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盐诱导法高效表达重组人内抑素
被引量:
1
1
作者
朱年春
智强
+2 位作者
张礼秀
陈晓明
刘建辉
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期359-360,共2页
关键词
BL-21(DE3)宿主菌
t7rna启动子
重组人内抑素
下载PDF
职称材料
构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因
2
作者
葛菁萍
唐晓艳
+4 位作者
高冬妮
宋姗姗
鲁珊
楼庄伟
平文祥
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期318-325,共8页
【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系...
【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系统,通过对eGFP表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒,pFastBac-CMV-T7 RNAP重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV调控的噬菌体T7 RNA聚合酶的cDNA;pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter重组杆状病毒为T7启动子控制的eGFP报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物OL(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7启动子和T7 RNAP,在OL细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP报告基因,而且未引起细胞病变,但在鸡胚原代细胞中eGFP的表达相对弱于在OL细胞中的表达。在OL细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%,在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP,并利用T7RNAP继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA病毒提供了有效的研究方法,并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。
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关键词
重组杆状病毒
t
7
rna
聚合酶/
启动子
EGFP
OL细胞
鸡胚原代细胞
原文传递
题名
盐诱导法高效表达重组人内抑素
被引量:
1
1
作者
朱年春
智强
张礼秀
陈晓明
刘建辉
机构
安徽桑尼生物技术研究所
安徽医科大学生物技术研究所
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期359-360,共2页
关键词
BL-21(DE3)宿主菌
t7rna启动子
重组人内抑素
Keywords
BL-21 (DE 3)
t
7
rna
promo
t
er
recombinan
t
human endos
t
a
t
in
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因
2
作者
葛菁萍
唐晓艳
高冬妮
宋姗姗
鲁珊
楼庄伟
平文祥
机构
微生物黑龙江省高校重点实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期318-325,共8页
基金
国家自然科学基金(31070446)
黑龙江省教育厅重点项目(11551z011)
+2 种基金
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12511423)
科技创新人才研究专项资金项目优秀学科带头人(RC2010XK002028)
黑龙江大学高层次人才(创新团队)支持计划(Hdtd2010-17)~~
文摘
【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP),从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,结合T7表达系统,通过对eGFP表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒,pFastBac-CMV-T7 RNAP重组杆状病毒为哺乳动物细胞启动子CMV调控的噬菌体T7 RNA聚合酶的cDNA;pFB-T7pro-IRES-GFP-T7ter重组杆状病毒为T7启动子控制的eGFP报告基因。将两支重组杆状病毒共同侵染哺乳动物OL(oligodendrocyte)细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞。【结果】两支重组杆状病毒利用T7启动子和T7 RNAP,在OL细胞、鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中成功表达eGFP报告基因,而且未引起细胞病变,但在鸡胚原代细胞中eGFP的表达相对弱于在OL细胞中的表达。在OL细胞中重组杆状病毒对细胞的转导效率为59.5%,在鸡胚成纤维细胞和鸡胚骨骼肌细胞中转导效率分别为23.2%和33.1%。【结论】本研究构建的基于杆状病毒、T7RNA聚合酶、T7启动子(BV-T7)杂合表达体系能够在哺乳类细胞及禽类细胞中表达T7 RNAP,并利用T7RNAP继续高效而稳定地表达外源基因。这为难于体外操作的RNA病毒提供了有效的研究方法,并对新型基因工程疫苗的研制提供了一个高效而稳定的表达载体系统。
关键词
重组杆状病毒
t
7
rna
聚合酶/
启动子
EGFP
OL细胞
鸡胚原代细胞
Keywords
recombinan
t
baculovirus
t
7
rna
polymerase/
t
7
promo
t
er
eGFP
OL cells
chike-embryo primary cells
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
盐诱导法高效表达重组人内抑素
朱年春
智强
张礼秀
陈晓明
刘建辉
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
下载PDF
职称材料
2
构建基于杆状病毒的BV-T7杂合表达体系及利用其在哺乳动物和禽类细胞中表达eGFP基因
葛菁萍
唐晓艳
高冬妮
宋姗姗
鲁珊
楼庄伟
平文祥
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
原文传递
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