TACI-Ig对MRL/lpr小鼠的治疗作用及其对小鼠肾组织JAK1-STAT1信号通路的影响

目的研究TACI-Ig对MRL/lpr小鼠的治疗作用以及TACI-Ig对狼疮性肾炎肾组织JAK1-STAT1信号通路活化的影响。方法将MRL/lpr红斑狼疮转基因小鼠随机分成6组,即模型组、TACI-Ig 3个剂量治疗组(3.75、7.5、15 mg.kg-1)组、强的松阳性对照组和IgG-Fc阴性对照组,另选用BALB/c小鼠作为正常对照组。除强的松组每日灌胃给药外,其余各组隔日皮下注射给药,共计8周,模型组和正常组给予生理盐水。观察TACI-Ig对MRL/lpr小鼠一般体征、损伤指数的影响,目测半定量尿蛋白试纸法检测动物的尿蛋白变化,HE染色法观察肾组织病理学改变情况,全自动生化分析仪检测血清中肌酐和尿素氮的水平,ELISA法检测血清中BLyS、IL-10和IFN-γ的水平,免疫组化法检测肾脏磷酸化的JAK1和STAT1的表达分布情况。结果 TACI-Ig(7.5、15mg.kg-1)皮下注射给药8周可明显降低模型小鼠的尿蛋白水平和损伤指数;有效改善肾小球系膜细胞增生和肾小球纤维化,明显减轻炎性细胞浸润;TACI-Ig给药可明显降低小鼠血清中的肌酐和尿素氮水平以及血清中BLyS、IL-10、IFN-γ等细胞因子水平。免疫组化结果显示模型组小鼠的肾脏磷酸化的JAK1和STAT1蛋白的表达明显升高,在肾小球、肾间质中呈强阳性表达,TACI-Ig给药后可使其表达明显降低。结论 TACI-Ig可明显改善MRL/lpr小鼠红斑狼疮样的临床表现和肾脏病理特征,降低血清中细胞因子和肾组织中磷酸化JAK1、STAT1蛋白的表达水平,这可能是TACI-Ig治疗狼疮性肾炎的机制之一。

重组TACI-Ig融合蛋白抑制抗CD3抗体诱导T淋巴细胞增殖与活化

目的探讨抗CD3抗体诱导小鼠T淋巴细胞增殖与活化的机制并观察重组人TACI-Ig融合蛋白(rh TACI-Ig)对其的影响。方法免疫磁珠纯化得到小鼠T淋巴细胞,用抗CD3抗体刺激,同时给予rh TACI-Ig、rh TNFR∶Fc或Ig G-Fc。[3H]-TdR参入法检测T细胞增殖能力,流式细胞术检测T细胞亚群比率,Western blot法检测B淋巴细胞刺激因子、BAFF受体(BAFFR)和跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)两个受体及IL-2受体(IL-2R)表达水平和NF-κB活性,采用小干扰RNA(siRNA)抑制T细胞BAFFR或TACI的表达。结果抗CD3抗体体外可促进T细胞增殖与活化,BAFF、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)和转化生长因子-β(TGF-β)分泌,BAFFR、TACI、IL-2R表达升高和NF-κB活性增强(P<0.05)。Rh TACI-Ig(0.1、1、10、100μg/ml)体外给药可抑制抗CD3抗体诱导的T淋巴细胞增殖(P<0.05);rh TACI-Ig(1、10、100μg/ml)可明显降低抗CD3抗体诱导产生的细胞因子水平(P<0.05,P<0.01),显著抑制CD4+CD69+T细胞、CD4+CD154+T细胞比率,提高CD4+CD62L+T细胞比率(P<0.05,P<0.01),且rh TACI-Ig(10、100μg/ml)能降低T细胞上BAFFR、TACI、IL-2受体的表达,抑制NF-κB活性(P<0.05)。沉默BAFFR或TACI对抗CD3抗体诱导的T细胞增殖有抑制作用(P<0.01)。结论抗CD3抗体部分通过产生BAFF,激活BAFFR信号而促进T细胞增殖与活化,rh TACI-Ig中和BAFF,抑制BAFF相关受体的表达和NF-κB活性,减少T细胞表达IL-2受体,阻止T细胞过度增殖与活化。

RhBLyS对AA大鼠MLNLs功能的影响及TACI-Ig的作用

目的:研究跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子的免疫球蛋白(transmembrane activator or calcium-modulating cyclophylin ligand-interactor-immunoglobulin,TACI-Ig)对rh BLy S刺激佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠肠系膜淋巴结细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNLs)功能的影响。方法:rh BLy S刺激AA大鼠MLNLs,设TACI-Ig五个浓度给药组(0.01,0.1,1.0,10,100μg/m L)和一个阴性对照组Ig G-Fc(10μg/m L)。MTT法测MLNLs增殖;流式细胞仪测T细胞主要亚群变化;ELISA法检测IL-17水平;Western blot法测TACI蛋白表达。结果:TACI-Ig降低AA大鼠MLNLs增殖能力;降低CD3+/CD4+和CD4+/CD25+T细胞,升高CD4+/CD62L+T细胞的百分含量;降低AA大鼠MLNLs中IL-17水平和TACI蛋白表达。结论:TACI-Ig对MLNLs增殖活化、细胞因子分泌及受体蛋白表达均有抑制作用。

TACI-Ig对佐剂性关节炎大鼠T细胞反应的调节作用

目的：研究TACI受体融合蛋白（ TACI-Ig）对T细胞介导的免疫性关节炎的调节作用,探讨其调控T细胞反应的部分机制。方法 SD大鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂建立大鼠佐剂性关节炎（ AA）模型。随机分为8组：正常组,模型组,TACI-Ig（0．7、2．1、6．3 mg/kg,皮下注射,第16-34天）治疗组,阳性对照组：重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白（rhTNFR：Fc）（2．8 mg/kg,皮下注射,第16-34天）和甲氨蝶呤（MTX）（0．5 mg/kg,灌胃,第16-34天）,阴性对照组：免疫球蛋白G（IgG）-Fc（6．3 mg/kg,皮下注射,第16-34天）。 X线摄片观察四肢关节破坏情况；ELISA法检测外周血和滑膜组织匀浆白细胞介素17（ IL-17）的水平；流式细胞仪检测外周血和脾脏总 CD4^＋ T 细胞（ CD3^＋CD4^＋）、活化CD4^＋T细胞（ CD4^＋CD25^＋）、未致敏CD4^＋T细胞（CD4^＋CD62L^＋）和记忆 CD4^＋ T 细胞（ CD4^＋ CD44^＋）比例；免疫组化法检测滑膜组织跨膜激活剂和钙调亲环素配体相互作用分子（ TACI）、B细胞成熟抗原（ BCMA）和B细胞活化因子受体（ BAFF-R ）受体蛋白表达。结果 TACI-Ig （6．3 mg/kg）明显减轻 AA 大鼠关节软组织肿胀；TACI-Ig （0．7、2．1、6．3 mg/kg）降低外周血和滑膜组织IL-17含量,升高总CD4^＋T细胞、活化CD4^＋T细胞、记忆 CD4^＋T细胞和未致敏CD4^＋T细胞比例,下调AA大鼠滑膜组织中TACI和BCMA蛋白表达,上调BAFF-R蛋白表达。结论 TACI-Ig调节免疫性关节炎大鼠异常的T细胞反应,改善关节损伤,发挥其免疫调控作用,可能与其调节TACI、BCMA和BAFF-R受体表达有关。

泼尼松和TACI-Ig联合用药对MRL／lpr小鼠产生自身抗体的作用及机制

目的研究泼尼松和跨膜激活和钙调和亲环素配体相互作用因子融合蛋白(TACI-Ig)联合用药对系统性红斑狼疮MRL/Mpslac-lpr(MRL/lpr)小鼠的治疗作用及部分机制。方法将MRL/lpr小鼠随机分为6组,即模型组、醋酸泼尼松(Pre)组(2.5、5.0 mg/kg)、TACI-Ig组(15.0 mg/kg)、Pre+TACI-Ig[(2.5+7.5)、(2.5+15.0)mg/kg]联合用药组,另设BALB/c小鼠作为正常对照组。各给药组小鼠每日灌胃给予Pre,TACI-Ig隔日皮下注射给药,模型组和正常对照组给予生理盐水,共计13周。观察联合用药对小鼠一般体征和尿蛋白的影响,HE染色法检测小鼠脾脏和肾脏病理学变化,ELISA法检测小鼠血清中自身抗体和B细胞活化因子(BAFF)水平的变化,流式细胞术检测脾脏浆细胞亚群比例,免疫组化法检测脾脏CD138的变化。结果 Pre和TACI-Ig联合用药可以改善MRL/lpr小鼠皮肤损伤,降低尿蛋白,明显减少脾脏生发中心形成和白髓增生,显著减轻小鼠肾脏肾小球系膜细胞增生和肾小球纤维化,改善炎症状态,降低脾脏浆细胞(CD19-CD138+)的比例,降低血清BAFF和抗核抗体(ANA)水平,但是对抗ds-DNA抗体水平无明显影响。结论 Pre和TACI-Ig联合用药对MRL/lpr小鼠具有治疗作用,其机制可能与抑制浆细胞分化、降低自身抗体产生有关。

TACI-Ig融合蛋白对小鼠视神经病理损伤的影响

目的·探讨腹腔注射TACI-Ig融合蛋白对小鼠视神经炎症浸润、髓鞘完整性等的影响。方法·将24只C57BL/6J小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、生理盐水注射组、TACI-Ig低剂量注射组(0.4 mg/kg)、TACI-Ig高剂量注射组(4 mg/kg),每组6只。TACI-Ig隔日腹腔注射1次,生理盐水对照组按照同样方式注射生理盐水0.2 mL,空白对照组不给予任何干预。20日后将小鼠麻醉灌注,取眼球和视神经组织,石蜡包埋,切片后行苏木精-伊红(H-E)染色和固蓝(LFB)染色,分别观察炎症细胞浸润情况和髓鞘脱失情况。结果·H-E染色可见空白对照组和生理盐水对照组着色均匀,视神经纤维排列紧密、规则;TACI-Ig低剂量注射组(0.4 mg/kg)视神经结构与两对照组类似;高剂量注射组(4 mg/kg)细胞均匀分布,可观察到炎症细胞少量浸润,炎症细胞浸润评分与其他组比较无明显差异(P=0.610 3)。所有组别视网膜结构清晰、层次分明,神经节细胞单层紧密排列、胞体完整、胞核可见、分布均匀,各组实验动物视网膜各层结构相比较并无明显差异。经LFB染色后光学显微镜下观察,发现视神经髓鞘均无明显脱失和损伤情况,4组之间比较差异无统计学意义(P=0.473 6)。结论·低剂量(0.4 mg/kg)TACI-Ig腹腔注射对视神经、视网膜神经节细胞无损伤,高剂量(4 mg/kg)可能引起视网膜区域炎症少量浸润。