利用T_4RNA连接酶在单链DNA/RNA的5'末端进行荧光、同位素以及生物素标记

利用Ｔ４ＲＮＡ连接酶在单链ＤＮＡ／ＲＮＡ的５′末端进行荧光、同位素以及生物素标记对于核酸研究来说ＤＮＡ／ＲＮＡ的末端标记是一项很重要的技术。酶法标记比有机化学法标记更简单方便。这是由于酶学反应具有温和、特异、可控制性和高效性的特点。酶法的３′端标记技...

单引物法扩增马尾松毛虫CPV基因组第8片段及其序列分析

本文利用T4 RNA连接酶将5’-磷酸、3’-氨基修饰的引物1连接到马尾松毛虫质型多角体病毒第8片段dsRNA的3’-OH端。经逆转录、退火、补齐形成全长双链cDNA。使用单一的互补引物2进行PCR扩增。扩增产物克隆在pMDl8-T载体上。对重组子进行限制性内切酶分析及序列测定,结果表明,克隆片段全长330bp,S’端具有CPV-1型末端保守序列AGTAAA’端具有保守序列GTTAGCC。起始密码子从ATG位于38-40残基,终止密码子TAA位于1208～1210残基。推测S8片段编码390个氨基酸多肽。分子量为44kDa。与舞毒蛾质型多角体病(LdCPV)第8片段相比较,核苷酸和氨基酸同源性分别为97％和98％。与家蚕质型多角体病毒(BmCPV)第8片段相比较,核苷酸和氨基酸的同源性分别为83％和85％。与人的呼肠孤病毒第8片段比较没有明显的同源性。