泛素连接酶E4B介导PM20D2、PABPC1和TACO1蛋白质的泛素化验证

泛素连接酶E4B通过U-box基序可将经泛素活化酶(Ubiquitin-activating enzyme, E1)和泛素结合酶(Ubiquitin-conjugating enzyme, E2)传递的泛素(Ubiquitin, UB)标记至底物蛋白质。探究3个蛋白质:金属蛋白酶M20家族蛋白质2(Peptidase M20 domain-containing protein 2,PM20D2)、多腺苷酸结合蛋白质1(Polyadenylate-binding protein 1,PABPC1)、细胞色素C氧化酶Ⅰ翻译激活剂(Translational activator of cytochrome C oxidase Ⅰ,TACO1)是否可被E4B介导泛素化。从HEK293细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以其为模板调取底物基因并构建重组质粒,利用大肠杆菌表达系统表达并纯化泛素化过程所需的各个相关蛋白质,通过蛋白质体外泛素化实验,对3个蛋白质进行泛素化验证。结果表明3个蛋白质均可以在蛋白质水平被E4B泛素化,证明3个蛋白质都是E4B的底物,为进一步在细胞中研究其泛素化的机理奠定基础。

基于HRM技术的小麦光周期基因功能标记的开发和应用

根据前期研究小麦光周期基因TaCO9-1A在春性品种和冬性品种间存在的差异,开发特异的分子标记TWS[T代表小麦(Triticum aestivumL.),W代表冬性(winter),S代表春性(spring)],利用该标记通过高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve,简称HRM)技术对典型的强冬性品种中麦895、春性品种宁春4号、223份小麦自然群体及冬春杂交的2个F_2代群体进行基因分型,并利用传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE)检测方法进行分型验证。结果表明,HRM技术能准确、快速地检测出样本基因型,结果与聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果完全一致,223份材料中99份材料为春性小麦(TS)型,124份材料为冬性小麦(TW)型,F_2代分离群体中可明确分离TW、TS/W(杂合)、TS基因型,且分离比为1∶2∶1,说明该标记可应用于自然群体及F_2代分离群体的基因分型。田间调查及关联分析表明,TWS标记与小麦春冬性及早熟性显著关联(P <0. 01)。该标记的开发及其高通量分子检测方法的应用对小麦分子标记辅助选择育种、小麦品种冬春性检测及品种区划布局等具有重要的指导作用。