基因打靶技术及其应用前景

基因打靶是近年来发展起来的对细胞基因组中的某一基因进行定点操作的生物技术。综述了基因打靶的筛选系统 ,影响基因打靶效率的几个主要因素及其解决方法 ,总结了基因打靶在各个学科领域中的应用。

基因打靶技术研究及其应用

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的新技术，是一种利用DNA同源重组原理和胚胎干细胞（embryonic stem ceils，ESCs）技术按定向组合的方式改变生物活体遗传信息的实验手段，具有定位性强、打靶后新的基因随染色体DNA稳定遗传的特点，其方法包括基因敲除、基因敲人、点突变、缺失突变、染色体组大片段删除等，相关的基因工程技术包括转基因、基因沉默和基因捕获等。基因打靶技术为生命科学、基因组学和疾病治疗等领域的研究提供了强大的工具。

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是20世纪80年代后期发展起来的前瞻性很强的遗传工程技术,该工程技术在先后经历了同源重组和以自身作为选择标记的同源重组以及采用正、负选择系统进行靶位精细操作的同源重组3个阶段后,很快发展成为日臻成熟的高频率基因操作技术,并在理论研究与工程实际中得到了广泛应用,其发展前景也极为广阔。作者在本文重点介绍了基因打靶技术近年来的研究及应用情况。

组织特异性KNOCKOUT小鼠──基因打靶技术的新突破

组织特异性ＫＮＯＣＫＯＵＴ小鼠──基因打靶技术的新突破姜宇飞（北京医科大学免疫系北京１０００８３）近十年来，分子生物学研究得到了迅猛的发展。转基因技术及基因Ｋｎｏｃｋｏｕｔ技术为人们在动物体内分析某一特定基因的功能提供了有力的手段。转基因技术是导入一...

基因打靶用于哺乳动物体细胞核移植技术研究进展

哺乳动物体细胞核移植技术以其供核效率高而在动物克隆技术中占有明显的优势 ;基因打靶技术通过外源 DNA与染色体 DNA间的重组可达到定点修饰、改造基因组的目的。它与体细胞核移植技术相结合具有巨大的技术优势和广阔的应用前景。将为畜牧生产和医学生物学的研究带来前所未有的价值。

MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用

目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。

基因打靶技术的研究进展

基因打靶技术是一项新兴的分子生物学技术,是利用外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组,并整合在预定位点上,从而改变细胞遗传特性的方法。它的产生是遗传工程领域的一次革命,为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究手段。目前基因打靶技术在研究基因的结构和功能、表达与调控,转基因及基因治疗等方面均取得了进展。但基因打靶技术仍存在一些问题,主要是打靶的效率太低。本文综述了基因打靶技术的原理、操作程序并对提高基因打靶效率的可能途径进行了探讨。

体细胞多位点基因打靶技术的研究

利用多拷贝序列作为靶位点进行多位点基因打靶技术的研究。通过显微切割、菌落杂交、Southern杂交等方法获得人类D、G组染色体短臂多拷贝序列(DGMS),然后利用DGMS构建含Neo/TK基因正负选择系统的基因打靶载体。采用电穿孔、G418和GCV筛选进行Neo基因的基因打靶,并经PCR、FISH定位、Neo基因表达等证实Neo基因定点整合到D、G组染色体短臂且表达,最终建立了一种有效的、多个安全位点的基因打靶技术。该技术可应用于体外细胞和动植物的转基因,甚至人类的基因治疗。

基因打靶技术在现代生物学研究中的应用

尽管基因打靶技术的先驱者2007年才获得诺贝尔生物学或医学奖,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用却已经有25年的时间.基因打靶技术的发明和应用革命性地改变了现代生物医学研究的面貌,催生了许多生物医学和药物研发领域的前沿研究,并直接导致了生物医学研究领域中的许多突破性进展.基因打靶技术的发明使得科学家第一次能对关于特定基因生理功能的假设进行实验验证,并通过基因打靶研究真正建立基因和疾病间的因果关系.近年来,基因打靶技术在现代生物学研究中的应用日益深入和广泛.

基因打靶技术在动物生产中的应用

基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的一项分子生物学技术，它利用基因转移的方法，将外源DNA序列导入靶细胞，通过外源DNA序列与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的重组，将外源DNA定点载入靶细胞基因组上某一特定的位点，或对某一预先确定的靶位点进行定点突变，从而改变细胞的遗传性状，实现精确、定向的基因删除或替代，而不累及其它基因。

植物基因打靶技术及其应用

对植物基因打靶技术的原理、操作程序、打靶效率的影响因素及其在植物中的应用现状进行了综述,并就如何有效地提高打靶效率提出了建议,同时对该技术在植物学研究领域中的应用前景进行了展望。

利用TALEN打靶技术建立果蝇心脏发育候选基因Yippee突变品系

研究工作者们一直致力于寻找一种在模式生物中进行精确基因修饰的方法。近期基于TALENs的基因打靶方法受到广泛的注意,并在包括果蝇、斑马鱼、小鼠及人类多潜能细胞的多物种中取得成功。在这里,我主要介绍基于TALENs的基因修饰在果蝇模型中的应用以及果蝇心脏发育候选基因Yippee的敲除。首先,我们设计并拼接好了Yippee基因的TALENs靶位点序列,连接在核酸酶Xmn I的催化区域。在核酸酶的作用下产生双链的断裂,随后在非同源末端连接物修复系统(NHEJ)的修复下导致Yippee基因的消除或部分缺失。经过检测,得到Yippee基因的TALENs打靶效率约为9%。

基因打靶技术在构建人源体细胞基因敲除或敲入细胞系中的应用

基因打靶技术能够帮助人们认识某些动物个体或细胞表型异常的遗传基础，利用该技术构建的模式生物（例如基因敲除小鼠）已经广泛地应用于人类基因的研究，截至1999年就已经报道了800多个模式小鼠种系。同源重组介导的基因打靶技术（基因敲除或敲入）是判定基因功能的强有力工具。与基因敲除小鼠相比，人类体细胞基因敲除或敲入细胞系构建的报道相对较少，但该项技术在细胞水平上对某些人源基因参与的生化或生理途径的分析是不可替代的。基因打靶技术最常见的应用是通过使所有等位基因连续失活建立基因敲除细胞系；

基因打靶技术及其应用

基因打靶技术是通过将外源DNA的同源序列和活细胞内的染色体DNA发生同源重组,达到定点修饰染色体上某一特定基因的一种分子生物学技术。它与克隆技术的结合发展为畜牧生产中的动物育种工作开辟了广阔的前景,为人类带来更多、更好的食物和药物,人类健康将获得更好的保障。

基因打靶技术及其发展和应用

通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定位点的基因打靶技术,已经成为哺乳动物遗传学领域的重要工具。本文拟针对胚胎干细胞和体细胞的基因打靶的原理、技术路线及基因打靶技术的发展和应用作一综述。

基因打靶技术及其研究进展

简要阐述了基因打靶的概念和基本环节 ,系统介绍了筛选方法和基因打靶的策略。基因打靶在基因功能研究、家畜遗传改良、人类疾病动物模型的建立和基因治疗等方面有着广阔的应用前景。