生物基耐高温PA5T/56的高效制备及表征

目前,耐高温尼龙(PA)的生产主要采用“预聚合+固相后聚合”法,然而固相后聚合过程中存在的制备周期长、副反应多等技术难题长期得不到有效解决。笔者以生物基戊二胺(PDA)、对苯二甲酸(TPA)和己二酸(AA)为原料,通过在固相后聚合过程前期加入适量水,高效制备了生物基耐高温PA5T/56。研究了TPA与AA的物质的量比对产物熔点的影响,结果表明当其物质的量比为6∶4时,产物(P64)的熔点为309℃,可以作为耐高温工程塑料使用。考察了固相后聚合阶段用水量、反应温度、保温时间和预聚物粒径对固相后聚合产物相对黏度的影响,确定了优化工艺条件:用水量与设备的体积比为1∶300、反应温度为260℃、保温时间为6h、预聚物粒径<0.1mm。通过傅里叶变换红外光谱仪和核磁共振氢谱确认了产物的分子结构。热性能测试结果表明,P64的熔点为309℃,起始热分解温度为375℃,即样品具有很宽的温度加工区间和良好的熔融加工温度窗口。力学性能测试结果表明,P64拉伸强度为85.7 MPa、断裂伸长率15.4%、缺口冲击强度为5.56kJ/m^(2),这与商品化PA6T共聚物的性能相近,表明该样品可以部分代替PA6T共聚物使用,拓宽了应用领域。

自身免疫性肝炎患者调节性T细胞及相关细胞因子与肝功能损伤的相关性研究

目的观察自身免疫性肝炎(AIH)患者不同时期外周血CD4+、CD2+5调节性T细胞亚群表达及细胞因子白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,探讨其与肝功能损伤的关系。方法选择AIH患者39例作为未治疗组,治疗后临床症状缓解23例,作为缓解组,20例健康体检者作为对照组。观察T细胞及相关细胞因子与肝功能损伤的关系。结果未治疗组外周血CD4+CD2+5T细胞比例显著低于对照组(P<0.05),NK细胞比例显著高于对照组(P<0.05)。细胞因子IL-2、TNF-α与对照组比较明显升高,未治疗组外周血CD4+CD2+5T的数量与肝功能损伤指标ALP、GGT呈负相关(r=-0.327,-0.318,P<0.05)。血清IL-2和TNF-α水平与肝功能损伤指标ALP和GGT呈正相关(r分别为0.524,0.521,0.412,0.413)。结论 T淋巴细胞免疫功能及细胞因子的紊乱在AIH发病机制中起一定作用。

纤连蛋白对人舌癌T_（56）细胞分化的影响

用离体细胞培养方法及细胞生物学技术，研究纤连蛋白（ＦＮ）对人舌癌细胞株Ｔ＿（５６）的某些生物学效应。结果表明：ＦＮ可抑制细胞增殖和有丝分裂；细胞形态表现出向正常细胞表型特征的逆转；琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）的显著变化（Ｐ＜０．０１）表明细胞有氧代谢的增强，反映出细胞逆转分化的特征；细胞电泳率值的变化显著（Ｐ＜０．０１），反映细胞膜成分在一定程度上的改变。

支气管哮喘小鼠外周血CD_8^+CD_(28)^-T细胞群和CD_8^+CD_(56)^+T细胞群作用机制研究

目的研究哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞间的关系及两种细胞群在哮喘中的作用。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组各15只。测定小鼠的气道反应性,对支气管肺泡灌洗液行细胞学分类,观察肺组织的病理变化,流式检测小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞的比例,分析哮喘中两种细胞之间的相关性。结果成功建立小鼠哮喘模型。①哮喘组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞(%)较对照组明显增高;②哮喘组小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞比例均较对照组升高;③CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞数量上呈正相关(r=0.737,P=0.002)。结论哮喘时外周血CD8+CD56+细胞和CD8+CD28-细胞数目异常,两种细胞正相关,可能在哮喘发病中起重要作用。

非小细胞肺癌患者CD8^+CD56^+NKT细胞亚群的特性研究

目的:评估并探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中CD8^+CD56^+自然杀伤性T细胞(NKT细胞)的频数、功能特性和影响因素。方法:用流式细胞术分别检测47例NSCLC患者(肺癌组)及47例健康者(对照组)外周血CD8^+CD56^+NKT细胞频数及细胞表面CD57、Ki67、NKG2D、CD69分子的表达情况,并分析CD8^+CD56^+NKT细胞频数与患者临床病理特征的相关性。结果:肺癌组CD8^+CD56^+NKT细胞频数显著低于对照组(Z NKT=2.083,P=0.037),细胞表面的CD57、NKG2D的表达率均低于对照组(Z CD57=2.522,P=0.012;Z NKG2D=2.121,P=0.034),CD69的表达率高于对照组(Z CD69=2.159,P=0.031),差异均有统计学意义,两组Ki67分子的表达率无显著性差异(Z Ki67=0.174,P=0.862)。不同性别、年龄(以60岁为界)、病理类型(鳞癌和腺癌)、TNM分期(Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)、治疗方案(初诊、化疗、靶向治疗、化疗联合靶向治疗)的NSCLC患者CD8^+CD56^+NKT细胞频数差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:NSCLC患者外周血CD8^+CD56^+NKT细胞频数降低,尽管处于活化状态的细胞增多,但其细胞毒性减弱,功能耗竭,此外,CD8^+CD56^+NKT细胞频数不受性别、年龄、病理类型及TNM分期、治疗方案等因素的影响。

共聚序列结构对生物基共聚尼龙5T/56非等温结晶动力学影响

以生物基单体戊二胺为原料,分别制备无规共聚和嵌段共聚尼龙(PA5T/56)。通过核磁共振波谱仪对其进行了结构表征,采用差示扫描量热仪研究其共聚体系的非等温结晶行为。分别用Ozawa方程、Jeziorny方程、莫志深法进行非等温结晶动力学分析。Ozawa方程分析结果表明,结晶过程中晶核生长方式具有温度依赖性,晶核生长方式随温度升高而复杂化。无规共聚PA 5T/56的结晶过程更为复杂,晶体生长方式更多维。Jeziorny方程分析结果表明,无规共聚PA5T/56的结晶速率更高,结晶更完善。且共聚体系仅在主结晶期对该拟合方程具有良好的线性关系,结晶后期偏离拟合直线方向。莫志深法分析结果表明,同一相对结晶度下,无规共聚PA5T/56体系的结晶速率较嵌段共聚体系更高。通过Kissinger方程计算得到无规共聚PA5T/56和嵌段共聚PA5T/56的活化能分别为-311.23kJ/mol,-168.88k J/mol,表明无规共聚PA5T/56较嵌段共聚PA5T/56具有更高的平均结晶速率,更强的结晶能力。

肿瘤细胞角蛋白纤维的ABC免疫组化观察

用国产抗人角蛋白单克隆抗体,通过ABC免疫组化染色,观察T56细胞和HeLa细胞间期及有丝分裂期Keratin的组织结构和动态变化;并进一步观察了秋水仙素和细胞松弛素B对该两种细胞Keratin组织结构的影响。结果表明:有丝分裂时Keratin的组织结构及空间分布均发生显著变化;秋水仙素和细胞松弛素B共同作用时可引起Keratin纤维急剧重排形成一“星点状”纤维网络。

丙型肝炎肝硬化CD56^+T细胞和NK细胞数量及抗肿瘤活性

目的:研究CD56+T细胞和NK细胞在丙型肝炎肝硬化时的数量及抗肿瘤细胞活性变化．方法:丙型肝炎肝硬化患者18例,快速肝穿获得肝组织,分离肝脏单个核细胞(MNC),流式细胞仪分析CD56+T细胞及NK细胞数量,肝脏 MNC和外周血单个核细胞(PBMC)分别与IL-2 混合培养,检测IFN-γ含量及抗肿瘤细胞活性．结果:健康志愿者、慢性丙型肝炎患者、丙型肝炎肝硬化患者肝脏MNC中CD56+T细胞数量百分比分别是20．4％±6．2％,11．2％±3．1％和5．0％±1．6％;NK细胞比例分别是 31．1％±9．7％,31．6％±8．3％和18．3％±5．4％: 肝脏MNC的IFN-γ产量分别是7．4±2．4,3．2± 1．8和1．9±0．5 μg／L;抗肿瘤细胞的细胞毒性分别是61．1％±17．1％,59．2％±14．6％,26．7％± 8．5％．以上四组数据均以肝炎肝硬化患者变化最为显著(P<0．05)．结论:丙型肝炎肝硬化时肝脏CD56+T细胞和 NK细胞数量及抗肿瘤细胞活性分别下降．

探讨CRTh2、CysLT1R及H1R在支气管哮喘患者外周血CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞中的表达

目的:探讨Th2细胞趋化因子同源分子(chemoattractant receptor homologous molecule expressed on Th2 cells,CRTh2)、半胱氨酸白三烯受体1(cysteinyl leukotriene 1 receptor,CysLT1R)及组胺1型受体(histamine 1 receptor,H1R)在支气管哮喘(bronchial asthma,BA)患者外周血CD3^(+)CD56^(+)自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT)中的表达情况及临床意义。方法:收集2020年9月至2021年9月锦州医科大学附属医院BA患者(BA组,n=40)和健康对照组(healthy control,HC组,n=38)的外周血,流式细胞仪检测BA组和HC组外周血中CRTh2、CysLT1R及H1R在CD3^(+)CD56^(+)标记的NKT细胞上的表达,同时对其与血清总IgE(total immunoglobulin E,TIgE)、呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)及肺功能第一秒用力呼气量/用力肺活量%(forced expiratory volume in the first second/forced vital capacity%,FEV1/FVC%)的相关性分析。结果:BA组[22.50(15.78,29.20)]外周血CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞百分比较HC组[27.90(21.50,32.45)]降低(P=0.024);进一步比较BA组[70.05(63.20,78.45)]CD3^(+)淋巴细胞百分比低于HC组[73.70(69.88,79.38)](P=0.035)。BA组[0.08(0.05,0.17)]CysLT1R百分比较HC组[0.16(0.10,0.34)]降低(P=0.004);BA组CRTH2、H1R百分比[1.12(0.53,1.88);5.21(1.41,10.10)]与HC组[1.17(0.60,4.25);4.61(1.42,8.53)]比较,无统计学差异(P=0.234;P=0.697)。进一步对比CRTh2、H1R的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),BA组[925.52(623.50,1279.25)]CRTh2 MFI较HC组[1345.50(891.00,1977.75)]降低(P=0.002);BA组[769(657.50,975.00)]H1R MFI与HC组[835.00(560.00,959.25)]无统计学差异(P=0.834)。CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞与血清TIgE、FeNO无明显相关性(r=-0.052、r=0.014),与FEV1/FVC%水平呈正相关(r=0.402,P=0.01)。CRTH2(r=0.166、r=-0.040)、CysLT1R(r=0.114、r=-0.150)及H1R(r=0.103、r=-0.096)与血清TIgE、FeNO无明显相关性。结论:CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞可能在支气管哮喘发病过程中起重要作用,H1R在CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞上可能不表达,CRTh2与CysLT1R在BA患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞上表达减少可能会为临床精准诊疗提供依据。

TIGIT在类风湿性关节炎患者外周血CD56^(+)T细胞的表达及作用

目的检测类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD56^(+)T细胞的比例变化以及含免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)在CD56^(+)T细胞表面的表达,探讨TIGIT在RA中对CD56^(+)T细胞功能的影响。方法选取50例RA患者及20例健康人,采用流式细胞术检测外周血CD56^(+)T细胞的比例,并且分析CD56^(+)T细胞比例与疾病临床指标的相关性;流式细胞术检测RA患者外周血CD56^(+)T细胞表达TIGIT的水平;密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并进行培养;流式细胞术检测RA患者外周血表达γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17A(IL-17A)的CD56^(+)T细胞的比例;探究IFN-γ和IL-17A在TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞之间的表达差异;ELISA检测RA患者血清IL-17A的水平。结果与健康对照组相比,RA患者外周血CD56^(+)T细胞的比例降低,表达IL-17A的CD56^(+)T细胞的比例显著降低;RA患者血清中IL-17A的水平升高。RA患者的CD56^(+)T细胞高表达TIGIT分子,IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞;表达IL-17A的TIGIT-CD56^(+)T细胞与TIGIT+CD56^(+)T细胞的比例无明显差异。结论TIGIT的异常表达影响CD56^(+)T细胞分泌因子的功能,进而参与RA疾病进程。并且IFN-γ主要来源于TIGIT-CD56^(+)T细胞,TIGIT可能不影响CD56^(+)T细胞的IL-17A分泌水平。

HIV-1早期感染者外周血中CD56＋T细胞表型和功能特征分析

目的探讨HIV-1早期感染者外周血中CD56＋T细胞表型和功能变化特点，了解该变化与疾病进展状态的相关性。方法采集HIV-1早期感染者样品53例，HIV-1阴性健康对照31例，分离外周血单个核细胞（PBMC）后，流式细胞术检测CD56＋T细胞数量及细胞表面分子CD16、CD161、NKB1、NKG2A、NKp46、NKG2D、NKG2C、CD158a表达水平。将PBMC与K562细胞共孵育，检测CD56＋T细胞分泌细胞因子IFN．吖和TNF—d的水平，以及细胞毒效应分子CD107a的水平。结果HIV-1早期感染者外周血中CD56＋T细胞数量较健康对照明显减少（P=0．025），且与血浆病毒载量呈负相关（P=0．021，r=-0．316）。CD56＋T细胞表面分子CD16（P=0．003）、CD161（P=0．023）、NKBl（P=0．023）、NKp46（P=0．021）表达较健康对照显著降低，其中NKB1的表达水平与CD4＋T细胞数量呈正相关（P=0．007，F=0．364），而与病毒载量呈负相关（P=0．030，r=-0．299）。HIV-1早期感染者CD56＋T细胞自发分泌IFN-1和TNF-d以及细胞毒效应分子CD107a水平明显低于健康对照（P均〈0．001），在靶细胞K562存在情况下，其杀伤能力也显著低于健康对照（IFN-γ和TNF-α：P均〈0．001，CD107a：JP=0．016）。结论HIV-1早期感染者CD56＋T细胞数量下降，表型发生改变，分泌细胞因子和细胞毒效应分子能力下降，提示在HIV-1感染早期CD56’T细胞即受到损伤，且与疾病进展相关。

不同细胞制备方法对CIK细胞亚群比例的影响

目的研究不同细胞制备方法对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞亚群比例的影响。方法将42份CIK细胞随机均分为实验组和对照组。对照组按常规CIK细胞制备方法制备;实验组在对照组基础上于第2天加入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)10ng/ml。待细胞成熟后采用流式细胞术检测两组CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD56+T淋巴细胞比例的变化。结果与对照组相比,实验组CD3+CD4+T细胞比例下降(P<0.01),CD3+CD56+T细胞比例升高(P<0.05);CD3+CD8+T细胞比例稍高,但无统计学差异(P>0.05)。结论在CIK细胞制备过程中加入rhG-CSF可抑制CD3+CD4+T细胞,增加CD3+CD56+T细胞生成。

肾母细胞瘤患儿外周血调节性T细胞和自然杀伤T细胞的表达研究

目的研究肾母细胞瘤患儿外周血CD4^+CD25^+CD127^(low)调节性T细胞(Treg)和CD3^+CD16^+CD56^+自然杀伤T细胞(NKT)的表达变化,初步探讨发生改变的原因及其临床意义。方法选取2015年11月至2016年7月就诊的21例肾母细胞瘤患儿作为病例组,21例于本院体检的同年龄段健康儿童为健康对照组,采用流式细胞术检测两组儿童外周血中CD4^+CD25^+CD127^(low) T细胞占CD4^+T细胞百分比和CD3^+CD16^+CD56^+T细胞占CD3^+T细胞百分比,分别代表Treg水平和NKT水平。结果病例组肾母细胞瘤患儿外周血Treg水平低于健康对照组(P<0.05);病例组肾母细胞瘤患儿外周血NKT水平高于健康对照组(P<0.05)。结论 Treg和NKT水平变化与肾母细胞瘤的发生与发展有关,Treg和NKT水平可能是反映肾母细胞瘤患儿免疫功能状态的较好指标。