蛇床子素逆转人膀胱肿瘤T24/ADM细胞耐药作用及其机制

目的研究蛇床子素(osthole,OST)对T24/ADM细胞多药耐药的逆转及对P-gp表达、功能的影响。方法采用MTT法筛选OST对T24/ADM细胞无毒或低毒浓度,以筛选出的浓度作为耐药逆转的实验浓度。分别利用MTT法分别检测阿霉素(adriamycin,ADM)、氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)及顺铂(cisplatin,DDP)对细胞株T24和T24/ADM以及OST处理后的T24/ADM细胞的半数抑制浓度IC50。用流式细胞仪测定OST对T24/ADM细胞上P-gp表达的影响。结果浓度17μmol/LOST对T24/ADM无明显细胞毒性,T24/ADM对ADM、FU和DDP均有不同程度的。耐药,耐药倍数分别为18.86、5.09、3.28,使用17μmol/LOST处理后T24/ADM对上述ADM、FU和DDP的敏感性均有不同程度的提高,ADM对耐药细胞株的IC50由(0.962±0.017)μg/mL降至(0.364±0.031)μg/mL,逆转指数为2.64;FU对耐药细胞株的IC50由(0.723±0.003)μg/mL降至(0.463±0.021)μg/mL,逆转指数为1.56;DDP对耐药细胞株的IC50由(0.664±0.007)μg/mL降至(0.587±0.016)μg/mL,逆转指数为1.13,使T24/ADM细胞内P-gp蛋白表达明显下降,下降了16.32%(P<0.05)。结论蛇床子素在体外能部分逆转T24/ADM的耐药性,逆转机制可能是通过抑制P-gp蛋白表达实现的。

苦参碱对T24/ADM细胞耐药逆转研究

目的:研究苦参碱对T24/ADM细胞耐药逆转的作用。方法:证明T24/ADM具有多药耐药性。将苦参碱按不同浓度分组加入到T24/ADM中,测定其细胞毒性。将非毒性浓度苦参碱按不同浓度分组加入到T24/ADM中,测定各组细胞凋亡率和检测细胞P-gp的表达变化并确定最佳逆转浓度。结果:苦参碱组的细胞凋亡率均高于对照组有显著性差异(P<0.05),且P-gp的表达明显降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:苦参碱对T24/ADM细胞有耐药逆转作用。

雄黄对乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的逆转及机制研究

目的 探讨中药雄黄对乳腺癌多药耐药细胞系 (MCF 7/ADM )的逆转作用及可能的逆转机制。方法 药物敏感试验采用四氮唑蓝 (MTT)比色法 ,细胞内药物浓度测定采用荧光分光光度法 ;基因表达水平检测采用RT -PCR法。结果 雄黄在 0～ 2 5 μg/ml浓度范围内对MCF 7/ADM细胞未见明显毒副作用 ;15 μg/ml、2 5 μg/ml雄黄逆转倍数分别为 2 0倍和 2 8倍 ,并能明显抑制mdr 1基因的转录水平。 结论 雄黄可以逆转MCF 7/ADM细胞的多药耐药性 ,并呈剂量依赖性 ;可能的逆转机制为下调mdr

三氧化二砷逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药的机制研究

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞耐药性的逆转作用及其相关机制。方法 采用MTT法检测As2 O3 的细胞毒性及非细胞毒性剂量 ,对MCF 7/ADM细胞药敏性的影响。以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变 ,明确As2 O3 对MCF 7/ADM的逆转作用。同时 ,于逆转前后分别采用生化方法测定谷胱甘肽S 转移酶 (GSTs)酶活性 ,RT PCR方法检测GST πmRNA表达水平的改变。结果 As2 O3 的非细胞毒性剂量为 0 .2 μmol/L ,低毒剂量为 0 .8μmol/L。0 .2 μmol/LAs2 O3 可增加MCF 7/ADM细胞内阿霉素 (ADM)浓度 ,使细胞MCF 7/ADM的IC50 由原来的5 3.74 μmol/L降低至 2 5 .0 μmol/L ,其逆转倍数为 2 .1倍。在 0 .2 μmol/L、0 .8μmol/LAs2 O3 作用前后 ,GSTs酶活性有显著性改变 ,由 2 9.6 8± 0 .2 9(U/ml)分别降低为 19.2 9± 2 .10 (U/ml)、12 .6 6± 2 .78(U/ml) ,P <0 .0 5 ,而GST πmRNA的表达水平也呈不同程度的下调。结论 As2 O3 可部分逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对ADM的耐药性 ,其逆转机制可能与细胞内GST π的改变有关。

蛋白激酶C-α在调节人膀胱癌T24细胞多药耐药中的作用

目的探讨蛋白激酶C-α(PKCα)对人膀胱癌T24细胞多药耐药的调节作用。方法将载有PKCα基因的表达质粒GFP-PKCα导入人膀胱癌细胞系T24。应用噻唑蓝(MTT)比色法,检测T24/PKCα及亲本细胞对阿霉素的敏感性,以及在激活(10nmol/LPMA2h)和抑制(10nmol/LCalphostinC2h)PKCα的情况下,T24/PKCα细胞对阿霉素敏感性的变化。同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(MDR-1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)基因的表达。结果转染了PKCα基因后,T24细胞对阿霉素的耐药性增强(耐药指数7.52,P<0.05)。PKCα的激活显著提高了T24细胞的耐药性(耐药指数153.78,P<0.01),而抑制PKCα活性则使耐药指数降至1.20(P>0.05)。T24/PKCα的MDR-1表达水平是亲本细胞的2.28倍(P<0.01)。激活PKCα可使MDR-1基因表达水平较亲本细胞升高12.80倍(P<0.01),抑制PKCα则MDR-1表达下降(P>0.05),而MRP和LRP基因表达水平并无明显变化(P>0.05)。结论PKCα可能通过上调MDR-1表达,在人膀胱癌的化疗耐药中起到了重要的作用。