应用FITC系统建立非均衡竞争游离三碘甲腺原氨酸(FT_3)化学发光法

目的制备抗人T3多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanat,FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测游离三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)的方法。方法以T3-牛血清白蛋白(bovin serum albumin,BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化并联接辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)。用FITC标记T3-类似物。采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,通过非均衡竞争法原理,固相抗原与血清中FT3竞争结合抗T3抗体-HRP,通过标准曲线计算FT3浓度,建立方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(Bovine serum gamma globulin,BGG)包被(非FITC系统)的检测系统相比较。将本方法应用于临床120份血清标本的检测,定量结果与德国罗氏2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elec-sys 2010)定量结果进行比较。结果抗体经酶联免疫吸附实验证明对T3、具有高度特异性。应用FITC系统建立的非均衡竞争化学发光免疫分析标准曲线的线性R>0.99,线性范围0.25～50 pg/ml,分析灵敏度为0.25 pg/ml,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数r=0.962 2,两者的测定值无显著性差异。结论制备的抗人T3多克隆抗体特异性强,以FITC系统为平台建立的非均衡竞争FT3检测化学发光法具有精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,达到临床测定的需求,可代替进口化学发光产品用于临床样本的检测。

三碘甲腺原氨酸(T_3)第三次免疫测定用国家标准品的建立

目的:建立三碘甲腺原氨酸(T3)第三次定量免疫测定用国家标准品。方法和结果:精确称取高纯T3原料,用含0.5%BSA的0.02M PBS缓冲液配制成100ng/ml溶液,经无菌过滤处理后,分装、冻干制成候选品。以T3第二次国家标准品(150550-0004)为对照品,经协作标定,候选品中T3免疫活性为50ng/支。结论:候选品各项指标均符合要求,可作为T3第三次免疫测定用国家标准品使用。本标准品的建立,为T3免疫测定用试剂盒的标准化提供定量基础。

抗三碘甲腺原氨酸(T_3)和甲状腺素(T_4),单克隆抗体(McAb)的研制及T_3、T_4放射免疫分析的研究

放射免疫分析(RIA)技术是具有高度灵敏和高度特异性的核医学体外检测技术。抗体的质量是建立RIA技术的关键之一。抗体的亲和力则直接影响方法的灵敏度。而抗血清(PcAb)的制备具有周期长。

固真方对老年大鼠胸腺三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体、Na^+-K^+-ATP酶等作用的研究

本研究观察了补肾益精方药固真方对老年大鼠胸腺重/体重比值,老年大鼠胸腺细胞三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体数、Na^+-K^+-ATP酶活性以及下丘脑、血浆亮氨酸脑啡肽(L-EK)含量的影响。结果表明:老年大鼠胸腺重/体重比值,胸腺细胞T_3受体数、Na^+-K^+-ATP酶活性以及血浆亮氨酸脑啡肽(L-EK)含量均明显低于青年对照鼠,下丘脑L-EK含量则显著高于青年对照鼠,而固真方能明显改善老年大鼠胸腺三碘甲状腺原氨酸(T_3)受体、Na^+-K^+-ATP酶活性的改变,提示固真方可能通过增加老年大鼠降低的胸腺细胞T_3受体数和提高胸腺摄取T_3的功能,从而增强甲状腺激素(T_3)对胸腺的促进作用,提高老年机体胸腺依赖性免疫功能。

游离三碘甲腺原氨酸(FT3)生物素-亲合素酶联免疫分析

采用T3抗体包被酶标板微孔、生物素化T3和辣根过氧化物酶(HRP)标记链亲合素作为信号放大体系,一系列定量游离T3(FT3)为标准品,并以四甲基联苯胺-过氧化氢为显色底物,建立了FT3的生物素-亲合素(BA)酶联免疫分析(FT3-BA-EIA)法。其灵敏度为0.90pmol/L,标准曲线范围0.9～45.0pmol/L,批内变异系数3.1%～8.1%,批间变异系数4.9%～10.6%。测定了101例临床血样,其中正常人46例,实测范围2.5～11.1pmol/L,均值为5.1±2.0pmol/L;27例甲亢病人,实测范围9.7～37.3pmol/L,均值为20.5±7.1pmol/L;20例甲低病人,实测范围0.9～3.8pmol/L,均值为2.0±0.9pmol/L;8例孕妇,实测范围为3.4～8.5pmol/L,均值为6.0±2.5pmol/L。通过对临床血样的检测,本法与化学发光法(CIA)及放免法(RIA)的测定结果有良好的相关性。应用本法可有效地诊断甲状腺疾病,具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞肌浆网钙-ATP酶活性的影响及对心肌功能的调控

目的 研究不同甲状腺功能状态下，缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）过程中心肌细胞肌浆网钙－ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ， ＳＥＲＣＡ）活性的变化及三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）对其变化的影响，同时探讨心肌功能的调控。方法将实验大鼠分为甲状腺 功能正常（Ａ组）和甲状腺功能减退（甲减，Ｂ组）两组，每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、Ｔ３灌注液 组；建立高体心工作模型；测定各组心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性。结果甲减状态下大鼠心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性下降４３．２％ （Ｐ＜０．０１）。缺血３０ｍｉｎ时，Ａ、Ｂ两组的ＳＥＲＣＡ活性均显著降低，并随着复灌进一步下降。但在复灌２０ｍｉｎ时，Ｔ３ 灌注 液组的酶活性较单纯灌组显著提高，Ａ组分别为（１１．２０±１．０７）和（７．３３±０．５６）μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０１） ；Ｂ组分别为 （６．８９±０．５２）和（５．２３±０．７１）μｍｏｌ．ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０５），甚至高于缺血组。结论甲减状态及Ｉ／Ｒ过程中，心肌细胞ＳＥＲＣＡ活 性受到严重损害，可导致胞浆中Ｃａ２＋超负荷。Ｔ３可显著提高ＳＥＲＣＡ活性，降低胞浆中Ｃａ２＋?

应用FITC系统建立非均衡竞争三碘甲腺原氨酸化学发光法

目的制备抗人三碘甲腺原氨酸(T3)多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测总三碘甲腺原氨酸(TT3)的方法。方法以T3-牛血清清蛋白(BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化特异性的抗人T3多克隆抗体并连接辣根过氧化物酶(HRP)。用FITC标记T3类似物,采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与T3校准品或样本中的T3非均衡竞争结合T3-HRP抗体,建立标准曲线,血清中TT3通过标准曲线计算浓度。由此建立TT3化学发光检测方法进行方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(BGG)包被(非FITC系统)的检测系统进行比较。将该方法应用于临床100份血清标本的检测,定量结果与德国Roche2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elecsys2010)结果进行比较。结果抗体对T3具有高度特异性,线性相关系数r>0.99,线性范围为0.1～8ng/mL,分析灵敏度为0.1ng/mL,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测。对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys2010定量试剂盒的结果有很好的相关性,相关系数为0.9619,临床符合率良好。结论该方法精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,适用于临床标本的检测。

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸酶联免疫分析试剂盒的研制

以辣根过氧化物酶标记链亲合素（SA）,T3抗体包被微孔,T3生物素化,四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了3,5,3’-三碘甲腺原氨酸（T3）生物素-亲合素酶联免疫分析（T3-BA-EL1SA）方法。结果显示,本方法分析灵敏度为0.2μg/L,批内、批间变异系数分别为7.1%－8.3%和6.5%－10.5%,回收率为98.1%－107.2%;高浓度T3血清样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.995 7。本试剂盒操作简便、快速,适用于临床检测和科研应用。

3,5,3′-三碘甲腺原氨酸对人胎大脑神经细胞培养物微管蛋白发育的影响

本文报道利用3个月龄人胎大脑神经细胞无血清培养液培养的原代培养物,经同位素法测定观察了细胞内微管蛋白(Tubulin)发育的变化。培养5,10,15,20天的培养物,证明生理剂量的3,5,3′(?)三碘甲腺原氨酸(T_3)对神经细胞微管蛋白的发育有明显的影响,可直接促进人胎大脑神经细胞分化成熟。

三碘甲腺原氨酸(T3)采用放射免疫分析法测定过程中四种数学拟合曲线的比较

三碘甲腺原氨酸(T3)是由人体甲状腺分泌物之一,能够部分反应甲状腺的功能。测定其在血清中含量,对甲状腺功能检查有重要的意义。

鼠脑少突胶质细胞三碘甲腺原氨酸（T＿3）受体的─过性表达

本实验采用三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）核受体单抗和半乳糖脑苷酯（ＧＣ）多抗的双抗体免疾细胞化学法，观察了体外次生培养的大鼠脑少突胶质细胞成熟过程中核Ｔ３受体的表达。结果发现核Ｔ３受体主要存在于未成熟的少突胶质细胞中（阳性率约８０％），而在成熟的少突胶质细胞中仅占４４％。这一现象可能是甲状腺激素在脑成熟过程中具有一段关键作用时期的分子机理之一。

三碘甲腺原氨酸（T_3）对大鼠胰岛体外培养时胰岛素分泌的影响

本文检测了离体大鼠胰岛在１．５４或１５．４ｔμｍｏｌ／ＬＴ＿３浓度下体外培养５天后葡萄糖诱发胰岛素分泌水平。结果表明，当培养液内葡萄糖浓度为１１．１与２２．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，葡萄糖诱发急相或慢相胰岛素释放，Ｔ＿３（ｌ．５４μｍｏｌ／Ｌ）处理组胰岛与对照组比较均显著降低。提示高糖情况下，Ｔ＿３对葡萄糖诱发离体胰岛胰岛素分泌有直接的延迟性抑制作用，而胰岛内胰岛素含量改变可能是导致葡萄糖诱发胰岛素分泌减低的重要因素之一。

充血性心力衰竭的三碘甲状腺原氨酸(T_3)改变与治疗

充血性心力衰竭(CHF)时,心肌收缩力下降,心排血量不能满足机体代谢需要,器官、组织血液灌注不足,而导致一系列神经、内分泌异常.目前研究较多的有心内血浆AM水平、心钠素(ANP)、血管内皮素、血管紧张素Ⅱ等.甲状腺激素异常的临床意义及小剂量甲状腺激素治疗CHF的疗效观察,引起了一些学者的关注.笔者就有关内容综述如下.

化学发光酶免疫法测定游离三碘甲腺原氨酸

以辣根过氧化物酶为三碘甲腺原氨酸类似物的标记物，鲁米诺为化学发光反应底物，建立了一种高灵敏度化学发光免疫检测游离三碘甲腺原氨酸的方法。该法线性范围为0．90～80ng／L，批内变异小于12．1％，批间相对标准偏差均小于15％，其余各项指标均良好。利用本法对血清样品进行了测定，关于甲状腺机能亢进组病人的临床诊断符合率达到83．3％。与其它化学发光免疫分析方法比较所得相关系数为0．9005。在方法条件选择上，以尽可能保持游离激素和蛋白结合激素之间的平衡为原则，提高游离三碘甲腺原氨酸浓度测定的准确性。

氯化镧对牛血清谷胱甘肽过氧化物酶、生长激素、胰岛素、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度的影响

选用36头平均体重420 kg,年龄2.5岁的中国西门答尔阉牛,采用随机区组设计分为4组,以混合精料和风干玉米秸秆为基础日粮,研究日粮中添加不同水平氯化镧对西门答尔阉牛营养物质消化、血清谷胱甘肽过氧化物酶、生长激素、胰岛素、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度的影响。结果表明:实验至第60天时,每天添加0.9 g氯化镧的饲粮有机物质、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的表观消化率较对照组和其它处理组分别提高了8.09%、7.13%、15.20%、9.47%、13.09%和20.48%,血清谷胱甘肽过氧化物酶活性较对照组和其它处理组显著提高了8.22、3.95和5.04个单位,血清生长激素、胰岛素浓度、三碘甲腺原氨酸和四碘甲状腺原氨酸浓度均显著高。

3,5,3′-三碘甲腺原氨酸对体外培养人胎成骨细胞生长、功能的影响

本文利用无血清培养的人胎成骨细胞(OB)体外模型,通过对 OB 内碱性磷酸酶(ALP)活性、胶原合成、DNA、蛋白含量及 cAMP 水平的测定,研究了生理浓度的 T_3(3,5,3′-三碘甲腺原氨酸)对 OB 生长、功能、分化的作用,结果显示:生理浓度的 T_3可显著地增加 OB内 ALP 的活性,并有时间相关关系,T_3作用96小时可显著地增加~3H-脯氨酸掺入到胶原蛋白中;然而,在96小时时期内,却未显著地改变细胞内蛋白及 DNA 的含量。这些结果表明.T_3引起 ALP活性、胶原合成的增加,不是由于促进了 OB 的增生,而是直接促进了体外培养的 OB 的分化而增加其功能。本研究提示,T_3在生理浓度下与体内骨形成有关。

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞能量代谢的影响及其在心肌保护中的作用

目的 研究不同甲状腺功能状态下，三碘甲腺原氨酸（T3）对大鼠缺血再灌注（I/R）心肌细胞能量代谢的影响，探讨T3在心肌保护中的作用。方法 将实验大鼠分为甲状腺功能正常（A组）和甲状腺功能减退（甲减，B组）组，两组又随机分成空白缺血组、单纯灌注液组、T3灌注液组；建立离体心工作模型；利用反相高效液相色谱法测定各组心肌细胞ATP、ADP、AMP含量。结果 甲减状态心肌细胞ATP、ADP、AMP含量均明显降低（P<0.01）；I/R过程中，A、B两组ATP、ADP、AMP含量均大幅度下降，然而，T3灌注液组ATP含量显著高于单纯灌注液组：A组（1.03±0.02）vs（0.62±0.02）(mol/g，B组（0.85±0.02）vs（0.40±0.01）(mol/g，P<0.01。结论 甲减或I/R损伤使心肌细胞的能量合成及利用受到严重损害，T3可明显增加心肌细胞ATP的合成量与储备量，具有良好的心肌保护作用。

三碘甲腺原氨酸对斜带石斑鱼卵黄囊期仔鱼消化道发育和存活的影响

运用放射免疫测定方法检测了斜带石斑鱼早期发育过程中三碘甲腺原氨酸(T3)的变化,并用T3处理卵黄囊期仔鱼,研究其对发育、生长和存活的影响。斜带石斑鱼受精卵中含有相当量的T3,T3随发育而逐渐下降,到仔鱼开口时已经检测不到,提示甲状腺激素可能被胚胎和卵黄囊仔鱼所利用而参与其发育进程。在孵化后24h内,T3促进发育的作用不明显;在孵化24h后,T3对仔鱼消化道的发育有促进作用。在孵化72h后,0.01mg.L-1T3处理组仔鱼直肠管径明显比对照大,而小肠管径和全长与对照相比差异均不明显;0.1mg.L-1和1mg.L-1T3处理组仔鱼小肠和直肠管径显著比对照大,而全长显著比对照短。1mg.L-1T3显著加速了仔鱼卵黄囊的吸收,但对油球的吸收无影响。在孵化后第8天,0.01mg.L-1T3处理组仔鱼存活率明显比对照组高。结果表明,甲状腺激素促进卵黄囊期仔鱼消化道发育的作用与发育时期密切相关,孵化后24h内,消化道对T3不敏感,此后则变得敏感;0.01mg.L-1T3能提高仔鱼存活率。

急性心肌梗死患者的临床特点与低游离三碘甲腺原氨酸的相关性研究

目的探讨急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）患者的临床特点与低游离三碘甲腺原氨酸（freetriiodothyronine,FT3）的关系。方法选择2012年10月～2013年3月中日友好医院收治的AMI并行冠状动脉造影（coronary angiography,CAG）的患者共106例。收集研究对象的临床和CAG资料,对其进行回顾性研究。结果 106例患者中54例（50.9%）FT3减低,52例（49.1%）FT3正常。低FT3组和正常FT3组糖尿病的发生率分别为40.74%、19.23%（P=0.000）;左室射血分数分别为（50.00±11.90）%、（56.67±12.84）%（P=0.045）;血红蛋白分别为（129.27±19.31）、（139.64±17.99）g/L（P=0.041）;与正常FT3组比较,低FT3组心功能差,KillipⅠ级患者比例少,KillipⅣ级患者比例多,梗死相关动脉多为前降支（left anterior descending,LAD）,右冠状动脉病变少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AMI患者发生低FT3比例高,低FT3组糖尿病发生率高、心功能差、血红蛋白低、冠脉LAD病变多。

三碘甲腺原氨酸对离体大鼠缺血后心肌左心功能的恢复作用

目的 :观察三碘甲腺原氨酸 (T3)对缺血后心肌左心功能的恢复作用。 方法 :制作离体大鼠心脏常温缺血模型 ,应用 KH液灌流 30分待心脏活动稳定后 ,分为未缺血组 (n=6 ) ,未缺血 +T3组 (n=6 ) ,缺血再灌注组 (n=7) ,缺血再灌注 + T3组 (n=7)。比较缺血再灌注组与缺血再灌注 + T3组心功能指标。 结果 :对缺血心肌加入 T3灌流 30分后 ,左心室压差与心率乘积 [(L VSP- L VDP)× HR]、收缩期左心室内压上升速度峰值 (+ dp/ dtmax)和舒张期左心室内压下降速度峰值 (- dp/ dtmax)恢复百分率均明显改善。 结论