比较两种推荐的TA102菌株间接诱变剂的致突变性

[目的 ]选定TA10 2菌株间接诱变性的参照阳性剂和有效剂量。 [方法 ]按Ames试验平板掺入法 ,比较两种化合物的诱变性和剂量 反应关系。 [结果 ]①在加S9的条件下 ,每皿 1,8 二羟基蒽醌 5 0～ 10 0 μg对测试菌株TA10 2具有明显的诱变性 ,5 0 μg/皿回复突变菌落数为 72 4个 /皿 ,是自发回变数的 2～ 3倍 ,且有明显的剂量 反应关系 ;不加S9,回复突变菌落数未发生显著性差异。② 2 氨基芴 (2 AF)每皿 0 5～ 2 0 0 μg ,在加和不加S9实验条件下 ,回复突变菌落数均未超过溶剂对照的 2倍以上 ,且无剂量 反应关系。 [结论 ]根据我室重复试验TA10 2 +S9所用的阳性剂可选择 1,8 二羟基蒽醌 ,2 AF不能作为TA10 2

特殊设计的单链寡核苷酸链纠正TA102中组氨酸操纵子基因的点突变

目的研究应用特殊设计的单链寡核苷酸链(ODN)纠正点突变的方法。方法以Ames试验体系为基础,应用ODN纠正TA102中组氨酸操纵子基因的点突变。结果将ODN直接加入到正常状态下的细菌中检测不出有纠正率,而用CaCl2法将TA102制备成感受态细菌后可以得到一定的纠正率(10-5)。结论ODN能够纠正TA102中组氨酸操纵子基因的点突变,可以建立起以Ames试验体系为基础的研究寡核苷酸链纠正点突变的实验方法。

应用特殊设计的单链寡核苷酸链纠正TA102中组氨酸操纵子基因的点突变

应用特殊设计的寡核苷酸链纠正点突变这一技术是通过引入的特殊设计的寡核苷酸链激发,利用机体本身原有的修复机制进行的基因修复,修复后的基因仍受原来的相关调控表达元件控制,是治疗由点突变引起的遗传病的理想方法。学者们应用DNA/RNA嵌合性的寡核苷酸链（RDO）已经成功地纠正了酵母菌,植物细胞和哺乳动物细胞的基因点突变,包括体内和体外的实验[1-5]。然而其纠正率的报道相差甚远,

Regorafenib联合TAS102新策略治疗肝细胞癌的研究

背景与目的:瑞格菲尼(regorafenib,REG)和TAS102是治疗消化道肿瘤的新型药物。嘧啶类药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联合REG可抑制多药耐药转移性结肠癌的进展。肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)决定肿瘤的自我更新,异质性及治疗耐受等,靶向CSC为治愈肿瘤提供了可能途径。探讨REG联合TAS102治疗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的联合效应及潜在机制。方法:以人HepG2、Huh7和SK-Hep1肝癌细胞系为实验对象。REG和TAS102单药或联合处理肝癌细胞及荷瘤动物。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测肝癌细胞活力;流式细胞术分析肝癌细胞中CD133阳性细胞亚群比例;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析不同药物处理后肝癌细胞中蛋白表达差异;含不同药物的干细胞培养基培养肝癌干细胞球(HCC sphere);荷瘤动物实验评估药物联合治疗效果。结果:REG及TAS102单药显著抑制肝癌细胞活力。TAS102联合使用减低REG单药时诱导增加的CD133阳性细胞亚群比例及干细胞标志分子SRY相关的高迁移率族盒蛋白-2(SRY-related high mobility group box protein-2,SOX2)和乙醛脱氢酶1A(aldehyde dehydrogenase 1A,ALDH1A)的蛋白水平。同时REG的联合使用下调TAS102单药处理时诱导活化的抗凋亡蛋白髓细胞白血病-1蛋白(myeloid cell leukemia-1,MCL1)信号。REG联合TAS102显著抑制了HCC sphere的形成。动物实验证实REG联合TAS102显著抑制肝癌瘤体的生长。结论:REG联合TAS102通过调控肝癌细胞的干细胞性及抗凋亡信号,发挥联合用药增强抗HCC的活性,为临床治疗难治性HCC提供了一种新的治疗策略。

TAS102选择性抑制ATRX缺失胶质瘤细胞的实验研究

目的探讨TAS102对α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁基因(α-thalassemia mental retardation X-linked,ATRX)缺失U87胶质瘤细胞体外增殖的影响及机制。方法选择ATRX野生型U87细胞和ATRX敲除的U87^ATRX-/-胶质瘤细胞为研究对象,设立U87对照组、U87药物组、U87^ATRX-/-对照组、U87^ATRX-/-药物组,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期的变化,β-半乳糖苷酶染色检测细胞老化情况,采用免疫荧光和Western blot检测DNA损伤识别反应通路活化及相关蛋白的表达情况。结果CCK-8检测结果显示,经不同浓度的TAS102培养72 h,U87^ATRX-/-药物组细胞存活率低于U87药物组,U87组细胞IC50值为(10.50±1.52)mg/L,U87^ATRX-/-细胞IC50为(4.72±0.48)mg/L,与U87组细胞相比,U87^ATRX-/-组IC50更低(P<0.01)。细胞周期检测示:U87对照组G2期细胞百分比为(17.86±2.12)%,药物组G2期细胞百分比为(23.04±3.57)%;U87^ATRX-/-对照组G2期细胞百分比为(18.94±3.05)%,药物组为(61.67±1.13)%,与U87药物组相比,U87^ATRX-/-药物组G2期细胞明显增多(P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色结果示:U87对照组染色阳性细胞百分比为(7.73±0.71)%,药物组为(29.55±4.12)%,U87^ATRX-/-对照组为(8.70±2.55)%,药物组为(53.64±7.03)%,与U87药物组相比,U87^ATRX-/-药物组染色阳性细胞增多(P<0.01)。免疫荧光检测53BP1的表达显示,U87对照组染色阳性细胞百分比为(14.5±7.39)%,药物组为(21.19±3.68)%,U87^ATRX-/-对照组为(16.75±2.97)%,药物组为(54.27±8.38)%,U87^ATRX-/-药物组53BP1表达较U87药物组明显增多(P<0.05)。Western blot检测不同时间点ATR、CHK1、ATM、CHK2的磷酸化水平,U87^ATRX-/-药物组ATM/CHK2的磷酸化水平增高。结论TAS102能够选择性抑制U87^ATRX-/-胶质瘤细胞增殖,通过诱导细胞衰老和活化ATM-CHK2损伤反应通路,引起细胞周期阻滞于G2期,抑制细胞增殖。

基于Ames试验的寡核苷酸链纠正点突变新试验体系的建立

Igoucheva等[1]前期主要使用DNA/RNA嵌合型的寡核苷酸链（RDO）,但后来发现单链DNA寡核苷酸链（ODN）也有同样的功能,而且ODN更容易合成和纯化，因而逐渐转向ODN对基因点突变的研究。然而该技术的机制尚不清楚，报道的突变纠正率也不一致。学者们使用了不同生物材料，