升阳益胃汤对溃疡性结肠炎模型大鼠HIF-1、TAK-1表达的影响

目的:研究升阳益胃汤对溃疡性结肠炎大鼠模型的治疗作用及对HIF-1、TAK-1表达的影响。方法:采用5%葡聚糖硫酸钠溶液灌胃造模,随机分为两组,即正常对照组和模型组,造模成功后,模型组又分为模型对照组、升阳益胃汤高剂量组、中剂量组、低剂量组及西药组。模型组和正常组给予等容的蒸馏水灌胃,药物组按各自剂量采取灌胃途径给药,连续28 d后,将大鼠麻醉取材,检测指标。结果:模型组和升阳益胃汤低剂量组大鼠DAI显著升高;西药组和升阳益胃汤中、高剂量组大鼠DAI显著降低。病理示,升阳益胃汤各剂量组和西药组结肠组黏膜仍可见腺体及杯状细胞,虽仍可见炎性细胞浸润,但明显少于模型组,其中高剂量组和西药组效果较好。ELISA示,HIF-1:模型组和西药组均较正常对照组显著升高,西药组和高、中、低剂量组均模型组显著降低,高、中、低剂量组均较西药组显著降低。TAK-1:模型组、西药组、低、高剂量组均较正常对照组显著升高,低、中剂量组较模型组显著降低,中剂量组较西药组、及低、高剂量组TAK均显著降低。结论:升阳益胃汤可降低溃疡性结肠炎大鼠HIF-1和TAK-1的表达,抑制炎症的反应,从而对本病起到治疗作用,且有一定的量效关系。

黄芩苷通过调控TGF-β1/TAK-NF-κB通路对胰腺纤维化的防治作用

目的:观察黄芩苷对慢性胰腺炎(CP)小鼠胰腺组织转化生长因子β1(TGF-β1)/TGF-β活化激酶(TAK)-核因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芩苷防治胰腺纤维化的作用机制。方法:健康雄性昆明小鼠58只,随机分为空白对照组、CP模型组和黄芩苷治疗组。除空白对照组外,其余小鼠均给予腹腔注射20%L-精氨酸诱发CP,治疗组于造模后2周开始腹腔注射黄芩苷(100 mg/kg,每天1次)。造模后2周、4周和6周分别处死动物,下腔静脉采血,摘取小鼠胰腺组织,HE及Masson染色检测各组小鼠胰腺组织形态学改变及纤维化程度;ELISA检测血清TGF-β1的表达;免疫组织化学法观察胰腺组织纤维连接蛋白(FN)和NF-κB的表达;Western blot检测胰腺组织FN、转化生长因子βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)、磷酸化TAK1(p-TAK1)及NF-κB蛋白的表达;real-time PCR检测胰腺组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)及金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的mRNA表达。结果:腹腔注射20%L-精氨酸2周、4周和6周后,HE及Masson染色显示胰腺组织有纤维沉积,FN表达升高;而黄芩苷治疗后小鼠的胰腺损伤及胶原纤维沉积程度明显减轻,FN表达减少(P<0.01)。CP模型组小鼠胰腺组织TGF-β1、TGF-βRⅠ、p-TAK1、NF-κB及TIMP-1的水平均升高,MMP-1表达降低;而黄芩苷治疗组TGF-β1、TGF-βRⅠ、p-TAK1、NF-κB及TIMP-1的水平降低,MMP-1表达升高(P<0.01)。结论:黄芩苷通过抑制TGF-β1/TAK-NF-κB信号通路的活化,调节MMP-1/TIMP-1的相对平衡,发挥抗CP小鼠胰腺纤维化的作用。

TAK-733对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞生物学行为影响的研究

目的探究一种新型MEK 1/2抑制剂(R)-3-(2,3-二羟丙基)-6-氟-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-8-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)对人甲状腺乳头状癌(PTC)人甲状腺乳头状癌(TPC)-1细胞生物学行为的影响。方法取生长状态良好,处于对数生长期的TPC-1细胞,将其随机分为2.5、5、10μmol/L组和对照组,各组分别作用24、48、72 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力。各组分别作用24、48 h,利用流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡。划痕愈合实验检测各组TPC-1细胞在作用24 h后细胞的迁移情况。结果与对照组相比,TAK-733处理后的TPC-1细胞的增殖抑制率增高,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);TAK-733各组TPC-1细胞凋亡率和TPC-1细胞G_(1)/G_(0)期所占比例均高于对照组(P<0.05),S期和G_(2)/M期细胞比例降低(P<0.05),呈时间和剂量依赖性;划痕愈合程度呈浓度依赖性降低(P<0.05)。结论TAK-733对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖和迁移具有抑制作用,可阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。

黑龙骨对CIA大鼠炎症反应的调节作用机制

目的:研究黑龙骨水溶性成分对CIA大鼠炎症反应的调节作用及机制。方法:随机选取雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、尼美舒利阳性对照组及黑龙骨高(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组。除正常对照组外,其余各组复制CIA模型。给药6 w后免疫组化法和免疫蛋白印迹法检测脾和滑膜TAK-1、TAB-1、NF-κBp65蛋白表达,ELISA检测血清MCP-1、CXCL-1、MIP-1含量。结果:与模型组比较,免疫组化显示黑龙骨高剂量组脾组织TAK-1、TAB-1、NF-κBp65蛋白表达显著降低,免疫蛋白印迹显示黑龙骨高剂量组脾和滑膜内TAK-1、TAB-1、NF-κBp65蛋白表达显著降低;ELISA显示黑龙骨高剂量组血清MCP-1、CXCL-1含量显著降低。结论:黑龙骨水溶性成分可能通过调节TAK-1、TAB-1、NF-κBp65、MCP-1、CXCL-1蛋白对CIA模型大鼠炎症反应起到抑制作用。

HSP90α抑制剂17-AAG抑制甲状腺癌细胞增殖和迁移机制探讨

目的在体内,热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,HSP90α)对肿瘤的发生发展起着重要的作用。HSP90α抑制剂在体内可阻断肿瘤赖以生存的信号通路网络。本研究探讨HSP90α特异性抑制剂烯丙胺基-17-去甲氧基格尔德(17-allyl-amino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响及相关信号分子的调控机制。方法体外培养甲状腺乳头状癌细胞TPC-1和甲状腺未分化癌细胞TAK,分别给予0.001～10.000μmol/L浓度的17-AAG作用24和48h。MTT实验、划痕实验观察细胞生长和迁移情况。蛋白质印迹法检测细胞HSP90α及信号传导及转录激活因子(signal transducers and activators of transcription,STAT3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,AKT)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)相关信号蛋白的表达及磷酸化水平变化。结果与未处理的细胞相比,经0.001～10.000μmol/L浓度的17-AAG作用24和48h的TPC-1和TAK细胞增殖能力降低,且有明显的时间和剂量依赖性。TPC-1(F=7.326,P=0.005)和TAK细胞(F=22.770,P<0.001)浓度组间比较差异有统计学意义,时间组间比较差异有统计学意义,F值分别为1 048.000和663.800,均P<0.001。与未处理的细胞相比,经0.1和1.0μmol/L浓度的17-AAG作用24h的TPC-1和TAK细胞迁移能力降低,各浓度组间比较差异有统计学意义,F=1.228,P<0.005;两细胞株间比较差异无统计学意义,F=0.365,P=0.578。经0.1和1.0μmol/L浓度的17-AAG作用24h的TPC-1和TAK细胞以及STAT3、AKT、ERK蛋白磷酸化水平降低,却对STAT3和ERK总蛋白表达影响差异无统计学意义,P>0.05。结论 17-AAG通过下调甲状腺癌细胞HSP90α相关信号蛋白STAT3/AKT/ERK磷酸化水平,从而抑制甲状腺癌细胞的增殖和迁移能力。

TLR4对大鼠急性脑梗死体积与Nrf2、HO-1表达水平的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)对大鼠急性脑梗死体积与核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)表达水平的影响。方法制备大鼠急性脑缺血模型后,比较模型组与TLR4特异性抑制剂-TAK-242组行为学及脑梗死体积、Nrf2、HO-1表达水平改变;通过Morris水迷宫实验比较不同组小鼠脑梗死后学习功能的恢复;TTC染色比较不同组脑梗死体积变化;免疫组织化学染色及Western Blot比较各组Nrf2、HO-1表达水平变化。结果与假手术组比较,模型组与TAK-242组潜伏期延长,穿越平台次数减少,同时TAK-242组潜伏期明显短于模型组(P<0.05);TAK-242组穿越平台的次数明显多于模型组(P<0.05)。TAK-242组脑梗死体积明显小于模型组(P<0.05)。Nrf2、HO-1主要表达在神经元与星形胶质细胞中。另外,假手术组Nrf2、HO-1的表达水平明显低于模型组与TAK-242组,同时TAK-242组Nrf2、HO-1的表达水平明显高于模型组。3组大鼠Nrf2、HO-1表达水平有明显差异(P<0.05),且TAK-242组Nrf2、HO-1的表达水平显著高于模型组(P<0.05)。结论通过TLR4特异性抑制剂-TAK-242干预可以显著改善大鼠急性脑缺血的神经功能,减小脑梗死体积,促进神经元与星形胶质细胞Nrf2、HO-1的表达。