T14502C突变位点在Leber遗传性视神经病变发生发展中的作用

目的分析T14502C突变位点在Leber遗传性视神经病变(Lebers hereditary optic neuropathy,LHON)发生发展中的作用。方法对15例家系成员进行视力、眼压、裂隙灯、眼底、色觉及眼底荧光素血管造影等眼科检查;对以上成员进行高盐法线粒体DNA提取,针对目前公认的3个原发性突变位点G11778A、T14484C、G3460A进行PCR,扩增产物纯化后进行双向测序。结果 15例家系成员中,10例同时携带有G11778A和T14502C两个突变位点,其中的3例为LHON患者。平均发病年龄13岁,均为男性且均无视力恢复。结论与单独携带G11778A位点的中国家系相比,同时携带G11778A和T14502C位点可能导致家系成员LHON发病年龄偏低以及更加不良的视力预后。

FUT1基因新cSNPs的鉴别及其对仔猪抗大肠杆菌F18侵染的影响

【目的】鉴别影响中国地方猪种仔猪抗水肿与腹泻病的关键基因位点。【方法】采用比较测序法对位置候选基因a1-岩藻糖转移酶基因(FUT1)进行cSNPs搜寻、鉴别,使用PCR-SSCP在10个中、西方猪种共计539个样本中开展SNPs遗传多态性检测;采用小肠上皮细胞体外显微黏附实验在白色杜洛克×二花脸资源家系的479个F2代个体中开展大肠杆菌F18ab黏附表型测定;使用SAS软件包分析SNPs基因型与黏附表型间的相关性。【结果】在FUT1基因中鉴别到两个新的cSNPs位点(M229C/T和M714T/C),其中M714T/C为同义突变,M229C/T引起亮氨酸转变为苯丙氨酸;遗传多态性分析表明FUT1 M229C/T等位基因频率在中国地方猪群与西方商业猪群间差异显著而在中国地方猪群间差异不显著;在白色杜洛克×二花脸资源群体中,进一步对FUT1 M229C/T位点分析其与黏附表型的相关性,结果显示FUT1 M229C/T基因型与黏附表型之间呈显著相关(P<0.05)。【结论】FUT1 M229C/T位点可能是决定中国地方猪水肿与腹泻病的变异位点,该位点在中国地方猪抗水肿与腹泻病选育中具有重要潜在的应用价值。

原因不明复发性流产患者血中亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C位点突变的研究

目的 探讨 5 ,10 亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变与原因不明复发性流产 (unexplainedrecurrentspontaneousabortion ,URSA)易感因素的相关性。 方法 采用PCR-限制性片段长度多态性方法 ,检测 14 7例原因不明复发性流产患者 (URSA组 )和 82例有正常妊娠史的妇女 (对照组 )血中亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变。结果 ( 1)C6 77T的 3种基因型在URSA组和对照组总体分布存在显著性差异 (P =0 0 12 ) ,其中URSA组 :基因型CC占 33 3% ,CT占 5 3 1% ,TT占 13 6 % ,对照组 :基因型CC占 5 2 4 % ,CT占 5 1 5 % ,TT占 6 1%。两组 6 77CC基因表达差异有显著性 (P =0 0 0 5 ) ,URSA组C和T等位基因分别为 4 0 1%、5 9 9% ,两组基因分布情况比较 ,差异有显著性 (P <0 0 0 5 ) ;( 2 )A12 98C的 3种基因型在URSA组和对照组中总体分布情况比较 ,差异无显著性 ,12 98AA/AC/CC基因型和A/C等位基因频率比较 ,差异无显著性 (P >0 0 0 5 ) ;( 3)C6 77T/A12 98C连锁基因分析显示 ,8种连锁基因型中 ,URSA组 6 77CC/ 12 98AA表达频率显著降低 ,而 6 77(CT +TT) / 12 98CC仅在URSA组中表达。结论 URSA与亚甲基四氢叶酸还原酶基因C6 77T和A12 98C位点突变有关。

人胰岛素原基因突变体的构建

目的 完成人胰岛素原基因的定点突变 ,使之能在普通细胞中被Furin蛋白酶识别去除C肽分泌成熟胰岛素。方法 采用PCR体外定点突变技术 (PCRsite directedmutagenesis ,PCR SDM) ,设计 4对引物 ,引入 5个Furin识别的突变位点 ,通过重叠延伸法PCR扩增 ,使人胰岛素原编码基因B10密码子由CAC突变为GAC ;C3密码子由GAA突变为AAA ;C4密码子由GCT突变为CGT ;C3 2密码子由CTT突变为CGT ,将扩增片段克隆入T载体并测序。结果 DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求。结论 应用PCR诱导突变技术 ,在体外能准确、简便有效的诱导胰岛素原基因突变 ,使体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素的细胞克隆成为可能。

MTHFR基因C677T位点突变与重度子痫前期发生及妊娠结局的关系

目的探讨MTHFR基因C677T位点突变与重度子痫前期(severe preeclampsia,SPE)发生及妊娠结局的关系。方法选择2018年6月至2020年5月于我院妇产科就诊的300例重度子痫前患者作为观察组,随机选择同期我院妇产科正常孕妇300例作为对照组。从两组孕妇血液样本中提取DNA,经PCR扩增和Sanger测序测定MTHFR基因C677T位点多态性,观察并记录两组孕妇的妊娠结局,分析MTHFR基因C677T位点多态性与SPE发生及妊娠结局的相关性。结果MTHFR基因C677T位点分别为野生型CC、杂合型CT和纯合型TT。MTHFR C677T位点的三种基因型(CC、CT、TT)在观察组和对照组中分布频率分别为:15.00%vs 45.00%、60.00%vs 42.67%、25.00%vs 12.33%,等位基因(C、T)在观察组和对照组中的分布频率分别为:45.00%vs 66.33%、55.00%vs 33.67%,两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.851、6.624、7.318,P<0.05)。在三种遗传模式下(CT/CC、TT/CC和T/C)观察组患SPE的风险分别是对照组的4.23倍(95%CI:1.39~12.89)、6倍(95%CI:1.46~24.70)和2.5倍(95%CI:1.27~4.55)。观察组早产、宫缩乏力、新生儿窒息、胎儿宫内窘迫、产后出血及其他发生率均显著高于对照组,差异具有统计学意义(χ^(2)=17.683、20.194、8.791、14.559、16.611、3.097,P<0.05)。观察组MTHFR基因C677T位点中TT基因型的早产、宫缩乏力、新生儿窒息、胎儿宫内窘迫、产后出血及其他发生率最高,CT次之,CC最低,差异具有统计学意义(F=11.578、9.366、12.181、8.710、11.701、8.127,P<0.05),对照组MTHFR基因C677T位点的各基因型的不良妊娠解决发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。MTHFRC677T位点的三种基因型(CC、CT、TT)在不良妊娠结局组和正常妊娠结局组中分布频率分别为:16.67%vs 47.14%、59.44%vs 42.38%、23.88%vs 10.48%,等位基因(C、T)在不良妊娠结局组和正常妊娠结局组中的分布频率分别为:46.39%vs 68.33%、53.61%vs 31.67%,两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.518、6.936、7.208,P<0.05)。在三种遗传模式下(CT/CC、TT/CC和T/C)不良妊娠结局组的不良妊娠结局风险分别是正常妊娠结局组的4.15倍(95%CI:1.37~12.78)、6.55倍(95%CI:1.42~24.85)和2.38倍(95%CI:1.24~4.51)。结论MTHFR基因C677T位点突变是SPE发生和不良妊娠结局的危险因素,其有望成为评价和预测SPE及不良妊娠结局的一个敏感可信的指标。

白细胞介素1α基因启动子-889位点C/T基因型与冠心病严重程度的关系

目的 探讨白细胞介素 1α(IL 1α)基因启动子 889位点C/T基因型与冠心病 (CHD)严重程度的相关关系。方法 采用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)分析的方法 ,检测118例CHD患者和 184名健康者IL 1α( 889C/T)基因型 ,并用酶联免疫吸附试验检测了所有研究对象血清IL 1α水平。结果 IL 1α( 889)位点各基因型在心肌梗死组和对照组间的分布差异存在显著性(χ2 =5 96 ,P <0 0 1) ,CT基因型患心肌梗死的相对风险度约是CC基因型的 2 39倍 [比值比 (OR) =2 39,95 %可信区间 (CI) =1 17～ 4 86 ];在CHD组 ,CT基因型患者血清IL 1α水平 (13 5 1± 6 85 )ng/L显著高于CC基因型患者 (8 0 4± 4 4 7)ng/L ,P <0 0 0 1。结论 IL 1α( 889)位点CT基因型与CHD的严重程度存在相关关系 ,其机理可能是该位点DNA突变影响了IL 1α的分泌。