+10 ng/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1)、H-金天格+LiCl组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格+20μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。用CCK-8试剂盒对细胞活性进行检测,用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测,用酶联免疫吸附试验对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平进行检测,用Western blot对细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况进行检测。结果:与对照组比较,TNF-α组细胞活性、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及B细胞淋巴瘤(Bax)、β-catenin、转录因子7样2(TCF7L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达升高(均P<0.05)。与TNF-α组比较,L-金天格组、M-金天格组、H-金天格组、DKK-1组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达升高,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.05)。与H-金天格组比较,H-金天格+LiCl组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:金天格可能通过抑制Wnt/β-catenin通路减轻TNF-α诱导的MC3T3E1细胞损伤。

核因子E2相关因子/血红素加氧酶1及血栓素B2T/6-酮-前列腺素F1α信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制

目的:本研究旨在探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)及血栓素B2(TXB2)/6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)信号通路在宫颈癌根治术后发生深静脉血栓大鼠模型中的作用机制。方法:购买60只4~6周龄裸鼠,体重(180±20)g,随机将60只大鼠分为空白对照组、模型组及深静脉血栓组各20只。其中空白组正常饲养1周;模型组及深静脉血栓组均建立宫颈癌动物模型,模型组造模成功后,正常饲养;深静脉血栓组给予宫颈癌根治术治疗,正常饲养。观察宫颈癌根治术后发生深静脉血栓HE染色切片,原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠血管组织内皮细胞凋亡情况,全自动凝血分析仪检测各组大鼠凝血指标,酶联免疫吸附法测定TXB2/6-Keto-PGF1α水平,免疫印迹检测Nrf2/HO-1信号通路。结果:实验过程中,三组大鼠均未出现意外死亡,存活率均为100%。模型组未形成血栓,深静脉血栓组造模后1、3、7、14 d成栓率依次为50.00%(10/20)、95.00%(19/20)、100%(20/20)。大鼠下腔静脉产生的血栓尾部为红色血栓、中间为混合血栓、头部为白色血栓。深静脉血栓组血管内皮凋亡率高于模型组(P<0.05)。深静脉血栓组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于模型组及空白对照组,D-二聚体高于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间低于空白对照组,D-二聚体高于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于模型组及空白对照组,6-Keto-PGF1α低于模型组及空白对照组(均P<0.05);模型组TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α高于空白对照组,6-Keto-PGF1α低于空白对照组(均P<0.05)。深静脉血栓组Nrf2、HO-1低于模型组及空白对照组,模型组Nrf2/HO-1低于空白对照组(均P<0.05)。结论:TXB2/6-Keto-PGF1α、Nrf2/HO-1信号通路在宫颈癌根治术后深静脉血栓大鼠中异常表达,也是宫颈癌根治术后深静脉血栓形成的作用机制之一。

回火对E101T1-K3C熔敷金属显微组织和力学性能的影响

采用E101T1-K3C低合金高强钢药芯焊丝对EH620钢进行焊接。焊接接头分别在460℃、580℃进行保温1 h回火热处理,应用金相显微镜、材料试验机、冲击试验机、扫描电子显微镜等对试样进行分析与测量。结果表明:焊态下熔敷金属显微组织为条状铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区显微组织为片状铁素体+马氏体+第二相颗粒。焊接接头经过460℃×1 h焊后回火处理后,焊缝区的显微组织为铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区组织为铁素体+回火屈氏体+第二相颗粒。焊接接头经过580℃×1 h回火处理后,焊缝及熔合区显微组织均为铁素体+回火索氏体+第二相颗粒;熔敷金属屈服强度由725 MPa下降589 MPa,-40℃冲击吸收能量KV2由71 J提高到114 J;维氏硬度值在焊接接头焊缝及热影响区的分布趋向一致,焊接接头具有理想的力学性能。

8通道合并T1／E1／J1成帧器和LIU器件PM4358

PMC—Sierra推出应用于IP路由器和无线接入层设备的高集成度8通道合并T1／E1／J1成帧器和LIU器件PM4358。这种8路成帧器和LIU提高了集成度、改进了可靠性，同时可降低系统成本。

PMC—Sierra推出8通道合并T1／E1／J1成帧器和LIU

PMC—Sierra公司近日发布了集成模拟线路接口单元（LIU）的8通道PM4358 COMET OCTAL T1／E1／J1成帧器产品。它可以降低系统成本，与竞争的解决方案相比，节省了超过20％的成本；采用紧凑的封装和内部集成线路阻抗匹配元件，减少板卡占用空间，与竞争的解决方案相比，减少了75％的线路侧器件；采用1：1冗余度支持，增强了系统可靠性。

变应性鼻炎合并哮喘患者外周血Th17、Treg、白细胞介素、黏附因子及可溶性E选择素的水平及其临床意义

近些年来,许多患者被发现不仅患有变应性鼻炎,同时还身患哮喘称之为变应性鼻炎-哮喘综合征。变应性鼻炎和哮喘共存,给医师治疗带来困扰。研究报道哮喘患者外周血T细胞亚群含量紊乱与气道重塑以及炎性细胞浸润程度有关。本研究分析哮喘合并变应性鼻炎患者外周血Th17、Treg、白细胞介素、黏附因子、可溶性E选择素的水平与临床意义报道如下。

维生素E对小鼠胸腺和脾脏T淋巴细胞转化及MΦ诱导IL－1的影响

ＶＥ缺乏组、１／３需要量组、需要量组、３倍需要量组、２０倍需要量组的初断奶小鼠喂养８周后观察Ｔ淋巴细胞转化及Ｍ中诱导ＩＬ－１反应。结果表明，ＶＥ增强半合适、合适剂量ＣｏｎＡ诱导的胸腺、脾脏Ｔ淋巴细胞转化，且半合适剂量诱导的反应高于合适剂量，ＶＥ增强合适剂量ＰＨＡ诱导的脾Ｔ细胞反应，但不影响其诱导胸腺Ｔ细胞反应。ＶＥ还提高ＭΦ诱导ＩＬ－１生成。上述实验以缺乏组反应最弱，３倍量组反应最强，而２０倍量组反有下降趋势。

右归丸对雄激素致排卵障碍型不孕大鼠血清E2、T和IGF-1水平影响研究

目的:右归丸对雄激素致排卵障碍性不孕大鼠血清中E2、T和IGF-1水平的影响,以进一步探讨右归丸治疗不孕症的作用机理。方法:将43只9日龄SD雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、右归丸组、克罗米芬组。于颈背下注射丙酸睾丸酮建立ASR大鼠模型,第80天开始灌服右归丸制剂,5周后股动脉取血,并取出新鲜卵巢组织,观察卵巢形态学,用放免法检测血中E2和T水平,用酶联免疫法检测血清中IGF-1水平。结果:右归丸能够促进卵泡生长发育及排出,并有黄体生成,降低病理性囊性卵泡数。右归丸能够增加血清中E2含量(P<0.05),降低血清中T的含量(P<0.05),右归丸有降低IGF-1趋势。结论:右归丸有可能通过降低IGF?I和T,促进T转化为E2这一途径,从而促进卵泡生长发育及排出。

维生素E抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化

目的:研究维生素E对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法:利用MTT研究维生素E对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,利用油红O染色法测定维生素E对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果:维生素E对3T3-L1前脂肪细胞增殖无影响,10～100μmol/L维生素E能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化。结论:维生素E对前脂肪细胞分化具有抑制作用。

CYP2E1-RsaⅠ、GSTT1基因多态性与胰腺癌遗传易感性的病例对照研究

目的探讨吸烟和细胞色素P4502El-RsaⅠ（CYP2E1-RsaⅠ）、谷胱甘肽硫转移酶T1（GSTT1）基因多态性与胰腺癌发病之间的关系。方法采用病例-对照研究的方法,以150例胰腺癌患者及150例非癌对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术分析了Ⅰ相代谢酶CYP2E1-RsaⅠ和Ⅱ相代谢酶GSTT1基因多态性。结果CYP2E1-RsaⅠ野生纯合型（c1/c1）和GSTT1基因缺陷型[GSTT1（-）]频率分布分别为38.7%、69.3%（病例组）和20.7%、44.7%（对照组）,二者经χ2检验差异有显著性（χ2=15.75,P〈0.01;2χ=18.62,P〈0.01）。c1/c1基因型者患胰腺癌的风险显著增加（OR=3.19,95%CI=2.534.26）。GSTT1（-）者患胰腺癌的风险也显著增加（OR=2.85,95%CI=1.924.64）。基因突变的协同分析发现CYP2E1-RsaⅠ（c1/c1）/GSTT1（-）在胰腺癌组和对照组中的分布频率分别为30.7%和6.7%,二者经2χ检验有显著性差异（2χ=42.39,P〈0.01）。CYP2E1-RsaⅠ（c1/c1）/GSTT1（-）患胰腺癌的风险显著增加（OR=16.63,95%CI=8.9422.01）。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率（OR=2.74,95%CI=1.324.58,P〈0.01）,CYP 2E1-RsaⅠ（c1/c1）及GSTT1（-）与吸烟有协同作用（OR=8.84,95%CI=5.5111.62;OR=20.40,95%CI=4.9829.53）。结论CYP2E1-RsaⅠ（c1/c1）和GSTT1（-）是胰腺癌的易患因素,二者对胰腺的发生有协同作用,吸烟与胰腺的易感性也有关,CYP2E1-RsaⅠ（c1/c1）、GSTT1（-）与吸烟在胰腺癌的发生上也有相互促进作用。

PGE2对非小细胞肺癌组织浸润T淋巴细胞中PD-1表达的影响及其机制

目的:探讨程序性死亡受体1 (PD-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织浸润CD4+和CD8+T淋巴细胞中的表达情况,阐明前列腺素E2 (PGE2)对PD-1的影响及其相关机制。方法:选取确诊的75例NSCLC患者作为研究对象,根据国际抗癌联盟(UICC)颁布的NSCLC TNM分期标准,将患者分为I~Ⅳ期。应用密度梯度离心法分离获得NSCLC组织匀浆中浸润的单个核细胞。采用流式细胞术分析浸润淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞所占百分率。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blotting法检测浸润T淋巴细胞中PD-1 mRNA和蛋白表达水平。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中PGE2水平。结果:Ⅲ期和Ⅳ期NSCLC患者局部浸润CD8+T淋巴细胞百分率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者(P<0.05),而CD4+T淋巴细胞百分率在不同TNM分期患者组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。在Ⅳ期NSCLC患者CD8+T淋巴细胞中PD-1 mRNA表达水平高于其他分期患者(P<0.05),在不同TNM分期患者CD4+T淋巴细胞中PD-1 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。在Ⅲ期和Ⅳ期NSCLC患者血清中PGE2水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者(P<0.05)。PGE2刺激CD8+T淋巴细胞后EP2和EP4 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而加入EP2和EP4拮抗剂后CD8+T淋巴细胞中PD-1mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD-1蛋白表达量降低。结论:PGE2能够通过PGE2/EP2和PGE2/EP4信号通路促进NSCLC组织浸润CD8+T淋巴细胞中PD-1的表达,从而抑制CD8+T淋巴细胞的免疫功能。

脂微球前列腺素E1与丹参对2型糖尿病患者NO、ET的对比研究

目的:比较2型糖尿病(type 2 Diabetics,T2DM)患者应用脂微球前列腺素E1(Lipo PGE1)和丹参后其血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)的变化。方法:66例糖尿病患者,按1999年WHO糖尿病诊断标准确认,随机分为两组:Lipo PGE1组和丹参组。两组患者临床检查均无严重心、肾、脑等并发症。ET 1 以放射免疫法测定,NO以硝酸还原法测定。结果:(1)两组T2DM患者的年龄、病程、体重指数(BMI)、收缩压、舒张压、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、空腹及餐后2h胰岛素、C 肽值均无显著差异。(2)两组T2DM患者用药前空腹及餐后2h血糖无显著差异,治疗2 周后两组空腹及餐后2h血糖亦无显著差异,但均比用降糖药前明显下降,有显著差异。治疗前,PEG1 组无论空腹还是餐后2 hET值均高于丹参组,而NO水平低于丹参组。经2周治疗后,丹参组ET值仅见餐后2 h有显著下降, P<0.05,余未见变化;而PEG1 组不论空腹,还是餐后2hET值均见有极显著下降, P均<0.001,且NO水平也显著升高,P均<0.05。结论:两组T2DM患者在降糖幅度相当的前提下,应用Lipo PGE1在糖尿病患者中能降低ET水平,提高NO浓度,丹参针剂未见相同结果,提示该药物不仅能直接扩张血管作用,而且还能调节ET及NO水平的间接效果,Lipo PGE1明显优于丹参针剂。

胃癌外周血CD4^+-CD25^(high)-Foxp3^+-调节性T细胞异常增高与TGF-β1、PGE_2的相关性分析

目的:探讨胃癌患者外周血中CD4^+-CD25^(high)-Foxp3^+-调节性T细胞(Treg)的比例与血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、前列腺素E_2(PGE_2)表达水平的相关性。方法:采用流式细胞术检测26名健康体检者(对照组)和39例胃癌患者(胃癌组)外周血中CD4^+-CD25^(high)-Foxp3^+-Treg细胞比例,同时运用ELISA法检测其血清中TGF-β1、PGE_2的表达水平。结果:胃癌患者的CD4^+-CD25^(high)-Foxp3^+-Treg细胞比例与其TNM分期相关,该比例随TNM分期上升而上升,其中TNMⅢ、Ⅳ期患者与健康对照者间的细胞比例差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌组和健康对照的组血清TGF-β1[(14.85±6.16)μg/L比(10.33±3.25)μg/L]和PGE_2表达[(100.46±47.52)ng/L比(74.12±44.96)ng/L]间差异亦有统计学意义(P<0.01),其中TNMⅢ、Ⅳ期患者TGF-β1水平与Treg相关(r=0.750,P<0.01),而PGE_2在TNMⅠ、Ⅱ期和TNMⅢ、Ⅳ期均与Treg相关(r=0.704,P<0.01;r=0.748.P<0.01)。结论:胃癌患者外周血中CD4^+-CD25^(high)-Foxp3^+-Treg细胞比例随肿瘤的进展而增高,而其血清TGF-β1、PGE_2表达水平与CD4^+-CD25^(high)<Foxp3^+-Treg细胞116例相关。

前列腺素E_2对Th1/Th2和Tc1/Tc2淋巴细胞免疫平衡的调节

本研究探讨前列腺素E2(PGE2)对外周血T淋巴细胞体外增殖的影响,以及对Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞的免疫平衡的调节作用。不同浓度PGE2与抗CD3和抗CD28单克隆抗体(mAb)和健康成人外周血单个核细胞(MNC)共同培养120小时,测定细胞增殖程度。ELISA方法测定24、48、72和120小时细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4浓度变化。流式细胞仪测定CD4+IL-4+T细胞和CD4+IFN-γ+T细胞以及CD8+IL-4+T细胞和CD8+IFN-γ+T细胞比值。各实验均以不加PGE2为对照。结果表明:①随PGE2的浓度增加,T细胞体外增殖的抑制率明显增高(p=0.001);T细胞增殖抑制率与PGE2浓度之间呈明显的正相关(r=0.889,p=0.000)。②实验组培养120小时的IFN-γ浓度与第72小时的IFN-γ浓度差异无显著性(p=0.917),对照组细胞培养上清液中的IFN-γ浓度随时间持续增高(p=0.046);实验组不同时间的IFN-γ浓度均明显低于对照组(p<0.05)。实验组在不同时间产生IL-4浓度无明显变化(p=0.400);对照组24小时细胞培养上清中IL-4浓度高于48、72和120小时(p值分别为0.007、0.003和0.002);实验组细胞培养24小时时IL-4浓度明显低于对照组(p=0.037);实验组细胞培养48、72和120小时与对照组IL-4浓度差异无显著性(p>0.05)。③实验组与对照组CD4+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.767);实验组CD4+IL-4+T细胞比例略高于对照组(p=0.051);实验组CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.011)。实验组与对照组CD8+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.441);实验组CD8+IL-4+T细胞的比例明显高于对照组(p=0.015);实验组CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.038)。结论:PGE2体外抑制外周血T细胞的增殖;PGE2作用24小时即可抑制IFN-γ和IL-4的产生,并且明显影响T细胞IFN-γ的高峰出现,对IFN-γ具有持续性的抑制作用,对IL-4的持续性影响并不明显;PGE2使CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值和CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值增加,调节T细胞的免疫反应向Th2/Tc2方向发展。

siRNA沉默E2F1对膀胱癌T24恶性生物学行为的影响

目的明确转录因子E2F1在膀胱癌T24恶性生物学行为形成中的作用。方法运用siRNA干扰T24中的E2F1基因,MTT法检测沉默前后T24存活能力的变化,平板克隆形成实验检测沉默前后T24克隆形成能力的变化,Transwell小室迁移和侵袭实验检测T24迁移和侵袭能力的变化。结果 siRNA可以下降E2F1 87%左右的蛋白表达,E2F1被干扰后,T24的存活能力下降,克隆形成能力减弱,迁移和侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默E2F1可以降低膀胱癌T24的恶性,提示E2F1可以作为膀胱癌一个潜在的治疗靶点。

改良R.E.N.A.L.评分系统在后腹腔镜下T_1期肾癌肾部分切除术中的应用效果评价

目的:评价针对性改良R.E.N.A.L.评分系统在后腹腔镜下T1期肾癌肾部分切除术中的临床应用效果。方法:根据后腹腔手术的解剖特点,将R.E.N.A.L.评分系统进行针对性改良,回顾性分析2007年1月~2014年3月52例T1期肾癌患者临床资料,分析比较改良前后R.E.N.A.L.评分系统的手术难度评估特异性、敏感性及约登指数,以及与围手术期结局的关系。结果:改良R.E.N.A.L.评分系统对后腹腔镜下肾部分切除手术难度的评估特异性、敏感性及约登指数综合指标明显优于R.E.N.A.L.评分系统,改良R.E.N.A.L.评分系统与手术时间、热缺血时间、术中失血量存在显著相关性(P<0.05)。结论:改良R.E.N.A.L.评分系统对于术前评估后腹腔镜下T1期肾癌肾部分切除术的手术风险具有良好的应用效果。

PPAR-γC161T和CYPⅡE1基因多态性与脂肪肝中医证型的关系

目的探讨PPARγC161-T、CYPⅡE1基因多态性与脂肪肝中医证型的关系。方法将183例脂肪肝患者辨证分为瘀证组、痰证组和无证可辨组,检测183例患者及40例健康者的身体质量指数(BMI)、腰围、血压、肝肾功能、血脂、空腹血糖(FBG)、HOMA–IR(稳态胰岛素抵抗指数),检测其PPARγC161-T、CYPⅡE1的基因多态性及等位基因频率。结果瘀证组和痰证组总甘油三脂(TG)(P<0.01)、总胆固醇(TC)(P<0.05)、低密度脂蛋白(LDL-C)(P<0.05)均高于无证可辨组。PPAR-γC161-T基因型频率及等位基因频率在脂肪肝各证型组与对照组中无统计学差异(P>0.05)。CYPⅡE1基因型频率及等位基因频率在脂肪肝各证型组与对照组中有统计学差异(P<0.05)。结论脂质代谢紊乱及相关改变与脂肪肝痰、瘀证密切相关。CYPⅡE1基因多态性可能在脂肪肝痰瘀证的形成以及转化中起着决定性的作用。

蕴含K_(1,t)+e的可图序列

本文刻划了蕴含K1,t+e的可图序列,其中t≥3,而K1,t+e是向完全二部图K1,t添加一条边后构成的简单图.