全反式维甲酸诱导膀胱癌T24细胞株凋亡的研究

目的 :探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人膀胱癌 T2 4细胞株的凋亡诱导作用。方法 :应用荧光显微镜、流式细胞仪及 DNA琼脂糖凝胶电泳等技术研究 T2 4细胞凋亡。结果 :用 3× 10 - 6 m ol/ L 的 ATRA处理 T2 4细胞6天 ,荧光显微镜下计数 T2 4细胞凋亡率为 15 .2 0 % ,对照组为 0 .0 1% (P <0 .0 5 ) ;流式细胞仪测定 T2 4细胞凋亡率为 15 .31% ,对照组为 1.49% ;T2 4细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带。结论 :ATRA对人膀胱癌 T2 4细胞株有凋亡诱导作用 ,为

聚维酮联合阿霉素对人膀胱癌T24细胞株的作用

聚维酮（PVP）作为阿霉素（ADM）溶剂行膀胱灌注具有黏膜黏附和免疫增强作用。但PVP是否具有抗人膀胱癌及促进化疗药疗效的作用报道尚少。对此我们观察了PVP联合ADM对人膀胱癌T24细胞的作用，报道如下。

siRNA沉默RIP1对膀胱癌细胞株T24恶性生物学行为的影响

目的利用siRNA转染干扰沉默膀胱癌细胞株T24的受体相互作用蛋白1(RIP1)基因,并观察沉默前后T24恶性生物学行为的变化。方法使用Lipofectamine誖2000和RIP1siRNA与膀胱癌细胞株T24共孵育48 h,RT-PCR和Western-blot检测孵育前后RIP1mRNA和蛋白质的表达变化以观察沉默效率,并观察沉默前后T24增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力的变化。结果与siRNA孵育48 h后,RIP1的沉默效率可以达到85%,RIP1沉默后T24的增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力下降。结论沉默RIP1基因可以降低T24的恶性程度,提示RIP1在膀胱癌T24中起癌基因的作用。

丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞Mta-1 mRNA、Mta-1蛋白表达的影响及意义

目的研究人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达,及丝裂霉素C(MMC)对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mat-1蛋白表达的影响。方法人膀胱癌T24细胞株培养,MMC干预,用原位杂交和免疫组化检测Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达。结果人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA阳性细胞表达率MMC组(35.1±9.0)%明显低于对照组组(61.9±12.8)%;Mta-1蛋白阳性细胞表达率MMC组(36.0±8.03)%亦明显低于对照组(57.7±10.1)%,P<0.01。结论人膀胱癌T24细胞株中存在Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的高表达,MMC对人膀胱癌T24细胞株中Mta-1 mRNA和Mta-1蛋白的表达具有抑制作用。

环氧化酶-2抑制剂Nimesulide对膀胱癌T24细胞体外生长的抑制作用

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂Nimesulide(NIM)对人膀胱癌T24细胞株体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用细胞形态学、MTT法、流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法(AO-EB)等技术检测NIM对体外培养的人膀胱癌细胞株T24生长的抑制效应。结果细胞形态学观察可见NIM对T24细胞生长具有明显的细胞毒作用;MTT法、流式细胞术分析显示NIM能明显抑制T24细胞的增殖,且呈剂量、时间依赖关系;细胞周期分析表明,NIM能使T24细胞G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例下降;流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡率与NIM作用时间和剂量相关;荧光显微镜检查显示NIM处理的T24细胞AO-EB双染色后,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月形改变,固缩或片段化的核。结论COX-2抑制剂NIM对T24细胞生长具有明显的抑制作用,其作用机制可能与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。

吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡的机制。方法采用MTT法、流式细胞术、透射电子显微镜和RT-PCR技术,研究不同浓度的吡柔比星对人膀胱癌细胞株T24的抑制作用,并检测Survivin mRNA表达的变化。结果吡柔比星浓度为10.0和100.0 mg/L时,对T24细胞生长的抑制率分别为89.48%和90.89%,G1期前出现明显的凋亡峰。吡柔比星能明显下调Survivin蛋白的表达水平,具有浓度依赖性。结论吡柔比星诱导膀胱癌细胞凋亡是通过抑制Survivin蛋白的表达,且在一定剂量范围内具有浓度依赖性。

二烯丙基二硫化物对膀胱癌细胞p-ERK表达的影响研究

目的观察大蒜提取物二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK表达的影响,以探讨二烯丙基二硫化物抗膀胱癌的作用,为应用于临床肿瘤的治疗提供部分理论基础。方法用培养的人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育培养48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测二烯丙基二硫化物对人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因转录的影响;并裂解人膀胱癌T24细胞株提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹检测p-ERK蛋白的表达情况。结果人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后,p-ERK基因表达mRNA的水平明显降低(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05);人膀胱癌T24细胞株与二烯丙基二硫化物共孵育后即可检测出p-ERK蛋白的表达减少(P<0.05),而对照组表达水平无明显变化(P>0.05)。结论二烯丙基二硫化物可下调人膀胱癌T24细胞株p-ERK基因的转录与p-ERK蛋白的表达,这可能是二烯丙基二硫化物抗癌的机制之一。

卡介苗提取物体外诱导小鼠脾淋巴细胞对人膀胱癌细胞的杀伤作用

目的分离活卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)的有效组分,分析其有效组分诱导的小鼠脾淋巴细胞体外对人膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤作用。方法采用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解,通过Sephadex G100凝胶层析对其有效组分进行分离及分子量的测定,用SDS-PAGE凝胶电泳进行纯度鉴定;采用四氮唑盐(MTT)法测定BCG有效组分BCGE2诱导的小鼠脾淋巴细胞对人膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤活性。结果 BCGE2可体外诱导小鼠脾淋巴细胞对膀胱癌细胞株T24细胞的杀伤作用,在效靶比为20:1时对T24细胞的抑制率为42.31%,而对照组仅为13.32%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 BCGE2诱导的小鼠脾淋巴细胞对人膀胱癌细胞株T24的杀伤作用很显著,且随着效靶比的增加而增强。

抑制未成熟同源蛋白增强子基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨未成熟同源蛋白增强子(ERH)基因敲除对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过克隆有干扰ERH基因序列的慢病毒感染T24细胞,建立稳定的ERH基因抑制的T24细胞克隆,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测ERH mRNA的表达。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法、克隆形成法和流式细胞术检测ERH基因敲除对细胞增殖和凋亡的影响。通过裸鼠皮下成瘤实验验证体内ERH基因敲除对T24细胞成瘤效果的影响。结果 转染慢病毒后,经qPCR检测,ERH基因敲除效果满意[敲除组ERH mRNA相对表达量为0.079±0.007,未经处理的T24细胞(ERH正常组)为1.006±0.126;t=12.72,P=0.0002]。MTT实验结果提示,敲除ERH基因的T24细胞增殖能力减弱[ERH敲除组490nm波长处吸光度(A490)值为0.13±0.00,ERH正常组为0.66±0.01;t=104.61,P<0.0001]。克隆形成实验结果提示其克隆能力减弱[ERH敲除组克隆数为(10.5±1.2)个,ERH正常组为(196.4±4.0)个;t=73.63,P<O.0001]。流式细胞术检测结果示细胞凋亡率增加[ERH敲除组凋亡率为(11.0±0.5)%,ERH正常组为(4.2±0.5)%;t=16.06,P<0.0001]。裸鼠皮下成瘤实验活体成像结果显示,ERH敲除组肿瘤区域总荧光强度为(4.67±0.59)× 10^10μW/cm^2,ERH正常组相应部位为(9.54±4.20)×10^10μW/cm^2,差异有统计学意义(t=3.64,P=O.0051);ERH敲除组肿瘤重量为(0.80±0.62)g,ERH正常组为(1.79±0.71)g,差异有统计学意义(t=3.33,P=0.0037)。结论 ERH基因敲除可以抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,促进其凋亡。

驱动蛋白Eg5小分子干扰RNA对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

我们运用小干扰RNA（siRNA）沉默Eg5在膀胱癌T24细胞株中表达，观察其对膀胱癌的生物学行为影响。

转移抑制因子1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察转移抑制因子1（MTSS1）在膀胱癌巾组织的表达及其对膀胱癌T24细胞株增殖和凋亡的影响。方法实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测120例膀胱癌及相应癌旁组织中MTSS1基因的表达。采用基因共转染法，将膀胱癌T24细胞设为3组：空白对照组未进行转染。实验组用PEFMTSS1质粒和PSV2neo共转染，阴性对照组用PEF和PSV2neo共转染。成功转染后，Westernblot检测转染后3组细胞MTSS1蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法测定细胞生长抑制率，流式细胞法检测3组T24细胞的凋亡率。结果（1）Real—timePCR结果显示：与癌旁组织比较，膀胱癌组织中MTSS1mRNA表达明显降低，仅为癌旁组织表达量的16．36％，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）Real—timePCR和免疫细胞组织化学证实转染后膀胱癌T24细胞中有MTSS1稳定表达。（3）MTT法结果显示：培养0、24h时各组124细胞数差异无统计学意义（P〉0．05），48h后，随着培养时间延长，转染组T24细胞数明显低于空白对照组与阴性对照组（P〈0．05），而空白对照组与阴性对照组T2g细胞数差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）实验组中的T24细胞株的生长抑制率明显降低，细胞增殖活力明显增加，而且凋亡率明显降低，和对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）形态学观察：实验组中，MTSS1作用于膀胱癌124细胞株24h后，细胞发生明显凋亡或坏死。而两对照组仍以正常T24膀胱癌细胞为主。结论MTSS1基因在膀胱癌巾低表达，MTSS1在体外促进膀胱癌T2g细胞增殖并抑制细胞凋亡。

曲古霉素A抑制膀胱癌移植瘤的研究

我们以T24细胞株建立膀胱癌的裸鼠皮下移植瘤摸型，观察曲古霉素A（TSA）的抑瘤作用，初步探讨其作用机制。