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副溶血弧菌T3SS1 VscF蛋白多肽抗体的制备与应用
被引量:
2
1
作者
薛婷月
廉乐乐
+1 位作者
李婉君
薛峰
《中国动物检疫》
2021年第9期93-98,共6页
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色。为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异...
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色。为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异性多肽抗体,利用OptimumAntigen^(TM)抗原多肽设计软件,筛选最佳抗原目标肽段,然后将肽段与KLH载体蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,收集兔血清制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western Blot、间接免疫荧光检测方法,鉴定多抗效价和特异性。间接ELISA检测结果显示,该多肽抗体效价达1:512000,显示出该多肽抗体的高敏感度;Western Blot与间接免疫荧光检测结果显示,该多抗能与原核表达的VscF蛋白发生特异性反应。结果表明,筛选的VscF短肽制备的多克隆抗体敏感度高,可作为VscF验证试验中具有特异性结合作用的抗体,能够为后续生物试剂机理研究奠定基础。
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关键词
副溶血弧菌
t3ss1
VscF蛋白
多肽抗体
下载PDF
职称材料
副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统1内杆状蛋白基因vscI的功能分析
被引量:
1
2
作者
廉乐乐
薛娇
+5 位作者
李婉君
任建鸾
诸葛祥凯
汤芳
薛峰
戴建君
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期506-513,共8页
[目的]Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion systems,T3SS)在副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)致病过程中发挥重要作用。本试验旨在探讨T3SS1内杆状蛋白基因vscI的功能。[方法]以副溶血弧菌POR-1菌株为研究对象,构建vscI缺失株ΔvscI与回补...
[目的]Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion systems,T3SS)在副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)致病过程中发挥重要作用。本试验旨在探讨T3SS1内杆状蛋白基因vscI的功能。[方法]以副溶血弧菌POR-1菌株为研究对象,构建vscI缺失株ΔvscI与回补株CΔvscI,检测野生株、缺失株与回补株的细胞毒性、细胞黏附等生物学特性,分析vscI缺失对副溶血弧菌感染细胞能力的影响;通过Western blot与ELISA检测HeLa细胞内效应蛋白的易位量。[结果]与POR-1菌株相比,缺失菌株ΔvscI在生长速度上并无显著差异,但对HeLa细胞的黏附能力下降85%。细胞毒性检测结果显示:与POR-1菌株相比,缺失株ΔvscI感染细胞组释放LDH量显著下降60%。同时与野生株POR-1感染HeLa细胞组相比,ΔvscI感染HeLa细胞组发生凋亡的细胞数量显著下降了85%。腺苷酸环化酶报告系统研究结果显示:与POR-1菌株感染组相比,ΔvscI菌株感染HeLa细胞内的cAMP含量显著下降,CyaA融合蛋白的易位量显著下降,而在回补株CΔvscI中上述生物性状均恢复。[结论]vscI提高了副溶血弧菌对细胞的黏附能力和毒力,促进细胞凋亡,同时对于T3SS1效应子的易位是必需的。
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关键词
副溶血弧菌
t3ss1
内杆状蛋白
vscI
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职称材料
题名
副溶血弧菌T3SS1 VscF蛋白多肽抗体的制备与应用
被引量:
2
1
作者
薛婷月
廉乐乐
李婉君
薛峰
机构
南京农业大学动物健康与食品安全国际合作联合实验室
出处
《中国动物检疫》
2021年第9期93-98,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(31871893)。
文摘
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种世界范围内广泛存在的革兰氏阴性食源性致病菌,其vscF基因编码的T3SS1针状蛋白VscF,在侵袭宿主细胞过程中扮演重要角色。为深入研究VscF蛋白在T3SS1针状结构组装过程中的功能,并制备VscF特异性多肽抗体,利用OptimumAntigen^(TM)抗原多肽设计软件,筛选最佳抗原目标肽段,然后将肽段与KLH载体蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,收集兔血清制备多克隆抗体,并利用间接ELISA、Western Blot、间接免疫荧光检测方法,鉴定多抗效价和特异性。间接ELISA检测结果显示,该多肽抗体效价达1:512000,显示出该多肽抗体的高敏感度;Western Blot与间接免疫荧光检测结果显示,该多抗能与原核表达的VscF蛋白发生特异性反应。结果表明,筛选的VscF短肽制备的多克隆抗体敏感度高,可作为VscF验证试验中具有特异性结合作用的抗体,能够为后续生物试剂机理研究奠定基础。
关键词
副溶血弧菌
t3ss1
VscF蛋白
多肽抗体
Keywords
Vibrio parahaemolyticus
t3ss1
VscF protein
peptide antibody
分类号
S851.1 [农业科学—预防兽医学]
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职称材料
题名
副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统1内杆状蛋白基因vscI的功能分析
被引量:
1
2
作者
廉乐乐
薛娇
李婉君
任建鸾
诸葛祥凯
汤芳
薛峰
戴建君
机构
南京农业大学教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/动物医学院
中国药科大学
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期506-513,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31871893)。
文摘
[目的]Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion systems,T3SS)在副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)致病过程中发挥重要作用。本试验旨在探讨T3SS1内杆状蛋白基因vscI的功能。[方法]以副溶血弧菌POR-1菌株为研究对象,构建vscI缺失株ΔvscI与回补株CΔvscI,检测野生株、缺失株与回补株的细胞毒性、细胞黏附等生物学特性,分析vscI缺失对副溶血弧菌感染细胞能力的影响;通过Western blot与ELISA检测HeLa细胞内效应蛋白的易位量。[结果]与POR-1菌株相比,缺失菌株ΔvscI在生长速度上并无显著差异,但对HeLa细胞的黏附能力下降85%。细胞毒性检测结果显示:与POR-1菌株相比,缺失株ΔvscI感染细胞组释放LDH量显著下降60%。同时与野生株POR-1感染HeLa细胞组相比,ΔvscI感染HeLa细胞组发生凋亡的细胞数量显著下降了85%。腺苷酸环化酶报告系统研究结果显示:与POR-1菌株感染组相比,ΔvscI菌株感染HeLa细胞内的cAMP含量显著下降,CyaA融合蛋白的易位量显著下降,而在回补株CΔvscI中上述生物性状均恢复。[结论]vscI提高了副溶血弧菌对细胞的黏附能力和毒力,促进细胞凋亡,同时对于T3SS1效应子的易位是必需的。
关键词
副溶血弧菌
t3ss1
内杆状蛋白
vscI
Keywords
Vibrio parahemolyticus
t3ss1
inner rod protein
vscI
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
副溶血弧菌T3SS1 VscF蛋白多肽抗体的制备与应用
薛婷月
廉乐乐
李婉君
薛峰
《中国动物检疫》
2021
2
下载PDF
职称材料
2
副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统1内杆状蛋白基因vscI的功能分析
廉乐乐
薛娇
李婉君
任建鸾
诸葛祥凯
汤芳
薛峰
戴建君
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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职称材料
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